本标准规定了对近交系小鼠、大鼠生化标记进行检测的乙酸纤维膜(板)的电泳方法及判断标准。本标准适用于近交系大鼠和小鼠任何品系。 GB/T 14927.1-2001 实验动物 近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法 GB/T14927.1-2001 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 65. 020.30
中华人民共和国国家标准
GB/T 14927. 1—2001
实验动物
近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法Laboratory animal-
Genetic monitoring : methods for biochemicalmarkers of inbred mice and rats2001 - 08- 29 发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2002-05-01实施
GB/T14927.1—2001
本标准是对GB/T14927.1一1994《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法》的修订。本标推对近交系小鼠、人鼠生化标记检测方法中的电泳结果模式图，尽量形象化，便于实验结果对照时应用。对近交系小鼠生化标记检测方法中的生化位点进行调整,取消可操作性差的生化位点尿主蛋白-1(Mup1),增加具有可操作性强、易于推广应用的碱性磷酸酶-1(Akp1)位点。增加了国标上常用的酯酶-1(Es1)生化位点。
本标准对试剂名称、书写规范等进行了修订。本标推及其配套标自实施之日起，代替CB/T14927.1—1994。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位：中国实验动物学会。本标准主要起草人：邢瑞昌、刘双环、沈洁、李善如、白琴华、张瑞忠。本标准于1994年1月首次发布。
1范围
中华人民共和国国家标准
实验动物
近交系小鼠，大鼠生化标记检测方法Lahoratory animal-
Genetic monitoring : methods for biochemicalmarkers of inhred mice and ratsGB/T 14927. 1 —2001
代替GB/T14927.1--- 1994
本标准规定了对近交系小鼠，人鼠生化标记进行检测的乙酸纤维膜（板）的电泳方法及判断标准。本标准适用于近交系大鼠和小鼠征何品系。2定义
本标准采用下列定义。
2.1生化标记biochemical markei本标准所称生化标记是指表明遗传特征并采用生化方法识别的记。在大小鼠中多为一些同工酶和异构蛋卢。
2.2生化遗传概貌biochemicalgeneticprafil:本标准所称生化遗传概貌是指各种近交系多个生化遗传标记表型资料的汇总，从一定程度上反映了齐种品系的遗传特征。
2.3纯合性homozygasity
本标准所称纯合性是指同源染色体的相对位置上具有相同基因的状态。近交系动物通过连续的近亲交配绝大部分的位点都具有纯合性，一个品系内任何个体间进行交配产生的后代也其有纯合性。2.4同基因性isogenicity
本标准所称同基因性尽指一个近交品系中所有个体在遗传上是同源的。因此在同-品系内任何个体间进行皮肤和肿瘤移植不被当作异已而受到排斥。如对近交系动物的基因进行检测，一个品系内不间个体的基因型完全-致，
2-5个体性individuality
本标准所称个体性是指就整个近交系动物而言，每个品系在遗传上都是独特的，表现在相当广泛的特性上，如生化遗传概貌等。大多数近交品系可通过各自的生化遗传概貌相互区别。3方法原理
在大鼠和小鼠体内存在着些同工酶和同种异构蛋白。可依据它们在特定电场内携带的电荷不同采用电泳的方法将它们区分，并根据电泳带型即蛋白质的表现型推断其基因型，建立各种近交系的邀传概貌，定期对它们进行质量监测。中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准2002-05-01实施
设备和材料
常压电泳仪。
乙酸纤维素膜电泳槽。
电泳点样装置。
乙酸纤维素膜。
乙酸纤维素板。
4℃,一20℃冰箱。
低温高速离心机。
振荡仪，
GB/T14927.12001
4. 9组织匀浆器(2 mL或5 mL)或组织勾浆机。抗凝毛细管。抗凝毛细算暴子。4.10
抗凝毛细管离心机
吸耳球。
小砂轮。
解剖板，于术剪
竹镊子。
S水溶锅，37
4.17玻器血
4.186cm×8
普通滤纸
分析天平
4.21 pH计。
4.22紫外监测#
4.23实验室常规用
化学试剂
Boric acid
Glycine
文名称(或简
文名称
基氨基甲烷
楼四乙酸
Citrate fcid
Mg(C,HO)
Ponceau S
柠檬酸
磷酸氢二钠
磷酸二氢钾
氢氧化钠
·无水乙酸钠
琼脂粉
乙酸镁
氯化锰
丽春红-S
A. R. or.C, P.
A. R. or. C. P.
A. R. or. C. P.
A. R.or. C. P.
A.R. or. C. P.
