NY/T 910-2004饲料中盐酸氯苯胍的测定 高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T910-2004
饲料中盐酸氯苯胍的测定
高效液相色谱法
Determination of robenidini hydrochloridum in feedshigh-performance liquid chromatography2005-01-04发布
中华人民共和国农业部
2005-02-01实施
本标准出中华人民共和国农业部提出前言
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口NY/T910-2004
本标准主要起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（济南），农业部伺料质量监督检验测试中心（沈阳）
本标准主要起草人：李俊玲、刘学江、徐强、周岚、田颖、张桂萍、朱良智1
1范围
饲料中盐酸氯苯胍的测定
高效液相色谱法
本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中盐酸氮苯胍的方法NY/T910-2004
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及漆加剂预混合饲料中盐酸氯苯胍的测定，最低检测浓度为2.5mg/kg
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699饲料采样方法
3原理
试料中的盐酸氯苯胍用中醇提取。提取液经浓缩蒸干，用酸性甲醇溶解后，在HPLC反相柱上分离，紫外检测器（UV检测器）352nm处测定。4试剂
除非另有说明.本标准所用试剂为分析纯，水为蒸馏水，符合GB/T6682三级水的规定。色谱用超纯水符合（GB/T6682一级水的规定，4.1甲醇
4.2甲醇
色谱纯，过0.45um有机滤膜，
4.3乙酸
优级纯。
4.4乙酸甲醇溶液
取2mL乙酸（4.3）用甲醇（4.2）定容至1000ml4.5HPLC流动相
取900ml甲醇（4.2)与100mL超纯水混匀.加1mL三乙醇胺，混匀，用前超声脱气5min~10mine
4.6盐酸氯苯胍标准溶液
4.6.1盐酸氯苯胍标准贮备液
称取盐酸氯苯胍对照品（含量不少于99.8%）10mg（准确至0.1mg），用甲醇（4.2)溶解并定容至100ml，其浓度为100g/mL此存于0℃~8℃冰箱中溶液有效期1个月4.6.2盐酸氯苯胍标准工作液
取标准备液（4.6.1)2mL于旋转蒸发器蒸下，用乙酸甲醇济液（4.4）溶解并定容至10mls该溶1
NY/T910—2004
液浓度为20/ml现用现配
4.6.3标准系列
精确移取标准1作液（4.6.2）0.100ml..0.250ml.0.500ml.0.750mL、1.000ml.1.500ml.用甲醇（4.2)稀释至10ml：该标准系列中盐氯苯胍的相应浓度分别为：0.20ug/mL、0.50ug/mL、1.00μg/ml.1.50gg/mL、2.00ug/ml3.00μug/mL，现用现配5仪器
5.1分析天平
感量0.1mg
5.2超纯水器
5.3超声波清洗器
5.4离心机
4000r/min
5.5旋转蒸发器
5.6旋涡混合器
5.7高效液相色谱仪
具有Cis柱和UV检测器
6采样
6.1采样步骤
按GB/T14699采取具有代表性的饲料样品1000g：6.2试样的制备
用四分法缩减饲料样品（6.1），分取200g左右，粉碎全部过0.45mm孔径筛，充分混勾，装入磨口瓶中备用。
7分析步骤
7.1提取
称取适量试料（配合饲料5g，浓缩饲料、添加剂预混合饲料1g~2g）精确至0.1mg，置于100ml三角瓶中，准确加人甲醇（4.1)50mL，振操使试料全部润湿，放在超声波清洗器中超声提取20min，中间振摇3次~4次，超声结束后，用于旋摇数秒，把溶液转移至离心管中，于离心机上4000r/min离心10mine
7.2浓缩
取上清液3ml5mL，于40℃旋转蒸发器蒸十，残渣加2ml.乙酸甲醇溶液（4.4）溶解，并旋涡混合数十秒，置超声波清洗器中超声处理2min~3mine用手旋摇数秒，过0.45um有机滤膜，滤液供上机用
对于含盐酸氯苯胍较高的浓缩饲料和添加剂预混合饲料，可先取适量上清液，用甲醇（4.2）稀释，取稀释液浓缩蒸1，并用乙酸甲醇溶液（4.4）溶解，使试样溶液中盐酸氯苯胍最终浓度为0.2格g/ml3μg/mL
7.3测定
7.3.1高效液相色谱条件
色谱柱：C8耗.柱长250mm.内径4.6mm.粒度5m或类似分析柱。桂温：室温
流动相：甲醇+水+乙醇胺900+100-1流速：1.0ml/min
检测器：UV检测器
检测波长：352nm
进样量：20l。
7.3.2定量测定
VY/T910—2004
向色谱仪分别注人标准溶液和试样溶液，积分得到峰向积，用单点或多点标准法定量3结果计算
饲料中盐酸氯苯胍的含量x，以毫克每下克(mg/kg）表示，按式(1)计算：X-mi
式中：
饲料中盐酸氯苯胍的含量，单位为毫克每千克（mg/kg)；一试料色谱峰面积对应的盐酸氯苯胍的质量，单位为微克(rug)：m
m--试料质量，单位为克（g）；D)—稀释倍数。
计算结果保留3位有效数字。
9精密度
9.1重复性
在同实验室、由同一操作人员完成的2个平行测定结果，相对偏差不大于5%，以2次平行测定结果的算术平均值为测定结果
9.2再现性
在不同的实验室、山不同的操作人员、用不同的仪器设备完成的测定结果，相对偏差不大于10%。3