本标准规定了食品中禁用物质———碱性橙染料的检测方法。本标准适用于食品中禁用物质———碱性橙染料的高效液相色谱法检测。本标准中碱性橙２、碱性橙２１、碱性橙２２的检出限为０．０１ｍｇ／ｋｇ。 GB/T 23496-2009 食品中禁用物质的检测 碱性橙染料 高效液相色谱法 GB/T23496-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T23496—2009
食品中禁用物质的检测
碱性橙染料
高效液相色谱法
Determination of forbidden materials in foods-Dyes of basic orange-Highperformance liquid chromatographymethod2009-04-27发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
数码防伪
2009-08-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由中国标准化研究院提出并归口。GB/T23496—2009
本标准起草单位：湖北省产品质量监督检验研究院（国家饮料及粮油制品质量监督检验中心）。本标准主要起草人：文红、朱宽正、张莉、王红、吕晓华、陈有武、范志勇、李涛。httn：//foodmate.net1范围
食品中禁用物质的检测
碱性橙染料
高效液相色谱法
本标准规定了食品中禁用物质——一碱性橙染料的检测方法。
本标准适用于食品中禁用物质
碱性橙染料的高效液相色谱法检测。本标准中碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22的检出限为0.01mg/kg。规范性引用文件
GB/T23496—2009
下列文件中的条款道还标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内或修订版是否可使用这些文件的最款版本。GB/T6682
3原理
鼓励根据本标准达成协议的各方研究均不道
用子本标准然面
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。升机实检室用水规格和实验方法（GB/T66822008.SO3696.1987,MOD
样品经无水提取、浓缩、定容液定容后用反相色谱样分离、紫外检测器进行色谱分析测定。S
试剂和溶液
5有试剂均为分析纯，实验用水符合除另有规定
晚线纯。
无水乙酸铵
无水硫酸钠
正已烷。
无水乙醇，
甲醇，色谱纯
乙腈，色谱纯
中一级水要求。
20mmol/L乙酸象称取1.54g乙酸铵溶于1000mL水中定容液：取65mL甲醇35mL20mmol/L乙酸铵溶液中，混匀。标准品：碱性橙2、碱性格碱性橙22，纯度≥95%。1.0mg/mL碱性橙染料标准储备溶液：分别称取100mg（精确至0.1mg）碱性橙2、碱性橙21、4.10
碱性橙22，置于100mL容量瓶中加无水甲醇溶解并定容至刻度混匀，该溶液在4℃条件下避光保存，有效期为1个月。
4.11碱性橙染料标准工作溶液（使用时配制）4.11.10.1mg/mL碱性橙染料标准溶液A：准确移取10mL碱性橙染料标准储备溶液（4.10）于100mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混匀。4.11.2分别移取碱性橙染料标准溶液A（4.11.1）1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL、20.00mL于100mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混匀。分别相当于1.00μg/ml、2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL20.00μg/mL浓度标准溶液。5仪器与设备
5.1高效液相色谱仪，附有紫外检测器。1
http：
GB/T23496-—2009
5.2天平：感量0.0001g和0.01g。5.3
超声波清洗仪。
旋转蒸发仪，
离心机：3000r/min。
氮吹仪。
旋涡振荡器。
电热板。
分析步骤
6.1样品处理
6.1.1固体样品（如辣椒粉豆制品等）将样品粉碎混勾.称取20g（准确至0.01g）样品，置于50mL离心管中，加5g无水硫酸钠，25mL无水乙醇超声提取30min，3000r/min，离心10min，将上层提取清液倾出置于离心管中，再次加入10mL无水乙醇，重复提取3次，合并提取液，3000r/min，离心10min，将上层提取清液倾倒于圆底烧瓶中，于40℃减压浓缩至近干，用无水乙醇溶解并转移到刻度试管中，在50℃条件下氮气吹干，用定容液溶解并定容至2mL；经0.45um滤膜过滤后待进样。6.1.2液体样品
将样品混勾，称取20g（准确至0.01g）样品，置于100mL烧杯中，电热板上加热挥发至近干，用无水乙醇溶解并转移到刻度试管中，在50℃条件下氮气吹干，用定容液溶解并定容至2mL：经0.45um滤膜过滤后待进样。
6.1.3含油样品
将样品混匀，称取20g（准确至0.01g）样品，置于50mL离心管中，加5g无水硫酸钠，25mL无水乙醇超声提取30min，30001/min，离心10min，将上层提取清液倾出置于离心管中，再次加入10mL无水乙醇，重复提取3次，合并提取液，3000r/min，离心10min，将上层提取清液倾倒于圆底烧瓶中，于40℃减压浓缩至近干，用15ImL乙晴溶解并转移到25mL刻度试管中，加人2mL正已烷，涡旋振荡萃取，弃去正已烷层，重复3次，将乙腈层倒人圆底烧瓶中，于50℃减压浓缩至近干，用无水乙醇溶解并转移到刻度试管中，在50℃条件下氮气吹于，用定容液溶解并定容至2mL。经0.45um滤膜过滤后待进样。
6.2高效液相色谱测定
6.2.1色谱条件
色谱柱：Ca（4.6mm×250mm，5m）（或相当型号色谱柱）；流动相：甲醇十20mmol/L乙酸铵=65+35；流速：1.0mL/min；免费标准bzxz.net
柱温：室温：
检测波长：碱性橙2，449nm；碱性橙21、碱性橙22，485nm；进样量：20μL
标准曲线绘制
用配制的碱性橙染料标准工作溶液（4.11.2)绘制以峰面积为纵坐标、工作溶液浓度为横坐标的标谁工作曲线。
6.2.3定量分析
待测样液中应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后在进样分析7结果计算
试样中每种碱性橙染料的含量按式(1)分别计算：2
http
式中：
X=cxVx1000
mx1000
试样中每种碱性橙染料的含量，单位为毫克每于克（mg/kg）；GB/T23496-2009
·（1)
由标准曲线查出的试样液中每种碱性橙染料的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；V-样品最终定容体积，单位为毫升（mL)；m试样的质量，单位为克(g)。
计算结果保留小数点后一位数字。精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。http://foodmate.netGB/T23496—2009
1—碱性橙21；
碱性橙2；
—磁性橙22。
1——碱性橙21；
一碱性橙2：
3—-碱性橙22。
附录A
（资料性附录）
碱性橙染料标准色谱图
碱性橙染料标准色谱图（波长：449nm）3
图A.2碱性橙标准色谱图（波长：485nm）GB/T23496-2009
http：//foodm
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书号：155066·1-37625
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