GB/T 20765-2006
基本信息
标准号： GB/T 20765-2006
中文名称：猪肝脏、肾脏、肌肉组织中维吉尼霉素M1残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
发布日期：2007-03-26
实施日期：2007-03-01
出版语种：简体中文
下载格式：.rar.pdf
下载大小：368093
相关标签： 肌肉组织 霉素 残留量 测定 色谱 串联 质谱法
标准分类号
标准ICS号：食品技术>>67.050食品试验和分析的一般方法
中标分类号：食品>>食品综合>>X04基础标准与通用方法
关联标准
出版信息
页数：12页
标准价格：14.0 元
计划单号：20051878-T-326
相关单位信息
首发日期：2006-12-31
起草单位：秦皇岛出入境检验检疫局、辽宁出入境检验检疫局
归口单位：中华人民共和国质量监督检验检疫总局
发布部门：国家标准化管理委员会
主管部门：国家标准化管理委员会
标准简介
本标准规定了猪肝脏、肾脏和肌肉组织中维吉尼霉素M1残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于猪肝脏、肾脏和肌肉组织中维吉尼霉素M1残留量的测定。 GB/T 20765-2006 猪肝脏、肾脏、肌肉组织中维吉尼霉素M1残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T20765-2006 标准下载解压密码：www.bzxz.net
标准图片预览
标准内容
1范围
猪肝脏、肾脏、肌肉组织中维吉尼霉素M残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T 20765—2006
本标准规定了猪肝脏，肾脏和肌肉纽织中维声尼素惑留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标雅适用于猎肝脏、肾脏和肌肉组织中继直尼霉素M残留氢的测定，本标准的方法检出限为肝脏，瞬睡和肌肉组织中缝查蹈素M为C.251g/kg。2规范性引用文件
下列文件中的多激造本标准的
的修敢单（不包括误的用容)或
是否可使用这些享代的最新版本GBT 63791测定方法
(GB/T 6379. 12004.1S0 5725
GB/T637制定J法与
性与可现性的法（GB/T6
GB/T 662
3原理
新实验雅用
试鲜中残鹰的缠洁尼露素
释，于Cl固相教技性行净化。
三氟甲烯至干用酸按缓冲溶灌
4试刻和材料
格和试验方法（GR产
乙情匀浆
的维吉尼
凡是连日期的引限文件，其随后所有励根露本标额达成协议的各方研究般新版术适用证本标确。
密设）
部分：总厕与定义
第2部分确定源推测盘方法重复
992:119 1S0 3696 :1987)
政上清液用磷酸氢链经冲溶波稀氮中岔离辈敏·去除水层，筑吹色谱-串联质谱仪测定，bzxZ.net
除另有说明外，所用独剂均为分析纯，水为GB16682规定的一级永4. 1艺。
甲酸：色谱纯.
它醇：谱纯。
艺腈：色谱纯。
三领甲烷：色谱纯
磷酸二氢铵：优级纯，
甲酸铵：优级纯
磷酸二氢铵溶液：0.1mol/L，称取11.50g磷散=氢铵4.6），用水落解定容至1000mL磷酸二氧铵溶液：0.01mol/L,称取0.1mol/L磷酸二氢铵溶液(4.8)100rnL，用水稀释定容至4.9
4.10甲酸较缓冲液：0.12mol/I.,pI=3.2.称取7.56名甲酸铵（4.7），用水溶解，用甲酸（%，2)调节pH 到 3. 2.定容至 1 000 mL。4.11甲酸敏毁冲较：0.003mal/L，p1H=3.2.称收25.0mL的用酸微缓[液（4.10），用水稀定容至1
GB/T 20765---2006
1 000 mL.
