本标准规定了化学品生物富集流水式鱼类试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。本标准适用于测试与评价gPow值在1.5~6.0之间的稳定的有机化学品的生物富集性，也适用于测试与评价1gPow＞6.0的高度亲脂性的物质的生物富集性。 GB/T 21800-2008 化学品 生物富集 流水式鱼类试验 GB/T21800-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net
本标准规定了化学品生物富集流水式鱼类试验的方法概述、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。 本标准适用于测试与评价gPow值在1.5~6.0之间的稳定的有机化学品的生物富集性，也适用于测试与评价1gPow＞6.0的高度亲脂性的物质的生物富集性。
本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.305(1996年),《生物富集:流水式鱼类试验》(英文版)。
本标准做了下列编辑性修改:
---将计量单位改为我国法定计量单位。
本标准的附录A、附录B、附录C、附录D 和附录E 为资料性附录。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本标准负责起草单位:环境保护部化学品登记中心。
本标准参加起草单位:上海市检测中心、上海市环境科学研究院、环境保护部南京环境科学研究所。
本标准主要起草人:于相毅、毛岩、卢玲、赵华清、殷浩文、沈根祥、孔德洋。


前言Ⅰ
1 范围1
2 术语和定义1
3 受试物信息1
4 方法概述2
5 仪器设备2
6 试验准备3
7 试验程序3
8 质量保证与质量控制6
9 数据与报告6
附录A (资料性附录) 合格稀释水的化学特性8
附录B (资料性附录) 推荐使用的试验鱼9
附录C (资料性附录) 吸收阶段和清除阶段持续时间的预测10
附录D (资料性附录) lg犘ow为4的受试物的生物浓度试验取样的理论样例12
附录E (资料性附录) 生物富集系数指数模型的计算13
参考文献15

ICs 13.300;13. d20. 40
中华人民共和国国家标准
GB/T 21800-2008
化学品
生物富集
流水式鱼类试验
Chemicals-BioconcentrationFlow-through fish test2008-05-12发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-09-01实施
GB/T 21800—2008
术语和定义
受试物信息
方法概述
议器设备
试诚验准备
试验程序
质量保证与质屋控制
数据与报告
附浆A（资料性附录）
附录B（资料性附录）
附录℃（资料性附录）
附录D(资料性附录)
附录E（资料性附录)
参考文献
合格稀释水的化学特性
推荐懂用的试验鱼
吸收阶段和清除阶段持续时间的预测IgP为4的受试物的生物浓度试验取样的理论栏例生物富集系数指数模型的计算…10
GB/T 21800—2008
本标准等同采用经济合作与发展组织(0ECD)化学品测试导则No.305（1996年)，《生物富集：流水式鱼类试验》（英文版)。
本标推做了下列编辑性修改：
将计量单位改为我国法定计量单位。本标推的附录A、附录B.附录C、附录D和附录E为资料性附录。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。本标雅负责起草单位：环境保护部化学品登记中心。本标准参加起草单位：上海市检测中心、上海市环境科学研究院、环境保护部南京环境科学研究所。本标准主要起草人：于相毅、毛岩、卢玲、赵华清、殿浩文、沈根样、孔德洋。1范围
