本标准规定了河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氢可的松九种糖皮质激素残留量的液相色谱?串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中九种糖皮质激素残留量的测定。 GB/T 22957-2008 河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中九种糖皮质激素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T22957-2008 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICs 67. 050
中华人民共和国国家标准
GB/T22957—2008
河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中九种糖皮质激素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of nine glucocorticoids residues in fugu,eel and baked eel-LC-MS-MS method
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录 A、附录B为资料性附录。本标推由国家质量监督检验检接总厨提出井归。本标准起草单位：中华人民共和国案皇岛出人境检验检疫局本标准主要起草人：刘永明、李金、吴艳葬、冯冠，蕾彦忠、庞国芳GB/T22957—2008
1范围
河豚鱼，鳗鱼及烤鳗中九种糖皮质激素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T 22957—2008
本标准规定了河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松可的松，甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氧可的松九种糖皮质激素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中九种糖皮质激索残留量的测定。本标准的方法检出限：泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松.地塞米松为0.2μg/kg；倍氯米松、醋酸氟氢可的松为1.0μg/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标推达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标推。GB/T6379.1测量方法与结果的推确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1—2004,ISO 5725-1:1994,IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标推测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T6379.2---2004,IS05725-2：1994,IT)GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696：1987MOD）3原理
河豚鱼，鳗鱼、烤鳗样品中加人无水硫酸钠，用乙酸乙酯提取，提取液浓缩后，经过硅胶固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料
4.1水.GB/T6682—级。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3乙睛：色谱纯
4.4乙酸乙酯：色谱纯。
4.5甲酸：优级纯。
4.6正已烷：色谱纯。
4.7丙酮：色谱纯。
4.8丙酮-正已烷溶液：内酮+正已烷（2十3）。量取200mL丙与300mL正已烷混勺。4.9无水硫酸钠：分析纯。在650℃马弗炉中灼烧6h，储存于干爆器中。4.10泼尼松龙（CAS：50-24-8），泼尼松（CAS:53-03-2）、氢化可的松（CAS：50-23-7）、可的松（CAS：53-06-5），甲基泼尼松龙（CAS：83-43-2）、倍他米松（CAS；378-44-9）、地塞米松（CAS：50-02-2)、倍氟米松(CAS：4419-39-0)醋酸氟氢可的松(CAS:514-36-3)标准物质：纯度≥98%。4.111.0mg/mL标推储备溶液：分别准确称取适量的糖皮质激素标准物质，用甲醇溶解，分别配制成1
GB/T 22957-—2008
1.0mg/mL储备溶液。配成的标准储备液应在温度低于一20℃冰箱中保存，4.125.0拟g/mL标准工作溶液：分别准确吸取适量的糖皮质激素标准储备溶被，用甲醇分别配制成5.0μg/mI.标准工作溶液。配成的标工作溶液应在温度低于4℃C冰箱中保存。4.13混合标推工作溶液I：分别吸取适量的氨化可的松和可的松标准工作溶液，用甲醇配成浓度为005/mL的混合标工作溶液。此溶液应在溢度低于1C冰箱中保存。测定样品使用时，用20%乙睛溶液将混合标准工作溶液I配成不同浓度的的混合标准工作溶液。4，14混合标准工作溶液Ⅱ：分别吸取适量的泼尼松龙、拨尼松，甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氢可的松标准工作溶液，用甲醇配成泼尼松龙、泼尼松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松为0.05产/mL，倍氣米松、醋酸氟氢可的松为0.25B/1mL的混合标推工作溶液。此溶液应在温度低于4 冰箱中保存。
4.15基质混合标准工作溶液：用空白样品提取液将混合标准工作溶液IⅡ配成不同浓度的基质混合标准工作溶较。此溶液应现用现配。4.16CleanertSilica固相萃取柱或相当者：500rmg，6mL。使用前用6mL正已烷预处理，保持柱体湿润。
4.17滤膜：0.2μm，
5仪器
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷签离子源(ESI)。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.3固相萃取真空装置。
5.4真空泵：真空度应达到80kPa。5.5均质器。
5.6振荡器。
5.7高速冷冻离心机：转速13000r/min5.8旋转蒸发器。
5.9氮气浓缩仪。
5.10具塞塑料离心管：50 mL。
样品管：10 ml.。
5.12梨形瓶：150mL。
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约」kg，充分搅碎，混勾，均分成两份，分别装入洁净容器内，密封作为试样，注明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.2试样保存
将试样于一18C冷冻保存。
7测定步骤
7.1提取
称取5名试样（精确到0.01g).置于50mL具塞塑料离心管中,加入10g无水硫酸钠,25 mL乙CleahertSilica固相举敢柱是Agela公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标推的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。2
GB/T 22957—2008
酸乙酯，用均质器均质1min,在振荡器中振荡20min,以10000r/min离心10min，取上清液至形瓶中。再用25 nL乙酸乙酯提取一次，合并[清液,用旋转蒸发器于 45 ℃水浴上减压蒸发至近干,用1mL乙酸乙酯和5mL正己烷溶解。7.2净化