4.12甲醉+乙溶波(50→50)
4.13水+乙落滋（80+-20)。
14小+用萨滚孩（851-35）
4.15水+甲醇溶滋（45十55）
4. 16流动相A:0.003 mol/I. 甲酸铵缀冲液(4. 11)用 0,22 un1滤膜过滤。流动相B.甲醇+乙睛（5050)(4.12)用0.22um滤过滤。4.17标准物质：维吉尼密素 M1.纯度 95%。4.18标准储备溶被:0.1 mg/mL。禮碲称取遮经的维吉尼睾素M,标准物质,用甲醇配成0.1 g/mL的标推储备溶液。该溶液在4℃保存。注，称取标违的质贷是按绝度修正过的质撤4.19标桩工作溶液：根抛维声尼素Ml的灵敏度利仪器线性范阅，用空白样品提取液配成不同浓度的标准工作溶皴。标准工作溶液在4℃保存。5仪
5.1液相色谱-申联阻极质谱仪,有电喷雾离子源。5.2离心机：最大转遮为10000=/mine5.3离心管：销形底被璃离心管40 ml、15 mL和10 ml.具塞:锥形底聚两烯离心管50 ml.,螺旋益。
5. 4 离了天乎:感遵 0. 1 mg和 0. 1 需。5.5过滤器：聚四氟乙烯膜过滤器;0.22μm×13mlrm;尼龙膜过滤器：0.22Jm×47mm。5, 移液器:冠程为 1 mL10 mL 和 5 r:L~～50 u5.7微展加液器：望程为10μL～100μ，100μL～1000μL5.8高速分散勾质机。
5.9疑动框过懿装盘。
5.10镇气浓缩仪。
高速涡流混合器
5.12振荡器，
5.13酸度计：测壁精确度为上0.025.14超声波仪。
5.15食物调理机
一次性注射器:l mL。
固相萃敢柱：Bond Elut C：S0o mg，注长为6 mL。5.18鸡心瓶：150mL
5.19玻璃贮液器：100mL。
5.20试样瓶:2 mL
5.21·-次性移液管。
6试栏的制备与保存
6.1试样的制备
猪肝脏、肾脏要去除脂防和其他的非肝脏、肾脏组织，猪肉要去皮和肾头。将其搅碎拌匀。分出0.5kg作为试样,将制备好的试样密，并做上标记。2
6.2试样保存
将试样置于18℃条件下存。
7测定步骤
7.1携职
GB/T20765—2006
称胶试样5.00gC精确到0.01g）放入50mL聚两烯离心管中，加人10ml的中醇十乙崩溶液(50+50）匀浆」min，用2×1l的用醇十乙腈溶液（50+50)彻底清洗匀浆头。离速振游10min，离心15min(4000r/ain)，将上清波转移至40mL的活净离心管中。再向残酒中加人2ml.甲乙體溶没（50+50)匀装30s，依上述条件消洗句浆头。高速振满5min，离心10min(4000z/min）。合并两次上消液子40nL离心管中。加入15mL的0.01nol/1.磷酸二氢铵裕液（4.9），高速振荡5Ini，离心10min(40002/min）。将上清液转移垒150mL的鸡心瓶中，加入80ml.磷酸二氢铵溶液（4.9)混勾待净化。
依次用5ml.乙时、5mL水和5mL的龄二氧铵裕液（4.9)洗涤活化固相萃取柱517)。在柱上装上玻瑙贮液器（5.19)，将祥液（7.1)过柱，移去玻璃存器（5.19）。次用2ml.水，10ml.水一乙膜落液（80+20）2ml.水和水+甲醇落液（65+35)洗柱，弃去全部流出液。最后用5mL水十甲醇溶液（4+55)洗涤维吉尼罐素M..收集洗液到1511.的玻离离心燃中，将10mL三甲烷<4.5)加大洗脱液中振菌5min.离心【0min(4000r/tin，用一次性移液管定堡收集兰氧甲统层到10mL离心管中，在40℃条件下氮欧至T。再向离心管中加人500叫l.甲厚.超声5min加人50c=L酸铵缓冲液（4，31)，商速涡旋5s。样液用0.22μm的撼膜过滤到样品瓶中，供液相色谱-审联质谱仪测定。7.3色谱测定
7.3.1液相色谱条件
a）色谱柱，SunFireCe.5μm.150mm×2.1m内径）或相当者：b）柱温:40℃：
进伴盘：30MI；
色谱柱总流量：3Co2L/min
流缺相及梯度览表1，
表 1流动相放梯度
时间/nin
7.3.2质谐条件
）离子源：电喷雾离子源；
b）扫猫方式:正离于扫描；
检测力式：多反应检测：
电喷雾电压（IS)：5000V：
雾化气压力（CAS1)：517.1kPa
气帘气压力（CUR)，103.1kPa
翰助气压力(CA$2)：G20.5kPa:
流动相A（%）
流动相B（
GB/T20765—2006
离子源温度（TEM）：700C：
定性离子对、定离了对采策时间（ID)Wrel）、去簇电压（DP）碰擅气能（CE）、入电压（EP)及碰撞室出口电压（CXP)见表2。来？维吉尼婴素M,的质谱参数
定性离子对/
526.8/386.9
526.3/355,1
526.3/508.4
定整离学对！