化学品
生物富集流水式鱼类试验
GB/T 21800—2008
本标准规定了化学品生物富集流水式鱼类试验的方法概述、试验准备，试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。
本标准适用于测试与评价1gP值在1.5-6.0之闻的稳定的有机化学品的生物高集性：也适用于测试与评价1g。>6.0的高度亲脂性的物质的生物富集性。2术语和定义
下列术语和定义适用于本标推。2.1
生物富集bioconcentration
试验生物体（或特定组织）内某种受试物的浓度相对于试验介质中该物质浓度的增加。2.2
生物富集系数bioconcentrationfactor，Bc试验吸收阶段的任何时间，试验生物体（或特定组织）内某种受试物浓度与试验介质中该物质浓度的比率。BCF也可由动力学方程速率带数(K,/K,)直接计算得到，记为BCFk。2.3
稳定态plaleau or steady-state受试物在鱼体中浓度对应时间所绘的曲线与时间轴趋于平行(变化幅度在土20%)时状态。2.4
稳定态生物富集系数/稳定态生物慧积系数stcady statebioconcentrationfactor，BCF在稳定态下，试验生物体(或特定组织)内某种受试物浓度与试验介质中该物质浓度的比率。2.5
octanol-water partition coefficient, P..正辛醇-水分配系数
物质在正辛醇-水两相介质中达到平衡时的浓度之比。通常以P。表示。2.6
吸收速率常数Eptake rate constant,K,受试鱼暴诱于含有受试物质的介质中，鱼体或其特定组织中受试物浓度增加速率。通常以d-1表示。
清除速率常数depuration（loss）rateconstant,K受试鱼从含有受试物质的介质中转移到不含受试物质的介质中后，鱼体或其特定组织中受试物浓度降低的速率。通常以d-1表示。3受试物信息
a）水中溶解度：
b）正辛醇-水的分配系数（P.);）水解性：
GB/T 21800—2008
在太阳光或模拟太阳光和在生物富集试验光照条件下，测定化学品在水中的光转化作用；表面张力（若无P时）；
蒸气压；
快速生物降解性试验结果：
受试物质对受试鱼的毒性,如 LCs值；合适的分析方法(已知准确度,精确度和灵敏性)；样品制备和储存的详细资料：
受试物质在水中和鱼体内的分析检测搬；k)
当受试物质使用14C标记时啦了解放射物质携带杂质的旨分率。4方法概述
4.1原理
生物富集试验包括真
：暴露(哦
在吸收阶段，将受武查
露于两
证明在此之前已达到
栗在28 d 内尚未达
段收寻衡。附
状态，吸
在吸收达到稳定状
后，将受读Www.bzxZ.net
可少，除非在吸收弄
试物的吸中
在整个测试进
，定时测定查
验之外，应设置空
生物富集系类！
F>的计算选
的模型(见附录EC
用实测的受误物在鱼体内的浓
生物富集系数的置食
BCF 值一般以
(内脏)时，可用特定组
湿重表示
慈器言（如
，应#
物质在受试鱼体内浓度的间
4.2参比物
无推荐参比物。
仪器设备
溶解氧测定仪：
水硬度计，
pH计；
分析天平：
TOC分析仪，
受试物分析仪器；
样品前处理仪器设备：
连续配制和分配系统；
水质测定仪器；
段和暴萨
含有变试物目
中用饮
中的浓度拟和样
试鱼体
化学惰性材料制放的水族工具；k)
温度控制设备。
含量。
余阶段。
骏敢阶身
-般为 28 d,除非能
阶段的无数和稳定状态时间。如最长为60d。
