本标准规定了用高效液相色谱法测定胡椒碱含量的方法。本标准适用于黑、白胡椒和黑、白胡椒粉及其含油树脂抽提产物中胡椒碱含量测定。 GB/T 17528-2009 胡椒碱含量的测定 高效液相色谱法 GB/T17528-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 67. 200. 10
中华人民共和国国家标准
GB/T17528--2009
代替GB/T17528：1998
胡椒碱含量的测定
高效液相色谱法
Determination of piperine content-Method using HPLC(1S0 11027:1993,Pepper and pepper oleoresins--Determinationof pipcrine content --Method using high-performance liguidchromatography,MOD)
2009-04-03发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局蚊码齿
中国国家标准化管理委员会
2009-09-01实施
GB/T 17528—2009
本标准修改采用1SO11027：1993（胡椒和胡椒油树脂胡椒碱含量的测定“高效液相色谱法》(Peppcr and pepper oleoresins Detcrmination of piperine cantcnt Methud using high-performanrcliquid chromatography)，
本标准与ISO11027：1993的主要差异如下：将 ISO 11027:1993 的名称修改为 Dcterminalion of piperinc content—Method using high-per-farmance liguid chromatography;增加「方法的检出限；
将ISO11027：1993中6.2却椒碱标准溶液的浓度范围\0.05g/[.~0.2g/L”修改为\0.4mg/L--2.0me/L\;
将IS011027：1993中4.3所用流动相艺睛-1%乙酸（4852)\修改为\中醇-水（77+23）\；取消IS011027：1993中10.1和10.2计算公式的计算因子，因修改后的计算公式无计算因子。
本标准代替GB/T17528-—1998《胡椒碱含量的测定分光光度法》本标准与GB/T17528--1998相比主要差异如下：将分光光度测定法改为高效液相色谱测定法。本标准的附录A为资料性附录，
本标推由中华人民共和国农业部提出。本标雅山全国辛香料标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心(湛江）。本标准主要起草人：杨春亮、程盛华、珍莲、周慧玲、林玲、查玉兵。准标准于 1998 年10 月首次发布。品化伴
1范围
胡椒碱含量的测定
高效液相色谱法
本标推规定了用高效液相色谱法测定胡椒碱含量的方法。GB/T 17528--2009
本标准适用于黑、白胡板和照、白胡椒粉及其含油树脂抽提产物中胡椒碱含量测定。本标准的方法检出限为0.008g/100g。2原理
试样中的胡椒碱用乙提取，用高效液相色谱紫外捡测器检测，外标法定量3试剂
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离了水或相当纯度的水。3.1乙醇(CH,CH,OH)：95%(质量分数）。3.2甲醇(CH:OH):色谱纯。
3.3胡椒碱标雅物质：纯度≥98%。3.4胡傲碱标摊溶液：准确称取（10士0.1）mg胡椒碱标准物质于：10ml.棕色烧杯中，用乙醇（3.1)漆解，转够至10mL棕色容量瓶中，用乙醇（3.1)定容至刻度，此溶液的质量浓度为1000mg/L(临用时配制)。
3.5胡椒碱标准工作液：用微量移液器吸取50μL胡椒碱标准溶液（3.4），置于25mT.棕色容量瓶中，加乙醇(3.1)稀释至刻度，此洛液的质最浓度为2.00t1g/L4仪器
4.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。4.2组织捣碎机。
4.3样品筛：孔径为500μm。
4.4棕色圆底烧瓶：100mL,配套冷凝回流装置。4,5棕色容量瓶:10 mL,25 mL,100 mLs5试样制备
5.1整粒胡椒
用捣碎机（4.2)将样品粉碎，直至全部通过样品筛（4.3），储于棕色瓶中备用。5.2胡椒粉
将所有样品通过样品筛（4.3），不能通过筛网的，用捣碎机（4.2)粉碎，直到粒径达到要求为止，储于棕色瓶中备用。
5.3胡椒油树脂
使样品充分哟勾化。
6分析步骤
注：由于胡概碱溶液不稳延，见光易分解，避光操作很有必要。操作中用铝箱或黑纸将烧瓶和容盘瓶包变起来，并尽可能快地測定。
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GB/T17528-—2009
6.1提取
6.1.1从制得的胡椒试样(5.1)或胡椒粉试样(5,2)中称取0.2g~-0.5多试料，精确至0.0001多，置于烧瓶（4.4）中，加人50mL乙醇（3.1），装上同流冷避管，加热至沸，保持回流3h，冷却至密温后，将溶液滤入100mL棕色容量瓶（4.5）中，用乙醇（3.1)少量多次冲洗抽提瓶和过滤器，洗液并滤人容量瓶中，并加乙醇（3.1)至刻度，摇勾备用。6.1.2从胡椒油树脂试样(5.3)中称取0.05g~-0.1g试料，精确至0.0001g.置于100mL棕色容瓶（4.5）中，用乙醇（3.1）稀释至刻度，摇勺备用。6.2标准曲线制备
准确吸取适量胡椒碱标准T.作液（3.5），用乙醇（3.1）稀释成质晟浓度分别为0.40mg/L、0.80mg/L、1.20mg/L、1.60mg/L租2.0mg/L的标准溶液（现用现配）然后分别吸取10l.注人色谱仪(4.1)测定并绘制标摊曲线。6.3色谱条件
6.3.1色谱柱：C，200mm×4.6mm，5μm，或相当者。6.3.2流动相：甲醇·+水=77-23。6.3.3流速:1.0 mL/min。
6.3.4色谱柱温度：30℃。
6.3.5检测器波长：313m。
6.3.6逃样量：10μ。
6.4测定
准确吸取1ml～3mL提取液（6.1)，置于25mL棕色容量瓶（4.5）中，用乙醇（3.1)稀释至刻度，然后吸取10uL注入色谱仪（4，1)进行测定，与标准曲线比较求出胡椒斌的含量。同时做空白试验，7结果计算
试样中胡椒碱的含量以质量分数w计，单位以克每百克(g/100g)表示，按式(1)计算。e×V: ×25
V,XmX10\
式中：
m-：试料质量，单位为克(g)；
β—测定试液中胡椒喊的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)Vi—试料定容体积，单位为毫升(mL)；分取提取液体积，单位为毫升(nL)。V
计算结果保留三位有效数字。
8精密度
在望复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10%，以大于这两个测定值的算本平均值的10%情况不超过5%为前提。9胡椒碱标准色谱图
标准色谱图参见附录A。
附录A下载标准就来标准下载网
（资料性附录）
胡椒碱标准色谱图
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图A,1
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GB/T 17528-2009
打印1「期：2009年7月14日
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胡椒碱含量的测定高效液相色谱法GB/T 17528—2009
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