526.3/336.9
7.3. 3液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1定性测定
乘时间/
法綫电压
继撞气能量/
人口电压/
搬撞室出口
每种被测组分选择1个手，2个以上子离子，在相同试验亲件下，释品中得测物质利内标物的保留时间之比，也就是捐x留时间，与混盒质标推校推熔被中对虚的相对保留时间偏差在士2.5%之内：且样品谱图中各组分
整性离子
性肉了的椅对半度行比凝，落偏装3
排对离子非度
充许的最大信教
7.3.3.2定测
用标滩工作
1.19)分刷
南标推工作曲线痒暂进行定
在上述的色谱条释箱质谱条件下准总离子流图见图
7. 4平行试验
。缩背尼
按照以上步骤
一试样近
7.5回收率试验
20~-5路
峰面积为纵坐标
液南，！
雷票的保
构添加浓度及具
空自样品中涨加标游容液按和7.2换作测提唇计算荐8结果计篇
试样中维吉尼得素 M,
式中：
基质标准校凝落波谱图中对应的定庭为样品中荐在对应的待测物。许偏差
-10~20
2: 1 0-- 20
浓度为惯坐标，绘耐标准工作曲线，傅均游在仪器测院的线性范围内：24.35m露雍雪尼豫素M.的标
的试验数参见表.1,
泰的收：
用效据处理系统计算或挖式（1)计筹ersT00
X----试样中被测纽分残留量，单位为微克衔于克（ug/kg）\\--从标准山绒工得到被测组分溶液的度，单位为纳克每升（ng/mL)：V——样品辫淡定容体积,单位为升(mI)：m--\样品溶液所代表试样的质风，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空户值。
9密魔
本标推的精街底数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，H重复触和算现性的4
值以95%的可信度来计算。
9.1复性
G3/120765-2006
在垂复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限，猪肾组织维吉尼露索，中的含敏范鼠及重复性方程见变4。表4猪肾组织中维吉尼孵泰M，的含邀范围及置复性和再现性方程含逊范阅/（g/kg）
0. 500 --3. 000
墅复性，
Ig r=1. 201 7 lg m --1. 143 5再现性限
Is R-- 1. 183 3 lg m -- 0. 735 9妇果值超过尊复性限7，应會弃试验结果并新完成两次单个试验的测定。9,2再现性
在线性条件下，获得的啊次独Y测试结果的绝对差值不超过再现性限R，猪背组织中继维吉尼每素M，的含量范画及再现性方程见表4。3
GH/T20765—2006
附景A
（资料性附景）
标准物质总离子流图
维吉尼馨索M标准物质总离子流图，见图A.1。绝市尼霉张M
srdajis
维言泥需素IM,标准物质总离子流图/
附录B
(资料性附录)
回收率
维吉尼霉素M，添浓度及其平均回收率的试验嫩据，见表B.1我B.1维吉尼素M添加浓魔及其平均回收率的试验数据组织
涨加欲度（pg/lsg）
GB/T20765-2006
平均回收率()
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猪肝脏、肾脏、肌肉组织中维吉尼霉素M残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T 20765—2006
本标准规定了猪肝脏，肾脏和肌肉纽织中维声尼素惑留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标雅适用于猎肝脏、肾脏和肌肉组织中继直尼霉素M残留氢的测定，本标准的方法检出限为肝脏，瞬睡和肌肉组织中缝查蹈素M为C.251g/kg。2规范性引用文件
下列文件中的多激造本标准的
的修敢单（不包括误的用容)或
是否可使用这些享代的最新版本GBT 63791测定方法
(GB/T 6379. 12004.1S0 5725
GB/T637制定J法与
性与可现性的法（GB/T6
GB/T 662
3原理
新实验雅用
试鲜中残鹰的缠洁尼露素
释，于Cl固相教技性行净化。
三氟甲烯至干用酸按缓冲溶灌
4试刻和材料
格和试验方法（GR产
乙情匀浆
的维吉尼
凡是连日期的引限文件，其随后所有励根露本标额达成协议的各方研究般新版术适用证本标确。
密设）
部分：总厕与定义
第2部分确定源推测盘方法重复
992:119 1S0 3696 :1987)
政上清液用磷酸氢链经冲溶波稀氮中岔离辈敏·去除水层，筑吹色谱-串联质谱仪测定，bzxZ.net
除另有说明外，所用独剂均为分析纯，水为GB16682规定的一级永4. 1艺。
甲酸：色谱纯.