贡，清除阶段开娃。清除阶段必不量。除两组不同依度的受试物试型明显不适拥时，应选用更复杂掌啵收速率常数清除速率常数利可食用部分（鱼肉）和非食用部分生受试物质（P>3)，在测定受试o
6试验准备
6.1受试鱼类
GB/T 21800—2008
6.1.1危种的选择
鱼种选择的标准：易于获得、大小合适和实验室内易于驹养。也包括娱乐、商业、生态学价值以及相对灵敏和已成功选用等。
推荐使用的试验鱼种见附录B：也可用其他鱼种，但试验条件应作相应调整，并在报告中说明鱼科选择理由和试验方法。
6,1.2鱼的养
受试查应在与试验温度相同的水中到养2周以上，每天投喂相当于鱼体真1%～2%的饵料。应测定饵料的脂肪和总蛋白含量。建议测定农药和重金属含量，在受试鱼开始到养48h内，记录其死亡率并按下列标准评判：a）7d内试验鱼死亡率大于10%：舍弃整批鱼；b）7d内试验鱼死亡率在5%10%之间：再删养7dc）7d内试验鱼死亡率小于5%：接收本批鱼：如果在第二个7d内，试验鱼死亡率超过5%，舍弃整批鱼。
畸形或虑病鱼不能作为受试鱼，应舍弃。试验期间及试验前两周不应对鱼做任何防治疾病处现。如票试验中使用成年鱼，应报告受试鱼是雄性还是雌性或两者混用。如果试验中雄鱼和雌鱼混用时，两者的脂肪含昼应没有显著性差异。雄鱼和雌鱼应一起喂养。6.2驯葬用水
驯养用水一般来源于无污染，相同水质的天然水。受试鱼种在驯养用水中能够存活、成长和繁殖，并且在驯养期间不产生任何外观或行为异常。水的特性指标至少应包括pH、硬度、颗粒物、总有机碳、铵及亚硝酸盐的含量、碱度和含盐量（仅对海水鱼类而言）。附录A推荐了淡水和海水的部分参数的最大浓度值。
7试验程序
7.1准备
7.1.1试验容器
试验容器应使用化学情性材料制成，对受试验物质没有明显的吸附。建议使用特氟龙材料，不馈钢或玻璃管，将塑料软管减少到最小量。对于有高吸附系数的物质，要求使用硅烷化玻璃。使用过的容器必须废弃。
7. 1. 2 试验用稀释水
稀释水来源和水质同到养用水。在整个试验期间，试验用水的质应保持稳定不变，pH值应保持6.0~8.5，pH值的变化幅度应保持士0.5的范围。稀释水应定期取样分析，包插测定重金属（如Cu,Pb,Zn，Hg，Cd,Ni)、主要的阴离子和阳离子（如Ca2~，Mg+，Na，K+CI-SO.-、杀虫剂（如总有机磷和总有机氯农药）、总有机碳和悬浮物。
稀释水中的天然颗粒物最大可接受质量浓度为5rmg/L（孔径0.45μm滤膜的截留干物质），总有机碳最大可接受数值为2IⅡB/L(见附录A）。整个试验过程中，试验容器内其他来源的有机碳不应超过来自于受试物的有机碳。如使用助溶剂，不应超过10mg/L(士20%)。7.1.3受试物溶液的配制
配制适当浓度的受试物贮备液。建议在稀释水中通过简单地混合或搅拌受试物来配制贮备液。应尽不用或慎用助溶剂或分散3
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剂。可以使用的助溶剂有乙醇、甲醇，乙二醇一甲游醚、乙二醇二甲醚、二甲基甲酰胺和三甘醇。可以使用的分散剂有CremophorRH40(乙氧基化氢化葩麻油），吐温80（脱水山梨醇单油酸酪象氧乙烯醚）、0.01%甲基纤维素和HCO-40(乙氢基化氢化麓麻油）：每天至少更换试验槽5倍体积的水量。试验开始前48h应检查贮备液和稀释水的流速，试验期间每关至少核查一次。检查每个试验槽的水流流速，以保证每个试验稽内或各个试验之间水流流速变化均不超过20%。
7.2试验操作
7.2.1预备试验
优化试验条件，如受试物液度的造择、吸收阶段和清除阶段持续时间。7. 2. 2试验设计
鱼类要暴露在受试物至少2个浓度的求溶液中。通常，较高<或最高)的液度应为急性工Cs的1%，同时该浓度应为水中受试物的方法检出限的10倍以上。最高试铱度也可以通过96hLC：除以恰当的急慢性比率来估请
