本标准规定了化学品蜜蜂急性经口毒性试验的范围、术语和定义、试验原理、试验的有效性、试验准备、试验程序、数据与报告。本标准适用于测定农药及其化学品对成年工蜂的急性经口毒性。 GB/T 21812-2008 化学品 蜜蜂急性经口毒性试验 GB/T21812-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net
本标准规定了化学品蜜蜂急性经口毒性试验的范围、术语和定义、试验原理、试验的有效性、试验准备、试验程序、数据与报告。本标准适用于测定农药及其化学品对成年工蜂的急性经口毒性。
本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.213(1998 年)《蜜蜂急性经口毒性试验》(英文版)。
本标准做了下列编辑性修改:
---增加了范围部分;
---将计量单位改为我国法定计量单位;
---将附录中的术语和定义内容放入正文的术语和定义部分。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本标准负责起草单位:中国检验检疫科学研究院。
本标准参加起草单位:宁波出入境检验检疫局。
本标准主要起草人:周新、陈会明、王军兵、于文莲、林振兴、马中春、郝楠、王立峰、孙鑫、王峥。

CS13.300;13.020.40
中华人民共和国国家标准
GB/T 21812—2008
化学品
蜜蜂急性经口毒性试验
Chemicals-Honeybees, acute oral toxicity test2008-05-12 发布wwW.bzxz.Net
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
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2008-09-01实施
GB/T 21812—2008
本标等同采用经济合作与发展组织(0ECD)化学品测试导则No.213（1998年）蜜蜂急性经口毒性试验》（英文版）。
本标准做了下列编辑性修改：
-增加了范围部分；
：将计量单位改为我国法定计量单位；一将附录中的术语和定义内容放入正文的术语和定义部分。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。本标准负责起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标难参加起草单位：宁波出人境检验检疫局。本标准主要赵草人：周新、陈会明、王军兵、于文莲、林振兴、马中春、郝、王立峰、孙鑫、王静。I
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本标推是被制定用来测定农药及其他化学品对成年工蜂的急性经口葬性的实验室试验方法。本标准主要根据欧洲和地中海植被保护组织（EPPO）的为评估植被保护产品对蜜蜂（Apismettifera）产生副作用的指南文件17，本标准考虑到了1993年在Wagcningcn（荷兰）举行的植物与密蜂关系的国际研讨会的第五次关于农药对密蜂危害的讨论会上提出的改进EPPO测试方法的建议。其他现有的指南也被考虑到，见参考文献[3],4]和[5]。在物质的毒性特征的评估中，当化学品暴露于齋蜂时，必须包含对蜜蜂的急性经口毒性试验。急性经口性测试提供了确定农药和其他化学品对密蜂固有毒性的判断依据。这个试验结果可以作为进、步评估的必要性依据。特别是，本标准可用于评估农药对蜜蜂危害的逐步回归程序中，用以确定实验案毒性测或和野外试验的必要性，见参考文献[6。农药可以是一种活性成分（a.i.）也可以是制剂产品。
参比物用以核实蜂的敏感性和试验的推确性。1范围
化学品蜜蜂急性经口毒性试验
GE/T 21812—2008
本标准规定了化学品蜜蜂急性经口毒性试验的范围、术语和定义，试验原理、试验的有效性、试验准备、试验程序、数据与报告。
本标准适用于测定农药及其他化学品对成年工蜂的意性经口毒性。2术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。2.1
急性经口毒性acuteoral toxicity在最长到96 h的试验期闻内，经口单一剂量的受试物产生的有害影响。2. 2
剂量dose
受试物消耗的总量。剂量以受试物质量（g）或单个试验动物所用受试物的质量（g/只蜜蜂）来表达。当密蜂被集体喂养时，实际的剂量无法计算，但是可以用平均剂量进行估计（在一个笼中受试物被消耗的总量/受试蜜蜂的数量）。2. 3
经半数致死量LD（mcdian Iethal dose）oral受试物以口服方式导致动物死亡达50%，经统计获得的唯一药量。LDs值以“g/只蜜蜂”来表达对于农药，受试物可以是一种活性成分（α.i.），也可以是含有一种或多种活性成分的制剂产品。2.4
死亡率mortality
死亡动物占供试动物的比率。
3试验原理