它醇：谱纯。
艺腈：色谱纯。
三领甲烷：色谱纯
磷酸二氢铵：优级纯，
甲酸铵：优级纯
磷酸二氢铵溶液：0.1mol/L，称取11.50g磷散=氢铵4.6），用水落解定容至1000mL磷酸二氧铵溶液：0.01mol/L,称取0.1mol/L磷酸二氢铵溶液(4.8)100rnL，用水稀释定容至4.9
4.10甲酸较缓冲液：0.12mol/I.,pI=3.2.称取7.56名甲酸铵（4.7），用水溶解，用甲酸（%，2)调节pH 到 3. 2.定容至 1 000 mL。4.11甲酸敏毁冲较：0.003mal/L，p1H=3.2.称收25.0mL的用酸微缓[液（4.10），用水稀定容至1
GB/T 20765---2006
1 000 mL.
4.12甲醉+乙溶波(50→50)
4.13水+乙落滋（80+-20)。
14小+用萨滚孩（851-35）
4.15水+甲醇溶滋（45十55）
4. 16流动相A:0.003 mol/I. 甲酸铵缀冲液(4. 11)用 0,22 un1滤膜过滤。流动相B.甲醇+乙睛（5050)(4.12)用0.22um滤过滤。4.17标准物质：维吉尼密素 M1.纯度 95%。4.18标准储备溶被:0.1 mg/mL。禮碲称取遮经的维吉尼睾素M,标准物质,用甲醇配成0.1 g/mL的标推储备溶液。该溶液在4℃保存。注，称取标违的质贷是按绝度修正过的质撤4.19标桩工作溶液：根抛维声尼素Ml的灵敏度利仪器线性范阅，用空白样品提取液配成不同浓度的标准工作溶皴。标准工作溶液在4℃保存。5仪
5.1液相色谱-申联阻极质谱仪,有电喷雾离子源。5.2离心机：最大转遮为10000=/mine5.3离心管：销形底被璃离心管40 ml、15 mL和10 ml.具塞:锥形底聚两烯离心管50 ml.,螺旋益。
5. 4 离了天乎:感遵 0. 1 mg和 0. 1 需。5.5过滤器：聚四氟乙烯膜过滤器;0.22μm×13mlrm;尼龙膜过滤器：0.22Jm×47mm。5, 移液器:冠程为 1 mL10 mL 和 5 r:L~～50 u5.7微展加液器：望程为10μL～100μ，100μL～1000μL5.8高速分散勾质机。
5.9疑动框过懿装盘。
5.10镇气浓缩仪。
高速涡流混合器
5.12振荡器，
5.13酸度计：测壁精确度为上0.025.14超声波仪。
5.15食物调理机
一次性注射器:l mL。
固相萃敢柱：Bond Elut C：S0o mg，注长为6 mL。5.18鸡心瓶：150mL
5.19玻璃贮液器：100mL。
5.20试样瓶:2 mL
5.21·-次性移液管。
6试栏的制备与保存
6.1试样的制备
猪肝脏、肾脏要去除脂防和其他的非肝脏、肾脏组织，猪肉要去皮和肾头。将其搅碎拌匀。分出0.5kg作为试样,将制备好的试样密，并做上标记。2
6.2试样保存
将试样置于18℃条件下存。
7测定步骤
7.1携职
GB/T20765—2006
称胶试样5.00gC精确到0.01g）放入50mL聚两烯离心管中，加人10ml的中醇十乙崩溶液(50+50）匀浆」min，用2×1l的用醇十乙腈溶液（50+50)彻底清洗匀浆头。离速振游10min，离心15min(4000r/ain)，将上清波转移至40mL的活净离心管中。再向残酒中加人2ml.甲乙體溶没（50+50)匀装30s，依上述条件消洗句浆头。高速振满5min，离心10min(4000z/min）。合并两次上消液子40nL离心管中。加入15mL的0.01nol/1.磷酸二氢铵裕液（4.9），高速振荡5Ini，离心10min(40002/min）。将上清液转移垒150mL的鸡心瓶中，加入80ml.磷酸二氢铵溶液（4.9)混勾待净化。
依次用5ml.乙时、5mL水和5mL的龄二氧铵裕液（4.9)洗涤活化固相萃取柱517)。在柱上装上玻瑙贮液器（5.19)，将祥液（7.1)过柱，移去玻璃存器（5.19）。次用2ml.水，10ml.水一乙膜落液（80+20）2ml.水和水+甲醇落液（65+35)洗柱，弃去全部流出液。最后用5mL水十甲醇溶液（4+55)洗涤维吉尼罐素M..收集洗液到1511.的玻离离心燃中，将10mL三甲烷<4.5)加大洗脱液中振菌5min.离心【0min(4000r/tin，用一次性移液管定堡收集兰氧甲统层到10mL离心管中，在40℃条件下氮欧至T。再向离心管中加人500叫l.甲厚.超声5min加人50c=L酸铵缓冲液（4，31)，商速涡旋5s。样液用0.22μm的撼膜过滤到样品瓶中，供液相色谱-审联质谱仪测定。7.3色谱测定
