本标准规定了测定饲料中色氨酸的原理和方法。本标准适用于配合饲料、混合饲料、浓缩饲料和单一饲料。 GB/T 15400-1994 饲料中色氨酸测定方法--分光光度法 GB/T15400-1994 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
饲料中色氨酸测定方法
分光光度法
Determination of tryptophan in feedstuffs-Spectrophotometry
主题内容与适用范围
本标准规定了测定饲料中色氨酸的原理和方法。本标准适用于配合饲料、混合饲料、浓缩饲料和单一饲料。2引用标准
GB6433饲料粗脂肪测定方法
3原理
GB/T 15400---94
饲料中蛋白质经碱水解后，降解成多肽和游离的氨基酸，在酸性介质中，氧化剂存在下，色氨酸吲哚环与对二甲氨基苯甲醛反应生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。4试剂
除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。4.1硫酸(GB 625)溶液、c(1/2H2SO.)=21.2mol/L量取589ml.硫酸徐徐加入约350mL水中，冷却后用水稀释至1L。4.21%对二甲氨基苯甲醛溶液：
1.0g对二甲氨基苯甲醛溶于21.2mol/L硫酸（4.1)中并定容100mL。4.30.2%亚硝酸钠(GB633)溶液（m/V)。4.410%氢氧化钾(GB2306)溶液（m/V)。4.5I色氨酸，色谱纯。wwW.bzxz.Net
4.6L-色氨酸标准溶液：
准确称取25.0mgL-色氨酸于小烧杯中，加少量0.1mol/L氢氧化钾溶液使之溶解，定量地转移到250mL.棕色容量瓶中，用水定容，浓度为100μg/mL。注：本标准溶液4℃冰箱中保存，一个月内使用，浓度不变。5仪器、设备
5.1分析天平：感量0.1mg。
5.2分光光度计。
5.3离心机：转速4000r/min。
5.4实验室用粉碎机。
国家技术监督局1994-12-30批准216
1995-07-01实施
5.5培养箱。
5.6容量瓶：25mL、50mL、250mL。5.710mL具塞试管。
GB/T 15400-94
5.8刻度吸管:0.5mL、2ml.、5mL、25ml6试样的制备
6.1选取有代表性的试样，按四分法缩分至200g，粉碎，全部通过0.25mm孔径筛（60日）。6.2按GB6433脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后，混匀，装入密封容器内备用。7分析步骤
7.1工作曲线的绘制
7.1.1吸取色氨酸浓度为100μg/mL的标准溶液（4.6)5.00、7.50、10.00、12.50、15.00、17.50mL分别置于25ml.棕色容量瓶中用水定容，摇匀。溶液浓度分别为20、30.40、50、60、70μg/mL。7.1.2吸取各浓度溶液（7.1.1)1mL，分置具塞试管(5.7)中，空白管加1mL水。向每支试管内加入氢氧化钾溶液（4.4)1ml，混匀，将试管放入冷水盆中，加5mL对二甲氨氮基苯甲醛溶液（4.2)，从冷水盆中取出试管，摇句，在室温（20～30℃，下同）放置30min。7.1.3向上述每支试管内加0.2mL亚硝酸钠溶液（4.3），摇匀，室温放置25min。7.1.4以空白管调零，在590nm波长下，以1cm光径测定各溶液吸光度值。7.1.5以色氮酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制工作曲线，或列出回归方程式。7.2样品测定
7.2.1称样：按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份，精确至0.1mg。7.2.2水解：将试样置于50mL容量瓶（5.6)中，在轻轻振摇中缓慢加入25mL氢氧化钾溶液（4.4），使试样湿润且不粘壁，置于40士1℃培养箱（3.5)中水解16~18h。7.2.3离心：取出水解液冷却至室温后，用水定容，摇匀，取部分水解液以4000r/min转速离心15 min。
7.2.4显色：取2mL上清液置具塞试管（5.7)中，并将试管放入冷水盆中，加入5mL对二甲氮基苯甲醛溶液（4.2），摇勾。每个试样另取2mL上清液于具塞试管（5.7)中，加5mL硫酸溶液（4.1)作为样品空白，摇匀，室温放置30min。然后向每支试管内加入0.2mL亚硝酸钠溶液（4.3），摇勺，室温放置25 min。
7.2.5比色：以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测定样品溶液的吸光度值。8分析结果的表述
8.1计算公式
色氨酸（脱脂样）（%）=
m × 103
A× 25 × (-F) × 100
色氮酸(原样)（%）=
式中：m脱脂试样质量，mg；
A-从工作曲线上查得色氨酸含量，ug；F——脂肪分率。
8.2结果的表示
·（1）
.........( 2)
GB/T15400-
两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。试样脂肪含量小于 4%时，式(1)和(2)所得结果在允许偏差之内。8.3重复性
两个平行样品测定值的相对偏差，当色氨酸含量小于0.1%时，不大于4%；0.10%～~0.50%时，不大于3%；大于0.50%时，不大于2%。218
GB/T 15400—94
附录A
称样量
（参考件）
根据样品蛋白质、色氨酸含量确定称样量，经试验研究建议不同饲料称样量如下：蛋白质含量，%
10以下
41～50
50以上
附加说明：
高粱、玉米
小麦、大麦、糠麸、糠饼、配合料、混合料、各种叶粉等干酒糖、干粉渣、豆腐渣、杂豆、糟渣类棉仁饼、菜籽饼、蘑麻饼、向日葵饼、浓缩料虾粉、豆饼、芝麻饼、酵母、豆粕、花生饼、国产鱼粉鱼粉、血粉、肉骨粉、蚕蛳、羽毛粉本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国农业分析标准化技术委员会归口。称样量，mg
650～700
450~500
350~400
200~250
180~~200
160~180
本标准由中国农业科学院分析测试中心，山西省农科院作物遗传研究所、黑龙江省农业科学院实验技术中心、上海市农业科学院作物育种裁培研究所共同起草。本标准主要起草人崔淑文、王淑芬、郑云兰、马宗兰、马东。219
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