GB/T 21033-2007饲料中免疫球蛋白IgG的测定高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T21033—2007
饲料中免疫球蛋白IgG的测定
高效液相色谱法
Determination of immunoglobulin in feeds-High-performance liquid chromatography2007-06-21发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2007-09-01实施
1范围
饲料中免疫球蛋白IgG的测定
高效液相色谱法
本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中免疫球蛋白IgG含量的方法。KAKAca
GB/T21033—2007
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、含IgG的饲料原料（包括血浆蛋白粉等）中免疫球蛋白IgG的测定。最低检出限为5rg(取样1g，最低检出浓度为5mg/kg）)。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接，在pH2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。4试剂
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为去离子水或相当纯度的水，应符合GB/T6682二级用水的规定。
4.1磷酸二氢钾。
4.2磷酸氢二钾。
4.3流动相A：pH6.5,0.05mol/L磷酸盐缓冲液。4.4流动相B：pH2.5,0.05mol/L甘氨酸盐酸缓冲液。4.5IgG储备标准液：
称取IgG标准品（纯度≥95%)0.0100g，用流动相A（4.3）溶解并定容至10.0mL，摇匀，浓度为1.0mg/mL.
4.6IgG工作标准溶液：
取IgG标准储备液，用流动相A（4.3）稀释成含IgG0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/mL的标准系列。临用时配制。
仪器和设备
5.1实验室常用仪器设备。
5.2pH计。
5.3超纯水装置。
5.4勾浆机。
GB/T21033--2007
5.5高效液相色谱仪：具紫外检测器和梯度洗脱装置。6试样制备
按GB/T14699.1采样，按GB/T20195选取饲料样品至少500g，四分法缩减至少100g，磨碎，通过0.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。7分析步骤
7.1试样处理
称取一定量试样（精确至0.0001g)（配合饲料、浓缩饲料称取试样2g~5g；血浆蛋白粉称取试样0.1g：鸡蛋粉称取试样0.5g）于茄形瓶中，准确加入25.0mL流动相A（4.3），用匀浆机匀浆5min，取溶液10mL于离心管中，以1000g(3500r/min)离心10min。通过0.45μm微孔滤膜后进样。7.2测定
7.2.1HPLC测定参数的设定
色谱柱：PharmaciaHI-TrapProteinG柱，lmL。波长：280nm。
进样量：20μL。
7.2.2梯度洗脱条件
梯度洗脱条件见表1。
表1梯度洗脱条件
时间/min
7.2.3测定
流速/（mL/min）
流动相A/%
流动相B/%
7.2.3.1先用5倍柱体积的重蒸馏水或去离子水洗柱，再用10倍柱体积流动相A（4.3）平衡柱，按洗脱程序进行洗脱。
7.2.3.2分别取7.1试样处理液和4.6标准工作液进行测定。以色谱峰面积积分值做单点或多点校准定量。
8结果计算
8.1试样中IgG含量，以质量分数表示，数值以%表示，按式（1)计算：P:XV×c×V.X100
P.xmxV.x1000
式中：
试样峰面积值；
V-—试样体积，单位为毫升（mL）：标准工作液（4.6）中IgG的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；V.—标准工作液进样体积，单位为微升（uL)；P—-标准工作液峰面积值；
称取试样的质量，单位为克（g）；（1)
V试样进样体积，单位为微升（μL）。8.2平行测定结果用算术平均值表示，保留小数点后两位有效数字。重复性
ikAoNikAca
GB/T21033—2007
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的测定值的绝对差值不得超过算术平均值的15%。