7.3.1液相色谱条件
a）色谱柱，SunFireCe.5μm.150mm×2.1m内径）或相当者：b）柱温:40℃：
进伴盘：30MI；
色谱柱总流量：3Co2L/min
流缺相及梯度览表1，
表 1流动相放梯度
时间/nin
7.3.2质谐条件
）离子源：电喷雾离子源；
b）扫猫方式:正离于扫描；
检测力式：多反应检测：
电喷雾电压（IS)：5000V：
雾化气压力（CAS1)：517.1kPa
气帘气压力（CUR)，103.1kPa
翰助气压力(CA$2)：G20.5kPa:
流动相A（%）
流动相B（
GB/T20765—2006
离子源温度（TEM）：700C：
定性离子对、定离了对采策时间（ID)Wrel）、去簇电压（DP）碰擅气能（CE）、入电压（EP)及碰撞室出口电压（CXP)见表2。来？维吉尼婴素M,的质谱参数
定性离子对/
526.8/386.9
526.3/355,1
526.3/508.4
定整离学对！
526.3/336.9
7.3. 3液相色谱-串联质谱测定
7.3.3.1定性测定
乘时间/
法綫电压
继撞气能量/
人口电压/
搬撞室出口
每种被测组分选择1个手，2个以上子离子，在相同试验亲件下，释品中得测物质利内标物的保留时间之比，也就是捐x留时间，与混盒质标推校推熔被中对虚的相对保留时间偏差在士2.5%之内：且样品谱图中各组分
整性离子
性肉了的椅对半度行比凝，落偏装3
排对离子非度
充许的最大信教
7.3.3.2定测
用标滩工作
1.19)分刷
南标推工作曲线痒暂进行定
在上述的色谱条释箱质谱条件下准总离子流图见图
7. 4平行试验
。缩背尼
按照以上步骤
一试样近
7.5回收率试验
20~-5路
峰面积为纵坐标
液南，！
雷票的保
构添加浓度及具
空自样品中涨加标游容液按和7.2换作测提唇计算荐8结果计篇
试样中维吉尼得素 M,
式中：
基质标准校凝落波谱图中对应的定庭为样品中荐在对应的待测物。许偏差
-10~20
2: 1 0-- 20
浓度为惯坐标，绘耐标准工作曲线，傅均游在仪器测院的线性范围内：24.35m露雍雪尼豫素M.的标
的试验数参见表.1,
泰的收：
用效据处理系统计算或挖式（1)计筹ersT00
X----试样中被测纽分残留量，单位为微克衔于克（ug/kg）\\--从标准山绒工得到被测组分溶液的度，单位为纳克每升（ng/mL)：V——样品辫淡定容体积,单位为升(mI)：m--\样品溶液所代表试样的质风，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空户值。
9密魔
本标推的精街底数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，H重复触和算现性的4
值以95%的可信度来计算。
9.1复性
G3/120765-2006
在垂复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限，猪肾组织维吉尼露索，中的含敏范鼠及重复性方程见变4。表4猪肾组织中维吉尼孵泰M，的含邀范围及置复性和再现性方程含逊范阅/（g/kg）
0. 500 --3. 000
墅复性，
Ig r=1. 201 7 lg m --1. 143 5再现性限
Is R-- 1. 183 3 lg m -- 0. 735 9妇果值超过尊复性限7，应會弃试验结果并新完成两次单个试验的测定。9,2再现性
在线性条件下，获得的啊次独Y测试结果的绝对差值不超过再现性限R，猪背组织中继维吉尼每素M，的含量范画及再现性方程见表4。3
GH/T20765—2006
附景A
（资料性附景）
标准物质总离子流图
维吉尼馨索M标准物质总离子流图，见图A.1。绝市尼霉张M
srdajis
维言泥需素IM,标准物质总离子流图/
附录B
(资料性附录)
回收率
维吉尼霉素M，添浓度及其平均回收率的试验嫩据，见表B.1我B.1维吉尼素M添加浓魔及其平均回收率的试验数据组织
涨加欲度（pg/lsg）
GB/T20765-2006
平均回收率()
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