成年工蜂道过取食蔗糖溶液从而食人受试物。而后，用不含有受试物的同样食物何喂蜜蜂。在至少48h内记录死亡率并与对照组进行比较。如果在24h～48h之间死亡率持续增加，而对照组死亡率保持在不大于10%的可以接受水平，应考虑将试验期延长，最长至96h。计算24h和48h的LDs，以及当试验延长后的 72 h 和 96 h的 I.Ds值。4试验的有效性
试验应符合以下条件才是有效的：一在试验结束时对照纽的平均死亡率不超过10%：一一参比物的LDso值满足特定的范围。5试验准备
5.1蜜蜂的选择
供试密蜂要求营养状况良好，健康、抗病毒能方强，年龄相同。供试蜜蜂可以不是来自同一群蜂，但其家族背景应清晰已知。在使用当天早晨或试验的前一天晚上采集，并在实验条件下饲养一直到试验1
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开始。尽量避免在只春或晚秋采集蜜蜂。如果在此期间进行试验，则应经孵化器使鲨蜂羽化，并用花粉和庭糖溶液饲养1周。如果使用经抗生素，扰嘞剂等化学物质处理过的蜜蜂，自最后一处理后的4调内不能用于毒性试验。
5.2试验笼
使用易于清洁，通风性良好的笼子。可采用任何合适的材料，如不锈钢、金属丝、塑料、一次性木笼等。试验笼的大小要与密蜂的数量相适应，以提供足够的空间。5.3操作和暖养条件
白天（光照下)进行的处理和观察：以最终浓度为500名/L的蔗糖水溶液作为食物。在给予试验剂量后,可不受限制提供食物，并对每笼的食物摄入量进行记录。喂食采用长 50 mm，宽 10 tntm,底端开口处直径为2mm的玻璃管。
5.4密蜂的准备
将采集的蜜蜂随机分配到实验案里随放置的试验笼中。试验开始前使蜜蜂饥饿2h，以保证在试验开始时密蜂腹内食物含量相同。试验前用健康的蜜蜂替换出垂死的蜜蜂。5.5受试物剂量的准备
如果受试物是易于与水混溶的化学品，则可以直接分散到500g/L的蔗糖水溶液中。对于有技术要求的产品和一些水解性较低物质，可以使用毒性较低的有机裕剂、分散剂或乳化剂（如丙酮、二甲亚砜，三甲基甲酰胺作为助溶剂。助溶剂的滚度可根据受试物的浴解性来决定，并耳客个浓度组的助溶剂浓度应一致。但助剂的浓度一般不应超过1%。应准备适当的溶剂对照，即当使用了助溶剂和分散剂时，应分别准备两组溶液对照，一组为水溶液对照，一组为含溶剂的蔗糖溶液对照，溶剂浓度与受试组中的浓度相同。6试验程序
6. 1试验组和对照组
试验浓度以及平行试验数量的设置应满足在95%置信限下确定LD的统计需要。通常在进行试验时,要求在含有LLDs的浓度范围内，至少设置5个按儿何级数排列的浓度，浓度组距比值不应超过第4章中规定范围。另外，稀释因子和受试物浓度数量的设置，还应考虑以嵌度对死亡率表示的毒性曲线斜率的相关性，以及进行结果分析所选用的统计分析方法。应先进行预试验，以确定正式试验的浓度范围。
最低要求：每个浓度组设三个平行，每一试验容器各放10只蜜蜂。对照组最少设3个平行，各10只蜜蜂，与处理组同时进行。对照组还应该包括助溶剂或载体对照。6.2参比物
参比物应该包括在测试系列果。参比物浓度至少应选择覆盖预期LDsc值的3个剂量。每个剂量3个平行，各10只鲨蜂。首选的参比物是乐果，其报道的24h急性经口毒性LDs值的范围为：0.10μB（a.i.)/只蟹蜂~0.35g(a.i.)/只蜜蜂，见参考文献[7]。若有充分的数据求证明预期的剂量反映，也可以接受其他的参比物。
6.3飘露
6.3.1剂量处理
在每个蜜蜂试验组中，加入100μL～200μL含有一定浓度受试物500g/L的蔗糖水溶液。对于低溶解度的物质则要求加大体积，如果受试物为低溶解性、低毒或在制剂中浓度较低，则要求使用较高比例的蔗糖水溶液。对每组经处理食物消耗量进行监测。食物通常在3h～4h内消耗完。一旦食物消耗完,将食物容器从笼中取出，换上只含有糖的食物，不限量。对于一些受试物，在较高试验剂量下，蜜蜂拒绝进食，从而导致食物消耗很少或几乎没有消耗。最长到6h后，用蔗糖溶液将剩余的经处理的食物换掉。对经处理食物的消耗数量进行估算（即检测经处理的食物残存的体积或质量）。2
6.3.2试验条件
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蜂应该放在黑暗的实验室内，室温 25℃士2℃。试验过程中还应记录相对湿度，通常为50%~70%
6.3.3持续时间
在投给含有受试物 500 g/L的蔗糖水溶液后开始记时,试验持续 48 h。如果在第一个 24 h后死亡率持续增加了10%以上，则需要延长试验，最长至96h,同时对照组死亡率不得超过10%，6.4观察
在试验开始后（即在加入剂量后）4h、24h，48h记录死亡率。如果需要延长观察时间，则以24h为时间间隔进行进一步的评估，最长至 96 h。对照组死亡率不得超过10%。估计每一组的食物消耗量。在给定的6h内，对处理组和未处理组的食物消耗率进行比较，可以得出关于经处理的食物适口性的信息。在整个试验过程中，记录观察到的所有异常行为。6.5限度试验
在预计一种受试物为低毒等情况下，应进行限度试验，以确定LD是否大于限度值，即100ug(a.i.)只蜜蜂。试验要求同如上所述的程序，限度试验中若有死亡发生，须进行完整试验。如果观察到亚致死效应，则应进行记录。
7数据与报告
7.1数据