深可能，也可以选择其他的浓度系列。如要受到VCs的1%和分析下限的限制而不能配制上过
，可以
情况下不得采用大于
当试验中使用
应测定助溶剂的有机族
武溶解度
客剂时，其1
应设立稀释水对照且或助溶剂
7.2.3暴露条件
7.2.3. 1吸收阶
吸收阶段持线
性或辛醇-水的分
特续时间
的预测可以
载（见附录C
吸收阶段的持续时问应持续2
状态，应延长吸收
7.2.3.2清除阶具
消除阶段的时间
一步测
续时间
够为吸收阶
震的时间过长，例如越举品吸：求考虑侵用4标记的受试物。任何主所有试验容靠中的浓度应相同。殿经验或凭借一定的经破
稳定状态或
如到受试物浓度小于积连浓度，10%为止），使用一次指数模型敏视
多式获得，如利用爱试物的水溶解平衡。如果28a时还未达到稳定
间较短的一种方法。
解释），如果盗到95%清除量所
那么清除阶段的时间可以缩短（例质，箫要较长的清除时间以测定清除速率常数，清除阶段时间应取决于鱼体内受试物浓度测定成奔按7.2.3.3受试鱼的数量
各试验浓度所需受试鱼的尾数应保证每次取样测症，母次取样最学4层鱼。如果要求的更大的统计样本，则需要更多鱼居数。
试验时，应选择体章相近的受试鱼，最小的鱼性重外小于最大鱼体重的三分之二。所有的受试鱼应是相同鱼龄，相同来源。应准确记录受试鱼的质量和鱼龄。建议在试验前对受试鱼取样称重。7.2.3.4承载量
推荐使用的承载率为鱼重(湿重)0.1g/(d·L)1.0g/(d·L)，如果受试物浓度波动能保持在土20%内，并且溶解氧浓度不低于60%饱剂值时，可以提高承载量。在选择适当的承裁量时，应考虑鱼种要求的正常生长环境。7.2.3,5喂养
在试验期内，使用到养期间相同的饵料。每天投喂相当于鱼体重1%～2%的饵料。建议在试验前对受试鱼取样称重。可根据最近取样的鱼体重来估算各试验中鱼的质昼，不得称量在试验中的鱼的质量。
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每天喂食之后的30min60min以内，用虹吸清除试验槽中剩余的饵料和鱼类排泄物。在整个试验期间尽可能地保持试验槽干净，以保证有机物的浓度尽可能的低。7.2.3.6光照和温度
试验期间，光周期应为12h~~16h，温度应控制在受试鱼种最造宜温度的士2℃以内（见附录B)。7.2.4水质测定的频率
试验时应测定所有试验容器中的瓷解氧、TOC、pH和温度，对照组和较高或最高试验浓度组应测定总硬度和盐度。在吸收阶段，至少应测定3软落解氧，即试验开始时、吸收阶段中期和结束时。清除阶段每周1次。TOC的测定应在投入受试鱼前（吸收阶段前24h~48h)、吸收阶段和清除阶段至少每周1次。PH应在各个阶段的开始和结束时测定。每个试验测定1次硬度。每日应测量温度，至少要连续监测一个试验容器中的温度，7.2.5受试鱼和水的取样及分析
7.2.5.1受试鱼和水的取样计划
在加入受试鱼之前、吸收阶段和清除阶段，均应采集试验槽中的水样进行受试物浓度测定。水样采集频率应不小于鱼样采集频率，且应在投饵之前进行。在吸收阶段至少采集鱼样5次；在清除阶段，至少4次。在有些情况下，仅这几个样品很难计算出一个足够精确的BCF值，因此在两个阶段中建议增加取样次数(参见附录D)。附录D给出一个取样计划表样例。用其他P的估算值去计算吸收95%的暴露时间，也可得出柜关的计划表，
在吸收阶段应连续取样测定，直到出现稳定态或28d试验期（二者取其短）。如果28d星尚未达到稳定态，应继续取样直到达到稳定态或达60d二者取其短）。在清除阶段开始前，把试验鱼转入清水容器中。
7.2.5.2取样和样品制备
