本标准规定了奶粉中叶黄素的高效液相色谱测定方法。本标准适用于奶粉中叶黄素的测定。 GB/T 23209-2008 奶粉中叶黄素的测定 液相色谱-紫外检测法 GB/T23209-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

CS 67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T 23209-2008
奶粉中叶黄素的测定
液相色谱-紫外检测法
Determination of lutcin in milk powder--HPLC-UV melhod2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录。言
本标雅出中华人民其和国国家质量监替检验检疫总局提业并归口。GB/T23209-2008
本标雅起草单位：中华人民共利和国案岛出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳山人境检验检疫局。
本标准主要起草人：陈波、谢丽琪、林熊牵、靳保辉、灵风琪、庞国芳。http://foodmate.net1范围
奶粉中叶黄素的测定
液相色谱-紫外检测法
本标准规定了奶粉中叶黄素(lutein)的高效液相色谱测定方法标准适而于奶粉中叶黄素的测定本标准的方法检出限为0.05mg/kg。2规范性引用文件
CB/T 23209--2008
下列文件中的条款通过本标证的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括谢误的内容)或修订版均不适用于本标雅，然而，鼓根据本标谁达成协议的各方研究足否旧使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用了本标准。GB/T 6379. 1测民方法与结果的推确度（正确度与精密度）第1 部分，总则与定义(GR/T6379.12004.ISO57251.1994.IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（上确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法真复性与再现性的基本方法（B/T6379.2--2004，1S0)5725-2：1994，IDT）G13/T6682分析实验室用水现格和试验方法（GB/T65822008IS0)3696：1957,MOD）3原理
奶粉中咀黄素用酮提取，浓缩后用高效被相色谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料
水为符合CB/T6682规定的--级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2甲基J基醚：色谱纯，
4.3二氯甲烷：色谱纯。bzxZ.net
4.4丙酮：优级纯。
A. 5 2,6-‘-授下基对甲酚(BIIT):纯度99%。4.6含0.1%13HT的丙酮溶液：称取0.500g1311T（4.5）于00mL.容量瓶中，用丙附（1.4)溶解并定萃个刻度。
4.7叶素：纯度96.2，
4.8标准诺备溶液（10001g/L）称量19.0mg标准物质，用氯叫烷（4.3)溶解并容至10ml.容量瓶，在一80冰箱中避光保存。4.9标旌[间溶液：吸取标准储备溶液下-10nl.容量瓶，用中醇定至刻度，充分混匀，配制成20m/1.标准中间济液，将标准中间溶液分装丁没相小瓶中，作一80℃冰箱中避光仅在4.10标准工作滚液：根据灵敏度和使用微要，用丙酮溶液（4.C)稀释成标痱工作济液，此标雅T.作溶液器1分析前临时配制，
4.11滤膜：0.2m，
GB/T 23209—2008
5仪器
5.1高效液色谱仪，配紫外检测器。5.2分析大半，感量0.1mg。
5.3液体混合器。
5.4氮气浓缩仪。
低湿离心机：转速不低于5 000 r/min，可离冷到-4℃。6样品保存
将奶粉样品于常温下密封保存。7测定步骤
7.1提取
确称取奶粉0.5g,精碗至0.0019，置于50 tml繁丙烯离心臀小。乍避光条作下,加入10 mL丙酮溶液（4.6），振荡提敢约3min。以5u001/min低温离心5min，移取上滑液夜于准的15=L离心管，下30℃氮吹浓继至少于1ul。用丙酮落液（4.6)定伞1mL，液体混合器分振荡混勾，样液过们2让五滤膜,用液相色谱仪测定，外标法定最，7.2测定条件
7.2.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：YMctM Caronoid,5μu,2it) nmX4.i rmm（内径)或相当者：科温:25 ℃;
流速:l. 0 nL/min:
检测波长：445m：
进祥量：50m；
梯度洗脱条件见表！。
表 1 液相色滋梯度洗脱条件
时/in
7.2.2液相色请测定
甲醇/%
甲基救」基酵/治
开叶黄素标准工作溶液分别进样，以标准L作落液浓度为标，以峰积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品逆行定录，样品济液中叶黄紊的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，叶黄素的参考保留间为.0n。叶黄素的奶粉基质加标液相色谱函多图A，1本标准长尚回改率的试验数据参见附录B。7.3平行试验
按述步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.4空白试验
除不加标外，与按「述分析非骤进行。ht
8结果计算
外标法定量，按式（1)计算试样中叶黄素含量：X=cx
我中：
X—样品中待测组分的含量.单位为毫克每千克（ug/kg)；GB/T 23209—2008
一从标准二作出线得到的试样溶液中待测组分的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；V
试样溶液定容体积,单位为毫升（nL);最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克（g），计算结果应扣除空白值。
9精密度
9. 1 一般规定
本标推精密度数据是按照 GB/T 6379. 1 和CB/T 6370.2 的谢定确定的,其重复性和再现的值以95%的可信度米计算。
9.2重复性
在章复性试验条件下，试样中叶费素含量在7.Umg/kg-~50.0mg/kg，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，重复性限按式（2)计算：lg7=G.7195igm].171 2
武中：
一两次测定值的乎均值，单位为毫克于克（mg/k），..-(2)
如果两次测定值的差值超过重复性限，则应舍弃试验结果并重新完战两次单个试验的测定，9.3再现性
在再现性试验条件下，试样中叫黄索含量在1.0ng/kg-~50.0g/kg，获得的两次独.立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,再现性限按式(3)计算：R = 0.121 5 m 1 0.003 1
式中：
m一两次测定值的长均值，单位为案克年F点（mg/kg）品秋伴网
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附录A
（资料性附录）
叶黄素的奶粉基质加标液相色谱图叶黄素的奶粉基质加标液相色谱图见图A。1。G. n
图4,1叶黄素的奶粉基质加标液相色谱图http://foodmate.net9
附录B
（资料性附录）
回收率
本标准中叶英素添加浓度及平均问收率的试验数据：在添加量为50μg/kg时：平均可收率为96.2%：在添加量为100g/kg时，半均回收率为97.%：在添加量为200g/k时，半内回收率为196.！：%；在添州量400g/kg时，平均回收率为93.0%：在添加量为5,0 mg/kg时，平均问收率为98.1%。http://foodmate.netGB/T 23209—2008
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打即期：209图28下
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奶粉中叶黄素的测定
液相色谱-紫外检测法
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