A.R. or.C. P.
A.R. or.C. P.
A. R. or.C. P.
A. R. or.C. P.
A. R. or. C. P.
A, R. or. C. P.
A. R. or. C. P.
A, R. or. C. P.
CCI,COOH
英文名称(或写)
(HO)CH.(COOH)SO.H.2H.O
Barbital
Sodium harbital
NA,FDTA
K,[Fe(CN)
Acctonc
Glucose-1-phosphate
Cystarnine
1,4-dithiohreitol(1
β-naphthyl acetat
4-methyl-umbel
g-Naphthyl acie
D-fructose-6
Thiazalyl blue
g-uicouinami
N-methyl ph
DL-lsaitrie
Glucse-1,6
D-glucose-6-p
Acetate
hosplate
zolim bromit
ine dinucleot
GB/T 14927.12001
中文名称
兰氯乙酸
磺基水杨酸
巴比妥
巴比妥钠
氯化镁
乙三胺四乙酸二钠
三氯化铁
铁氰化钾
氢氧化
B-乙酸
4甲基
β磷酸
D用扣
化酸盐
保化甲车睡唑蓝
ummethyl sulfate(PMs)
isodium salt
Glucose-i-phos
Malic acidl
Fast blue RR sal
5生化标记检测方法总员
5.1.电泳样品的制备
5. 1. 1血浆
dehydrogen
甲硫盼嗪酸酯
异榨檬酸
坚固蓝
二磷酸
酸脱氨酶
A.R.or.C.P.
A. R. or. C. F.
A. R.or:C. P.
A. R. or, C, P.
A.R.or.C. P.
A.R.or. C.P.
A.R. or.C. P.
A.R.or.C.P.
A.R.or.C. P.
A.R.or.C.P.
A. R. ar.C. P.
进口或国产
逃口或国产
进口或国产
遵口或国产
或国产
或国产
进口或国产
进口或国产
进口战国产
进口最国产
进口戴国产
逃口我国产
进口或国产
进或凤产
进口或国产
口或国产
以抗凝毛细管行眼眶采血术,500 r/min,离5xi穿离血浆和血球,吸出血浆备用。5. 1. 2 溶血素
在去除血浆的红细胞内加入蒸馏水(1：4标萄1min，成为红色透明液体，即为溶血素。5.1.3组织匀浆上清浚
颈椎脱门法处死动物，剖腹，小鼠取肾脏1只，肝脏1叶：大鼠取肾「只·小肠3cm,睾丸1只,并开胸取肺脏1Ⅲ。分别加人适量预冷馏水,蒸馏水与组织的比例一般为2：1（V/W）。分别用组纵匀浆器匀浆。匀浆液置低温高速离心机中，以16000r/rmin离心30min，以吸管吸取上清液存人小试管中备用
5.1.4样品保存
上述制备样品均新鲜便用，在普通箱中只能保存一天，在低温冰箱中保存不超过一个月，5.2电泳步骤
5.2.1没膜
GB/T 14927.1--2001
将乙酸纤维膜（板）轻轻浸人相应的电泳缓冲液中，浸人时应避免膜（板）上出现气泡。5.2.2点样
将浸透的膜(板),取出以滤纸吸干，纤维膜面朝上，平胃在点样板上，以点样器取预置在样品槽内的编号样品，在膜(板)上点样。一次点样量为0.3μI为增加膜（板)上的样品量，可重复点样，最适点样量不宜超过 (. 9 μL(三次)。
5.2.3电泳
以铅笔在膜（板）上标明原点，泳动方向，迅速将膜(板)搭在事先放入缓冲液的电泳槽纸桥上，盖上电泳槽，接通电源，电泳条件见本标准第6、第7二章。5.3染色
5.3.1蛋白染色法
