本部分规定了鱼类荧光假单胞菌赤皮病的诊断方法。本部分适用于鱼类赤皮病的诊断。 SC/T 7201.4-2006 鱼类细菌病检疫技术规程 第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法 SC/T7201.4-2006 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS65.020.30
中华人民共和国水产行业标准
SC/T7201.4—2006
鱼类细菌病检疫技术规程
第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法Rules for quarantining bacterial diseases of fishPart 4:Diagnostic method for Red-skin disease2006-12-06发布
2007-02-01实施
中华人民共和国农业部发布
S/T7201《仙类细菌病检疫技术规程》分为孔个部分：第1部分：通用技术；
第2部分：性状嗜纤维菌烂鳃病诊断方法；第3部分：嗜水气单胞菌及豚鼠气单疱菌肠炎病诊断方法：—第4部分：荧光假单跑菌赤皮病诊断方法；第5部分：白皮假单胞菌口皮病诊断方法本部分为SC/T7201的第4部分。
本部分由中华人民共和国农业部渔业局提山。SC/T7201.4--2006
本部分由全国水标准化技术委员会归口：本部分起草单位：中国水产科学研究院长江水产研究所、中国水产科学研究院珠江水产研究所。本部分主要起草人：何厅、邹为民、徐忠汰、姜兰、周瑞琼、罗晓松。33
1范围
鱼类细菌病检疫技术规程
第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法本部分规定了鱼类荧光假单胞菌赤皮病(red—skin disease)的诊断方法。本部分适用于鱼类赤皮病的诊断。2规范性引用文件
SC/T7201.4—2006
下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。SC/T7014—2006水生动物检疫实验技术规范SC/T7201.1—2006鱼类细菌性病检疫技术规范第1部分：通用技术3病原体与流行情况
3.1主要病原体
荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）。3.2流行情况
草鱼、青鱼、鲤、鲫、团头鲂等多种淡水鱼均可患此病。全国各地，一年四季都有流行，尤其是在捕捞、运输或北方越冬后，造成鱼体受伤，最易暴发流行。4试剂
除非另有说明，在检验中仅使用确认为分析纯的试剂、蒸馏水或去离子水。常用试剂见SC/T7201.1—2006的3.1试剂与染色液的配制应符合SC/T7201.1—2006中附录A的规定。4.1发酵试剂管（甘露糖、山梨醇、阿拉伯糖、葡萄糖、海藻糖、肌醇）。5培养基
5.1普通营养琼脂培养基
5.2蛋白藤葡萄糖磷酸盐培养液
5.3硝酸盐液体培养基
5.1.5.2和5.3培养基的配制见SC/T7201.1-2006中附录B。6设备和器械
应符合SC/T7201.1-2006第4章的规定。7采样
应符合SC/T7014—2006第4章的规定。35
SC/T 7201.4-2006
8诊断
8.1临床诊断
8.1.1活动情况
病鱼行动迅缓，离雌独游。
8.1.2外部检查
体表出血发炎，鳞片脱落，尤其是鱼依两侧及腹部最为明显；鳍条的基部或整个鳍条充血，鳍的末稍端腐烂，常烂去段，鳍条间的软纠织也常被被坏，使鳍条呈扫骨状，在体表病灶处常继发水霉感染，部分鱼的上、下颁及鳃盖也充血发炎，鳃盖内表面的皮肤常被腐蚀成一圆形或不规则形的透明小窗，显示与细菌性烂鳃病的复台感染：
8.2实验室诊断
8.2.1样品处理
用刀片刮除病灶魔烂部分后斥接种环挂取病料，在普通营养凉脂培养基上平板划线，25℃·-30℃培养24 h.
8.2.2茵落形态
培养基上菌落圆形,边缘整齐，空灰凹色，平透明,20h万始产牛绿色或英绿色的色素，弥漫培荠基。8.2.3革兰氏染色
在一于净裁玻片上滴加，-滴蒸馏水；政菌潜少许与燕馏水混合并均句涂布，白然十燥，火焰固定；加草酸铵结品紫染液染1min~2rin,加水冲洗；苹兰氏染色用碘液作用1min--2rrin，水冲洗：加复红酒精染液染50s60s.加水冲洗，下燥镜捡，被染成紫蓝色为阳性。荧光假单胞菌为阴性，8.2.4生化检验
8.2.4.1甲基红和V.P试验
用接环挑取单个菌落少许，接种十蛋白葡简糖磷酸盐培养液，置37℃培养24h后，分别取2ml培养液十两只小管小。前者加于基红试剂2滴轻摇后观察，出现红色为阳性：后者如入6%α茶粉洒精溶液1mL，再加入40%氢氧化钾溶液0.4ml充分振荡，室激下静置5min～30min后观察，量红色反应为阳性：荧光假单胞菌均为阴性。8.2.4.2发酵试验
月接种环或接种针挑取单个菌落少许，分别接和比露糖、山梨右旋阿拉伯、葡萄糖、海藻精，肌醇等6种发酵试验管：28C培养24h：凡试验管颜色从紫色变为黄色，表明细菌可发酵该种糖类，判定为阳。斐光假单跑菌可发醇以「6种糖类。8.2.4.3氢化酶试验bzxz.net
将少许菌落涂布于漫有1%盐酸泗甲基对米胺的滤纸上。10$内观察涂布处的颜色，出现红色则为阳性。荧光假单跑菌应为阴性。8.2.4.4吲哚试验
在长有细菌的培养基上，沿管壁滴相3滴～4滴吲哚试剂,若试管内壁山现红色坏者，为反应阳性。荧光假单胞菌为阴性。
8.2.4.5硫化氢试验
用接种针取少许菌落在氯化铁试管培养基穿刺接种，30℃培养241观察，培养基变黑为阳性反应。荧光假单胞菌为阴性。
8.2.4.6硝酸盐试验
取少许菌落接种硝酸盐液体培养基中,置 30:培养 24 h后,拓 1 滴--2 滴格里斯氏试剂的 A 液和没。溶液如有红色出现,则表明硝酸盐还原阳性，荧光假单胞菌为还原阴性36
9判定
符合以下所有特性者可判定病原菌为荧光假单胞菌：a）菌落形态符介8.2.2的规定；SC/T 7201.42006
b）发酵试验、氧化酶试验附性：c）甲基红试验、V.P·试验、革兰氏试验、吲哚试验、硫化氢试验利硝酸盐试验阴性。临床诊断结果符合8.1的规定，病原菌判定为荧光假单胞菌，可判定为冰皮病。37
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