按虹吸原理，使用情性材料管从试验槽的中部区域采集水样供分新测定。应保持容器尽可能的干净，并在吸收和清除阶段检测总有机碳的含量。每次取鱼样时，从试验槽取出适当数量的受试鱼（最少4尾），快速用水冲洗受试鱼，吸干体表水分，用最人道的方法快速致死后称章。鱼样和水样采集后应尽快逊定，以避免降解或其他方面的损失，并近似计算吸收和清除速率。不能即时测定样品时应用适当的方法保存样品。试验开始前应掌握保存特定受试物的方法、贮存时间和提取方法等。
7.2.5.3分析方法
对于特定的受试物，需要检查分析方法的准确性和重现性，以及水和鱼体中该受试物的回收率。另外，稀释水中不得检出变试物。必要时,应校正试验中测得的C,和C值。7.2.5.4鱼样测定
在试验中使用了放射性标记物质时，则能够测定放射标记物总量（包括母体和代谢物），或者湾洗样品后单独测定母体受试物，在稳定态或吸收阶段未（二者取其短）也可鉴定代谢主产物。如果根据放射性标记残余物总量得到的BCF值不小于1000，则有必要鉴别稳定态时鱼体组织中的受试物总残留的降解率是否不小于10%，特别对于农药等特殊类别的受试化合物。如果鱼体组织中的受试物总残留的降率不小于10%，则需测定受试物在水中的降解。通常应测定每尾鱼体内的受试物含量，如果这不可能做到，则每次取样后将相同试验浓度的受试鱼合并，但这将无法进行数理统计分析。如果确实需要进行数理统计，在试验设计时就需充分考虑样品量（受试鱼尾数）。
BCF值可表达为试验鱼体总湿画的函数，对于高亲脂性物质，也可表达为鱼体脂肪含量的函数。如果可能，每次取样都测定鱼样的脂含量。推荐三氛甲烷/甲醇萃取法为标准方法。不同的测试方法得6
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到的结果不会完全相同，所以应给出所用方法的详细步骤。如果可能，脂肪测定和受试物测定应使用相同的样品举取物，因为受试物测定的色谱分析通常都要去除脂肪，试验结束时与开始时的试验鱼的脂肪含量（以mg/kg湿重表示）差值应不大于土25%，时应报告鱼体组织干重，以了解脂肪含量从壶重转化为干重的比率。
8质置保证与质量控制
有效的试验应满足以下的条件：a）温度变动小于士2C；
6）溶解氧液度不小于60%空气饱和值；c）控制受试物在试验照明条件下发生光转化作用，滤除被长小于290Hm的紫外辐射，避免试验鱼暴露于异常的光化产物；
d）在吸收期，试验容器中的受试物浓度保持在测定平均值的土20%范围内；e）直至试验结束时，对照和试验组鱼的死亡率或其他不良影响或疾病小于10%，当试验延长数周或数月时，两组中试验鱼死亡或其他不利影响每月应小于5%，并且在整个过程中不大于30%。
9数据与报告
9.1数据处理
将鱼体（或鱼体特定组织）的受试物浓度按时间绘制在坐标纸上形成曲线，如果曲线已经达到了一个稳定的状态，也就是说，对于时间轴已经变成了一条近似的渐近线，用式（1)计算稳定状态的生物高案系数(BCFu)：
式中：
C—-鱼体织中受试物的平均浓度；C,—一试验液中的受试物平均浓度。C
当稳定状态没有达到时，也能够计算出80%或95%稳定态的BCFs值。(1
动力学富案系数(BCFx)也可用一次指数方程的吸收速率常数K，和清除速率常数K，的比率来确定，清除遮率常数K：道常通过消除曲线（即在图上描绘出的鱼体中受实物浓度对时间的线）来确定。吸收速率常数K，则可根据给定的K，值和来自于吸收曲线的C值计算获得，详见附录E。求取BCF：和K，K.的更好方法是应用非线性参数估计方法软件，否则可用图表法计算K1、K，值。如果清除曲线明显不是一次指数方程，则应使用更复杂的方法（见附录C)和生物统计学方法。9.2试验报告
试验报告必须包括以下资料：
a）受试物：
