GB/T 21037-2007饲料中三甲氧苄胺嘧啶的测定高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T21037—2007
饲料中三甲氧芒胺嘧啶的测定
高效液相色谱法
Determination of trimethoprim in feeds-High performance liquid chromatography2007-06-21发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2007-09-01实施
1药园
饲料中三甲氧芙胺嘧啶的测定
高效液相色谱法
CB/T210372C07
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5.3分析天平：感量为0.0001g。5.4旋涡混合器。
5.5离心机。
5.6超声波清洗器。
6试样制备
按GB/T14699.1规定，取有代表性的样品1kg，四分法缩减取约200g，经粉碎，全部过孔径0.45mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。7分析步骤
7.1试样提取
称取一定量的试样（配合饲料约2g，浓缩饲料约1g，预混合饲料约1g，准确至0.001g），置于50mL离心管中，加人10mL乙酸钠溶液（4.4）和20mL二氟甲烷，水浴超声15min，每隔5min涡动一次，每次涡动1min，3800r/min离心10min。7.2净化
用10mL注射器吸取10mL的下层二氯甲烷于10mL离心管中，3800r/min离心10min。小心吸取再次离心过的二氯甲烷提取液2mL于另一个10mL离心管中，40℃下氮气吹干。加入1mL乙酸溶液（4.5），涡动10s，再加人2mL正已烷，涡动20s，3800r/min离心10min。下层水相用2mL正已烷重复洗涤一次。经孔径为0.45μm滤膜过滤后用高效液相色谱分析。7.3测定
7.3.1液相色谱条件
色谱柱：Cig柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或相当者；柱温：35℃；
流动相：0.5%乙酸溶液（4.6）+甲醇，75+25（V1+V，）；流速：0.5mL/min；
检测波长：270nm；
进样体积：50μL。
7.3.2液相色谱测定
分别取适量的标准工作液和试样溶液，按7.3.1列出的条件进行液相色谱分析测定。以标准工作液作单点或多点校准，并用色谱峰面积积分值定量。测定中应注意调整试样溶液的浓度，使三甲氧苄胺嘧啶的积分值落在标准曲线的相应范围内，并在试样溶液分析间适当穿插标准工作液，以确保定量的准确性。所得三甲氧芋胺嘧啶的色谱图见图1。0.005-
6.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.00(min)图1
400ng/mL标准溶液色谱图
8结果计算与表述
饲料中三甲氧芊胺嘧啶的含量X，以质量分数（mg/kg)表示，按式（1)计算：X=cV.n
式中：
一试样液中对应的三甲氧芋胺啶的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；试样液总体积，单位为毫升（mL)；V
一稀释倍数；
m—饲料样品质量，单位为克（g)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9
精密度
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GB/T21037-2007
（1）
同一实验室由同一操作人员使用同一台仪器完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于15%。