电泳结束后取出膜(板)置人 0.2%丽春红染液中,10~15 min 后以竹镊子取出换以 7%乙酸脱色直至电泳区带清晰可见。
5.3.2酶显色板法
适用于乙酸纤维素膜。
5. 3.2. 1 将酶显色液(见附录B)新鲜混合。加人 2%热琼脂 3~4 mL,迅速混勾,均勾倒置在 6 cm×8 cm的玻璃板上，制成酶显色板5.3.2.2电泳结束后取出膜将点样面贴在酶显色板上，注意将膜与酶显色板间的气泡排尽，但不可移动膜的位置。
5.3.2.3将带膜显色板移至37℃温箱保温，直至酶区带清晰显现。5.3.2.4取下已显色的膜浸人5%~7%乙酸中终止反应。5.3.3琼脂覆盖法
适用于乙酸纤维素。
5.3.3.1电泳结束后取出乙酸纤维素板。5.3.3.2新鲜混合酶显色液(见附录B)迅速与2～3mL2%热琼脂混匀,均匀甸放在水平放置的乙酸纤维素板上
5.3. 3.3待琼脂冷却固定后,将乙酸纤维素板移人 37C温箱,直至酶区带清晰显现。5.3.3.4将乙酸纤维素板放人7%乙酸中终止反应。6小鼠生化标记检测细则
6. 1 碱性磷酸酶-1(alkaline phosphatase-1,Akpl)Chr,16.1.1样品：肾勾浆，0.6l。
6. 1.2缓冲液:Iris-Citrate pH8. 3见附录 A(标准的附录)中 A9。6.1.3电泳支持物：乙酸纤维膜（板）。6.1.4电泳条件：电压一200 V,时间=40)min,移动方向由负极至正极。6.1.5染色方法：酶显色板法。
6. 1. 6染色液:见附录B(标的附录)中 B10。6. 1.7 标准对照;
C57BT./6J
6. 1. 8判断方法:参照上述对照动物读出带型后与附录C(标准的附录)作比较。6. 1.9Ap1 电泳结果模式图,见图 1,4
GB/T 14927. 1—2001
图1A1电泳结果模式图
6.2碳酸酐酶-2(carbonic anhydrase-2,Car2)Chr.36.2.1样品：溶血素,0.3 μ。
缓冲液 NaC,H,(),EDTA pHS. 4 见附录 A(标准的附录)中 AI。6.2.2
6.2.3电泳支持物：乙酸纤维素膜。6.2.4
电泳条件：电压=240V，时间=10min，移动方向出正极至负极。6.2. 5
染色方法：蛋白染色法。
6.2.6染色液：见附录3(标准的附录)中B6。6.2.7 标准对照：
C57BL/6J
DBA/2J
6.2.8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C(标准的附录)作比较。6.2.9Cur2电泳结果模式图，先图2。h
图2Car2电泳结果模式图
6.3肾过氧化氢酶-2(kidney catelasr,Ce2)Chr.76.3.1样品：肾勺浆.0.3l..
6.3.2缓冲液:Tris-citrate pH7. 6见附录A(标准的附录)中的 A3.6.3.3电泳支持物：乙酸纤维素膜。6.3.4电泳条件：电压=200V，时间=25min，移动方向由负极至正极。6.3.5染色方法：酶显色板法。
GB/T 14927.1--2001
6.3. 6染色液：见附录 13(标准的附录)巾R8。6.3.7标推对照：
·快带
6.3.8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C(标准的附录)作比较。6.3.9（Ce2电泳结果模式图，见图3。圈
电冰结果模式
6.4 酯酶-1(e
6.4.1样品：
缓冲液
电泳支器
电泳条
6.4.5染色方浮
染件液：
标准对照：
-1,Es1)Chr
.3 μt.