数据应该以表格形式表达，给出每一个处理组、对照组，以及参比物组的数据，所使用的蜜蜂数，每一观察时间的死亡率以及行为异常蜜蜂的数量，见参考文献[8]和9]。采用适当的统计分析方法分析密蜂的死亡数据，画山每一观察时间(即24 h,48 h、72 h,96h)的剂量-效应曲线图，计算曲线的斜率以及在95%置信限下的-均致死剂量（LD），见参考文献[9利[10}。如果经处理的食物没有完全被消耗光，则应该确定每组中受试物的消耗量。L.D5a以每只蜜锋消耗受试物量米表达，单位/只密峰。7.2试验报告
试验报告必须包括以下信息：
7.2.1受试物：
.一·物理性质和相应的理化特性（如：水溶解度、蒸汽压）；：一-化学鉴定数据，包括分子式、结构式、纯度（如对于农药而言，活性成分的特征和浓度）。7.2.2供试生物：
一学名，周龄，采集方法，采集口期无采集的供试蜜蜂蜂群的信息，包括健康状况，预处理等。7.2.3试验条件：
一实验窄的温度及相对显度：
一试验容器的条件，包括类型、大小以及材料；试验溶液以及贮备液的备方法（如果使用助溶剂，给出浓度）：试验设让，例如，所使用试验装度和数量，对照组的数最。对于每一个试验：包括浓度以及对照，平行数以及每笼中蟹蜂的数量。7.2. 4 结果;
如果进行了预试验，其淤度范围；一每一观察时间死亡率的原始数据：一试验结束时的剂量-效应曲线图：一。一在每一观察时间,受试物以及参比物在95%置信限下的LDsa值；3
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—确定LDsc的统计分析方法；
一对照组死亡率；
观察或检测到的其他生物效应，例如蜂的异常行为（包括受试物达到一定剂量时，蜜蜂拒食的情况),处理组和对照组食物的消耗率；有关偏离操作方法及其他相关信息。4
参考文献
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[1]J EPPO (1992), Guideline on Test Methods for Evaluation the Side-Effects of Plant Prutec-tion Products on Hancybces (No. 170). Bullctin OEPP/EPPO Bulletin, 22, 203-215.[2] Harison, E.G. (1993). Proceedings of the Fifth International Symposium on the Hazardsof Pesticidcs to Bees, October 26-28, 1993, Plant Protection Service, Wageningen, The Netherlands.Report JUBBS, 14pp+Appendices 1gopp.[3] SETAC (1995), Procedures for Assessing the Environmental Fate and Ecotoxicity of Pesti-cides. Edited by Dr. Mark R, Lynch, Published by SETAC-Eurape,Belgium. March 1g95.[4]Stute,K. (1991). Auswirkungen yon Pflanzenschutzrnitteln auf dic Honigbiene, Rich-tlinien fur die Prufung von Pflanzenschutzmitteln irn Zulassungsverfahrcn, Teil V, 23-1, BiologischeBundesanstalt fur Land-und Forstwirtschaft (BBA),Braunschwcig,Germany.[5] US EPA(1995). Honey Bce Acute Contact Taxicity Test (OPPTS850.3020). EcologicalEffects Test Guidelinces, EPA 71 2-C-95- 147, Washington DC, United States ol Ametica.[6] EPPO/Council of Europc. (1993). Decision-Making Scheme for the Environmental RiskAssessmcnt of Plant Protection Products-Honeybees. EPPO bulletin. vol. 23, No. 1, 151-165.March 1993.
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GB/T 21812-200B
中华人民共利国
国家标雅
蜜蜂急性经口毒性试验
化学品
GB/T 21812 -2008
中国标推出版社出版发行
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2008年7月第一版2008年7月第一次印刷*
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