标准规定了工业循环冷却水中粘液形成菌的测定方法。适用于工业循环冷却水中悬浮的粘泥中的异养菌的测定，也适用于工业循环冷却水中沉积的粘泥中异养菌的测定。还适用于原水、生活用水及其它水中粘液异养菌的测定。 GB/T 14643.1-2009 工业循环冷却水中菌藻的测定方法 第1部分：粘液形成菌的测定 平皿计数法 GB/T14643.1-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

1CS 71. 040. 40
中华人民共和国国家标准
GB/T 14643.1--2009
代替GB/T 14643,1--1993
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第1部分：黏液形成菌的测定
平血计数法
Examination of bacteria and algae in industrial circulating cooling water-Part 1 : Examination of hacteria formed deposits-Standard of platc count
2009-05-18发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2010-02-01实施
GI3/T14643岁.1业循环冷却水中菌藻的测定方法》分为以下儿个部分：第1部分：黏液形成南的测定平阻计数法-第2部分：土壤菌群的测定半Ⅲ计数法一：第3部分：黏泥真菌的测定平Ⅲ计数法-第4部分：十壤真菌的测定平血计数法第5部分：硫酸盐还原菌的测定MPN法第6部分：铁细菌的测定MPN法
本部分为GB/T14643的第1部分。GB/T 14643. 1--2009
本部分代替GB/T14643.1—1993《.工业循环冷却水中粘液形成菌的測定平mL计数法》。本部分与GB/T14643.11993相比，在技术内容L并无变化，只是对文本结构和文字进行了修改。
本部分由中国石油和化学工业协会提出。本部分出全函化学标准化技术委员会水处理剂分会(SAC/TC63/SC5)归口。本部分负资起草单位：中海油天津化工研究设计院，上海未来企业有限公司。本部分主要起草人：朱传俊、刘昕、张全、向莹、李琳，本部分于1993年首次发布。
1范围
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第1部分：黏液形成菌的测定
平血计数法
GB/T 14643. 1-2009
GB/T[1643的本部分规定了工业循环冷却水中黏液形成菌的测定方法，不部分适用于工业循环冷却水中悬浮的黏泥中的异养荫的测定，也适用于工业循环冷却水中沉积的黏泥中异养菌的测定。还适用于原水、生活用水及其他水中黏液异养菌的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过（G13/T14643的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注口期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备（GI3/T603—2002，1SO6353-1：1982，NEQ)
GB/I6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—20081SO3696：1987,M()I)）3方法提要
本法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的黏泌，所得的黏泥用不英砂充分研磨使细胞分散，再利用平Ⅲ计数技术在（29土1)℃培养72H来测定黏泥中的异养菌总数。4试剂和材料
本部分所用试剂，除非另有规定，应使用分析纯试剂和符合（3/T6682三级水的规定。试验中所需制剂及制品，在没有注明其他要求时,均按GB/T603之规定制备。4.1牛肉膏：生化试剂。
4.2蛋白陈：生化试剂。
4.3氯化钠。
4.4琼脂：生物试剂。
4.5氟氧化钠溶液：40g/L。
4.6盐酸溶液:111。
4.7乙醇浴液：75%（体积分数），4.8牛皮纸。
4. 9医用脱脂棉
4.10医用脱脂纱布。
4.11有英砂210mm~150pm。
5仪器、设备
25号浮游生物网。
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量筒：25 ml.。
量筒：500mL
转子流量计。
5.5瓷研钵。
无菌箱（室)或超净1作台。
蒸汽压力灭菌器。
生化培养箱。
5.9电热干燥箱：温度可控制在60℃~280℃。5.10刻度吸管:1 mL，
5.11刻度吸管：5mL。
5.12磨口三角瓶：100mL.
5.13容量瓶：1000mL。
5. 14 培养皿:Φ90 mm.
5.15三角瓶：500mL。
5.16搬瓷量杯：1000mL，
6试验前的准备
6.1培养基的制备
你取下列试剂！
牛肉旁:3.0 g。
蛋陈：10.0g。
氟化钠：5.0g。
琼脂:15.0 g。
将上述试剂册水约950mL，在电炉上加热游解后，趋热用四层医用脱脂纱布过滤于糖瓷量杯中，并用热水补充至」(U0mL。用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节pH值至7.2士2.并分装在500mI.=角瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菊器（121±1)℃灭菌15min。
6.2无菌稀释水的制备
6.2.1生理盐水的配制：称取8.5g氯化钠溶解在1000mL水中，混匀。6.2.2将生理盐水分装在100ml磨口三角瓶中，每瓶45mL，每个三角瓶寒子和瓶口间插入小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力灭菌器（121士1）℃灭菌15min。6.3刻度吸管的灭菌
6.3.1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10mm～15m1，棉化不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6.3.2每支刻度吸管用1条约40mm～50tmm宽的牛皮纸条，以15左右角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，粗端用多余的纸条折登打结，不使散开，标上量度，若于支扎成束，置电热了燥箱中，于(160 1: 2)℃灭菊 2 h。