phate buffer pH7:
乙酸纤维膜。
玉=140 V,时
色板法。
B（标准的附
判断方法：参照
nin，移会
联动物读惠
Fs1电泳结果模式图图
至正极。
（标准的附录）作比较
s1电源结果模式图
6-5嗨-3(esterase-3,Es3)Chr. 1l6.5.1样品肾、肝到浆,0.3L、
GB/T 14927.12001
6.5.2缓冲液:Tris-Glycile pII8. 9见附录A(标的附录) A7。6.5.3电泳支持物：乙酸纤维膜，6.5.4电脉条件：电压=280 V,时间28 min,移动方向由负极至正极。6.5.5染色方法酶显色板法。
6. 5. 6 染色液: 见随录 B(标准的附录)中 B16.5.7标准对照：
BALB/eJ
6. 5. 8判断方法:参照
6. 5.9Es3电泳结果格
6.6 酯酶-10(estera
6.6.1样品:肾、肝勾浆
6-6.2缓冲被:Tris-Glye
6.6.3 中球支持物:乙酸纤
最慢带
动物读
就图5。
10)Chr
C标准
Es3电泳结果模式图
A标的附录中
9克附氮
高附录作比转
6. 6. 4 电泳条件:电压=280 时间=28吨淘in.移动方向电负极至正极
6.6.5染色方法:酶显色板法
6.6.6染色液：见附录 B(标准的附录)川6.6.7标准对照：
BALB/eJ
DBA/2J
BUB/BuJ
最慢带
6.6.8判断方法：参照[述对照动物读出带型后与附录C标准的附录)作比较，6.6.9Fs10电泳结果模式图，见图66.7葡萄糖-t-磷酸脱氧酶 1(glucosc.6 phosphatc rlehydrogenase-1.Gpd1)Chr.46.7.1样品：新鲜肾或肝勾浆，0.9l.6.7.2缓冲液:Tris-Glyine plI8.9见附录A(标准的附录)中A7。6.7.3电泳支持物：乙酸纤维板（膜）。6.7.4
GB/T 14927. 1: 2001
Es10电泳结果模式图
电泳条件：电压一200V,时间=50 min，移动方向由负极至正极。染色方法:琼脂覆盖法。
染色液：见附录1(标准的附录)中B7。标准对照：
C57BL/6]
BALB/eJ
最慢带
6.7.8判断方法：参照上:述对照动物读山带型后与附录C(标准的附录)作比较。6.7.9Gpal1电泳结果模式图，见图？。■
图7Gpd1电泳结果模式图
6-8葡葡糖磷酸异构酶-1(glucosephosphateisomerase-1,Gpil)Chr.76. 8. 1 样品:溶血素,0. 3 μL. .6.8.2
缓冲液:Tris-Glycine pH8. 5 兜附录 A(标准的附录)中 A6。6.8.3电泳支持物：乙酸纤维膜。6.8.4
电泳条件;电压一200 V,时间一30 min,移动方向由正极至负极。6.8.5
染色方法：酶显色板法。
染色液：见附录B(标准的附录)中B3。标准对照：
BALB/cJ
C57BL/6J
GB/T 14927.1—2001
6. 8. 8 判断方法:参照上述对照动物读出带型后与附录 C(标准的附录)作比较。6.8.9Gpi1电泳结果模式图，见图8。b
Gpil电泳结果模式图
6. 9血红蛋白-β 链(hemoglobin β-chain,H6b)Chr, 76. 9. 1 样品:溶血素内加人 1/4 体积的烷化剂,见附录 B(标准的附录)中 B9,0. 3 uL。6. 9. 2 缓冲液:Tris-Glycine pH8. 5 见附录 A(标准的附录)中 A6。6.9.3电泳支持物：乙酸纤维膜。6.9.4电泳条件：电压=200V，时间30min，移动方向由负极至正极。6.9.5染色方法：蛋白染色法。
6. 9. 6染色液：见附录 B(标摊的附录)中 B6。6. 9. 7 标准对照,
C57BI./6J
BALB/eJ
6.9.8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C(标准的附录)作比较。6.9.9H66电泳结果模式图，见图9。Hbb
图9Hbh电泳结果模式图bzxZ.net
GB/T 14927.1-2001
6. 10 异柠酸脱氢酶 1 和苹果酸酶-1 (isacitrate dchydargenase-1,malic enzytne-l,Idh1 和 Mex1)Chr.I
样品：忏勾浆以蒸馏水1：4稀释,0.3pL，缓冲液：Tris-CitratepH7.6见附录A（标准的附录)中A3。电泳条件：电压=200 V,时间=35 min，移动方向出负极至正极。染色方法：酶妮色板法，
染色液：见附录B（标准的附录）中B4标准对照：
判断方法：
Idhl和M
遵对照动
绿结果模式
hasphog
6.11磷酸葡萄糖转位
6.11.1样品：肾勾浆，
缓冲液：1ris-Glyc
富佳的时录
见图！
dh2ModdhI
I和 Mod1 电泳
结果模式图
18.儿附录A0
宽泳支持物：乙酸纤继
唯的附录）中AG。
电泳条件：电压=200 V,时阀=40 min,移动方向由负极至正极。染色方法：酶显色板法。
染色液：见附录B(标准的附录)中B5。6.11.7标准对照：
C57BL/61
6.11.8判断方法：照,上述对照动物读出带型后与附录C(标准的附录)作比较。.6.11.9Pgml电泳结果模式图，见图1t6.12转铁蛋白(rransferin,1r)Chr.96 12. 1样品:血清,0.3 μL
6. 12. 2缓冲液: Tris-Glycine pI18. 5 见附录 A(标推的附录)中 A6。6.12.3电泳支持物：乙酸纤维膜。10
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