将提取液移至经预处理的 Cleanert Silica 固相萃取柱中,用 6 mL 正已烷洗资裂形瓶和萃取柱,弃去全部流出液。减压抽干1min，用6mI.丙酮+正己烷（2十3)洗脱，收集洗脱液于10tnL样品管中，用氮气浓缩仪吹干,用 1 mL 20乙晴溶液溶解残渣,以 4 000 r/min 离心5 min，上清液过0.2 μm 滤膜,供液相色谱-串联质谱仪测定。
7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
位谱柱:Atlantis Cis:3 μm,150 tmtn×2. 1 mm(内径)或相当者：柱温：30℃
进样量;20 μLl
流动相、流速和梯度洗脱条件见表 1表 1 流动相、流速和梯度洗脱条件时间/min
质谱参考条件
流遵/(μL/min）
离子源：电喷雾离子源（ESI);
扫描方式：负离子扫描；
检测方式:多反应监测;
气帘气压力：0.138MPa;
雾化气压力：0.276MPa;
辅助加热气压力：0.138MPa：
离子源温度：500℃；
乙腈/%
定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量见表2，0.1%甲酸溶液/%
表 2糖皮质激素的定性离子对、定离子对、去簇电压和碰撞能量化合物中文名称
泼尼松龙
泼尼松
氢化可的松
可的松
化台物英文名称
prednigolone
prednisone
hydrocottisone
cortisone
定性离子对(m/2)定册离子对(m/2)405/329
405/359
403/327
403/357
407/331
407/361
405/329
405/359
405/329
403/327
407/331
405/329
去簇电压/V
碰撞能量/V
GB/T 22957-2008
化合物中文名称
中基设尼松龙
倍他米松
地塞米松
倍氯米松
醋酸氟氢可的松
化合物英文名称
methylprednisnlone
betamethasone
dcxamethasone
beclomethasone
fludrocortisone
acetate
7. 4液相色谱-串联质谱测定
7. 4. 1 定性测定
表2(续）
定性离子对(m/2)
419/343
419/373
437/361
437/391
437/361
437/391
453/377
453/407
467/421
467/349
定量商子对(m/2)
419/343
437/361
437/361
453/377
467/421
去簇电压/V
磁撞能量/V
每种被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合标准工作溶液的保留时间偏差在士2.5%之内；Ⅱ样品谱图中各组分监测离子的相对丰度与浓度接近的混合标准工作溶液谱图中对应的监测离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差表3
相对离子丰度K
允许最大偏差
7.4.2定量测定
20 K 50
10 K <20
以%表示
K≤10
外标法定量。在仪器最佳工作条件下，对混合标准工作落液I和基质混合标推工作溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，九种糖皮质激紫的参考保留时间见表4，九种糖皮质激紊的多反应监测（MRM）色谱图参见附录A中的图A1。本方法的添加回收率数据参见附录B中的表B.1。表4九种糖皮质激素的参考保留时间化合物名称
浚尼松龙
浚尼松
氢化可的松
可的松
甲基波尼松龙
7.5平行试验
保留时间/tnin
11, 96
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7. 6空白试验
除不称取试样外，均按上述步进行。化合物名称
倍他米松
地塞米松
倍氯米松
酯酸氟氢可的松
保留时间/min
8结果计算
九种糖皮质素残留是的测定结果按式(1)计算X=c×
式中：
x--试样中被测组分残留量,单位为微克每干克(ug/kg);GB/T 22957—2008
从标推工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；V
-样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL)-样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克（g）。计算结果应扣除空白值。
9精密度
9.1—般规定
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
9.2重复性
在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限，糖皮质激素添加浓度范围及重复性方程见表5。
5添加滚度范围及重复性和再现性方程化合物名称
浚尼松龙
泼尼松
氢化可的松
可的松
甲基泼尼松龙
倍他米松
地塞米松
倍氯米松
醋酸氟氢可的松
添加被度范压
0. 2 ~ 5. 0
0. 2~5. 0
0. 2~-5. 0
0. 2 ~5. 0
0. 2~5. 0
0. 2--5. 0
注：m为两次卿定结果的算未平均值重复性限，
Igr=-0. 859 4 1g m-0. 778 2bZxz.net
T= 0.2100 7n-0.000 6
Igr=-1. 096 2 lg m-0. 722 6
Igr--0. 955 2 lg m-0. 758 4
Igr=-1. 062 1 Ig m-0, 718 7
Igr=1. 068 6 Ig m-0. 689 9
Igr=1. 121 7 Ig m-0. 690 0
Igr=0. 999 3 1g m—0. 722 2
r-0. 109 2 m+0. 127 9
单位为微克每千克
再现性限R
R=0, 170 3 m+0, 031 9
1gR=1. 079 8 Igm-0. 619 6
IgR = 1. 114 2 Ig m- 0. 661 4R=0. 236 f m-0. 004 1
IgR=0. 964 3 Ig m-0. 642 3
IgR= 1. 358 5 Ig m- 0. 616 8lgR=1. 188 2 Ig m- 0. 622 9
1gR= 0. 861 3 lg m-0. 478 3
IgR=0. 929 2 lg m -- 0. 591 5如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两单个试验的测定。9.3再现性
在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，糖皮质激素添加浓度范围及再现性方程见表5。
GB/T 22957—2008
附录A
（资料性附录）
九种糖皮质激素的多反应监测(MRM)色谱图九种糖皮质激索的多反应监测（MRM)色谱图见图A,1。11.63
1600双尼松龙
2 4 6 8 10 12 14 16±/min
震2000
1600甲燕没尼松龙
1200号
400号
12, 71
拨尼松
3200可的松
10121416/mi
醋酸氮氢可的松
810121416//min
6810121416/min
微1600
氢化可的松
3200地塞米松
400号
246810121416/min
24681012116/min
810121416/min
倍他求松
F\R1b 12 14 161/min
倍氨米松
246B10121416/mim
图A1九种糖皮质激囊的多反应监测(MRM)色谱围附录B
（资料性附录）
本方法九种糖皮质激素的添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1。表 B. 1
九种糖皮质激素添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称
浚尼松龙
浚尼松
氢化可的松
可的松
甲基泼尼松龙
倍他米松
地米松
倍氯米松
酷酸氟氢可的松
添加浓度/μg/kg）
GB/T 22957—2008
平均回收率/%
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。