6.4培养血的灭菌
将洗净并烘F后的培养血10个左有叠在-起，用牛皮纸卷成一筒，置电热干燥箱中，于（160士2)℃灭菌2 h。
6.5石英砂灭菌
将洗净烘干后的石英砂装人口三角瓶中，按“无菌稀释水的制备”中三角瓶包孔及灭荫步骤进行包扎、炎菌。
7测定步骤
7.1样品的采集
7.1.1采集黏泥装置见图1。
转子流量计：
浮游生物网：
J11X-10截正；
X43W-10旋案阀：
盘筒。
图1采集黏泥装置图
GB/T 14643. 1—2009
调节采样装置中阀门，使冷却水的流速控制在0.8m/s左右，水流量在1m°/h左右，然后关上7.1.2
浮游生物网旋塞阀，让滤1m*水，7.1.3关闭水阀，取下浮游尘物网，打开旋塞阀，将黏泥收集在500ml.量筒内，用自来水冲洗滤网，洗涤液也收集在500ml.量倚内，证淀30min后倾出上层清液。将剩余独液转移至25mL量简内，静止30 min,记录沉淀出的黏泥体积。黏泥量用V表示,单位为亳升每立方米(mL/m2),按式(1)计算：Va
式中：
V，…量筒中黏泥体积的数值，单位为毫功（mL),
通过浮游生物网过滤的循环水量的体积的数值，单位为立方米（m）。.（1)
7.1.4用无菌吸管移去25ml.量筒内的上清液，将量简内的黏泥或部分黏泥转移至洗净并烘十后瓷研钵中，加入约2g灭过菌的石英砂，充分研磨后转移至1000mL洗净并烘干后的容量瓶中，用无菌稀释水稀释至刻度，充分混匀，并立即进行测定。7.2无菌箱(室)灭菌
把试验所用的无菌稀释水，无荫培养血、无菌吸管等用品效入无菌箱（室)内，打开紫外线灯灭菌30min。
7.3水样的稀释和接种
7.3.1黏泥水样放入灭过菌的无菌箱（）中，立即用75%乙醇溶液浸泡的医用脱脂棉球擦手，点燃无菌箱（）内的酒精灯。
以下对水样的稀释和接种的操作应在无菌箱(室)内的火焰区进行7.3.2选择适宜的稀释度，应使最后：：个稀释度接种后平血上4长的菌落数小了300个。在空H稀释3
GB/T14643.1—2009
水样瓶工标让稀释度数。
7.3.3用10倍稀释法稀释水样,即用5mlL无菌吸管吸取5mL水样注人到45mL空白稀释水充分播，此时稀释度为101，
7.3.4另取，支5mL无菌吸管吸取5mL稀释度为101水样注入到第二个稀释水中,充分摇勾，此时稀释度为10-\。依次类，直至需要的稀释度为止。7.3.5将不同稀释度的水样分别接种到无菌培养血中，每个稀释度重复接种3～5皿，肌接种1muL，接种时左手手撑托任培养血，大拇指和食指轻轻将培养Ⅲ盖提起，使右手中的吸管恰好插入，吸管与培养皿底成45°角相接，移开吸管时吸管不宜再碰到培养皿，接种时间不宜超过4。接一个稀释度更换-支无菌吸符。
7.3.6另取一组培养血不接水样，作为空白。7.3.7将灭过菌的培养基冷却至（45=1）℃，按7.3.5的方法掀开培养Ⅲ盖，将培养基灌人培养血内，每血应灌15mI.~-20ml.。灌血时不要使培养基直接灌在水样[摊Ⅲ后要将融化的培养基和血中水样彻底混合，小心勿使混合液溅到培养Ⅲ的边缘。测定一个水样从接种到滞Ⅲ不得超过20min。7、4培养
待培养脏中培养基(7.3.7)固化后，倒置半血，在牛化培养箱中(29土1)℃培养72h。8计数与报告
8.1培养之后，取出培养Ⅲ，若空白培养血山现菌落，表明测定过程中有污染，本次测定无效。8.2选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，立即进行计数，求得平均菌落数，并修约成二位有效数字(见表 1 示例1),
8.3若有二个稀释度，其生长菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小丁2.应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字（见表1示例2及示例3）。8.4若所有稀释度的平均菌落数均大于300.则应选摔稀释度最高的培养Ⅲ计数（见表1示例4），8.5范所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应选择稀释度最低的培养血计数（见表1示例5）。8.6若所有稀释度均无菌落牛长，则以“小于1乘以最低稀释倍数”报告之（见表1示例6）。8.7若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其1一部分大于300而另一部分小于30时，则选择最接近30或300的培养血计数（见表1示例7)。8.8黏液形成菌的数量用p表示，单位为个每毫升（个/ml.)，按式2)计算：X, X 1 000
FV,×1 000 000 =FV×i1000
武中：
X1—…按(8.2)计数得出的培养血上生长的平均菌落数，个；V——按（7.1.3)计算的黏泥量的数值，单位为毫升每立方来（mL/m）：V，\：按（7.1.4)测定时所取的黏泥体积的数值，单位为毫升（ml.）；按(7.1.4)测定时，所取黏泥体积(Vs)与黏泌总体积(Vz)之比值；F
计数纽的样品稀释度数。
稀释度及菌落数
两稀释度菌
落数之比
黏液形成菌
总数/个/ml.)
报皆方式
个/mL
>6 500
9精密度
稀释度及菌落数
估计3475
表1（续）wwW.bzxz.Net
两稀释度茵
落数之比
GB/T 14643.12009
黏液形成菊
总数/(个/mL)
313000
30 600
报告方式
个/mL
3. 1 ×105
2. 7×102
3. 1×10*
由于微生物能以单独个体，双双成对、链状、成簇或一团团等形存在，且没有单独一种培养基9.1
能满足一个水样中所有细菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落数间能要低丁其正常存在的括胞的数。
9,2标推平血计数的正确度随着平行样血的增加而增加，当使用个平行皿，每Ⅲ加 1 mL样品时测定结果的置信度为95%，
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