物理属性及相关的物理化学性质；化学性质数据，包括有机碳含量；如果使用放射性标记物质，标记原子的准确位置和有关放射性杂质的百分比。b)）验生：
学名、品系、来源、预处理、酬养、年龄和个体大小等。c）试验条件：
-—所用试验程序
所用光源类型、特性及光照周期；+
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试验设计，例如试验槽的大小和数量、换水频率，童复数、每个重复的试验鱼数、受试物浓度的个数、吸收期和清除期的持续时间，鱼和水的取样频率；制备试验储备液的方法和储备液更新的频率(当使用了溶剂时，其浓度、对试验液的有机碳含量贡献率)：
设定的试验浓度，试验容器中测定的浓度平均值和其标准偏差、分析方法！稀释水来源,预处理描述、试验鱼在水中生活能力的表现和水质特性：PH、硬度、温度、溶解氧浓度、余氯水平（如果有测定）、总有机碳、悬浮颗粒物、试验介质的含益量和任何其他测定结果；
试验容器中的水质、PH、硬度、TOC、温度、溶解氧喂食的详细信息，如饵料类型、来源、成分（至少包括脂肪和蛋白质含）、喂量和顺率，鱼和水样的处理的信息，包括详细的准备，贮存、萃取、对受试物和肪含量的分析程序和糖确度。
d）结果：
-预备试验得到的结果；
对照组和各暴露组的鱼的死亡率、观察到的鱼的异常行为；鱼的脂肪含量；
曲线（包括所有测试数据），表明直到稳定态吸收和清除阶段鱼体中的受试物情况：对所有取样时间的C和C值（包括标推偏差和变化范围）、对照组C.值以及本底值（C用 mg/g整个鱼体湿重或鱼体特殊组织如脂肪显重或mg/kg表示,C.用mg/g或 mg/kg表示)；
稳定态生物富集系数（BCF）和动力学富集系数（BCF），如有可能，95%置信限的吸收和清除速率常数（以相关的数鱼、鱼体总脂肪含量或其特殊组织衰示），置信限和标准偏差，以及各变试物浓度的计算和数据分析方法当使用放射性标记物质时，在需要的情况下，测得的任何代谢产物：试验中的任何异常情况、试验程序的调及其他相关信息；其他说明项。
e）结果讨论：
测定方法研究的预试验结果应尽可能避免出现类似“方法检测限下未检测到”的结果，因为这将无法用于计算速率常数。GB/T21800—2008
合格稀释水的化学特性见衰A.1。附录A
(资料性附录）
合格稀释水的化学特性
1合格稀释水的化学特性
裘A 1
颗粒物质
总有机碳
游离氨
总有机磷衣药
总有机氨农药与多氯联苯
总有机氯
极限浓度
5 mg/L
1 μg/L
10 μg/ L
50ng/L
50 ng/L
25ag/L
1 μg/L
1 μg/L
1 μg/L
1 pg/L
1 μg/L
1 μg/L
1 pg/L
100 ng/L
100 ng/L
100 ng/L
B.1推荐使用的试验鱼(衰B.1)
试验鱼
斑马鱼(Brachydanio reria)
稀有约卿(Gobiocypris
剑尾鱼（Xiphapor
黑头软口繁(Pimepha
锂鱼（Cn
青鳞（Oryzim
孔雀鱼（Paec
莲太阳鱼（Li
彩虹大马哈鱼（O)
三刺色(Gast
上表所列清
病或寄生菌的素
来源。
rochirus
chusmgkiss
ceats)
易饲养且常
，它们也可
附录B
（资料性附录）
推荐使用的试验鱼
表 B_1推荐使用的试验鱼
试验褥皮范围/心
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试验用鱼体长/cm
3. 0±0. 5
5,0上3. 0
13.0±1.0
.0±2.0
河口鱼种可能难于采集。在控制疾，这样就能催证试验鱼的健康和知其9
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