标准规定了工业循环冷却水中粘泥真菌的测定方法。适用于工业循环冷却水中粘泥真菌的测定，也适用于原水、生活用水及其它水中粘泥真菌的测定。 GB/T 14643.3-2009 工业循环冷却水中菌藻的测定方法 第3部分：粘泥真菌的测定 平皿计数法 GB/T14643.3-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

ICS 71. 040, 40
中华人民共和国国家标准
GB/T14643.3—2009
代替GB/T14643.31993
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第3部分：黏泥真菌的测定
平血计数法
Examination of bacteria and algae in industrial circulating cooling waler-Part 3 : Examination of slime formed fungi-Standard of platecount
2009-05-18发布
中华人民和国国家质量蓝督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2010-02-01实施
GB/T14G43《工业循环冷却水中菌藻的测定方法》分为以下几个部分：第1部分：黏液形成菌的测定平匪计数法第2部分：土壤菌群的测定
平瓜计数法
第3部分：黏泥真菌的测定
平阻计数法
一第4部分：七壤真菌的测定
平血计数法
一第5部分：硫酸盐还原菌的测定MPN法
第6部分：铁细菌的测定MPN法
本部分为GB/T14643的第3部分。GB/T14643.3—2009
本部分代替GB/T14643.3-1993《工业循环冷却水中黏泥真菌的测定平皿计数法》。本部分与GB/T14643.3一1993相比，在技术内睿上并无变化，八是对文本结构和文字进行了修改。本部分出中国石油和化学1业协会提出，本部分由全国化学标推化技术委员会水处理剂分会(SAC/TC63/SC5)归口。本部分负责起草单位：中海油天津化工研究设计院、L海末来企业有限公司。本部分主要起草人：邵宏谦、刘昕、张全、李琳、朱传俊。本部分于1993年首次发布。
1范围
工业循环冷却水中菌藻的测定方法第3部分：黏泥真菌的测定
平皿计数法
GB/T14643的本部分规定了工业循环冷却水中黏泥真菌的测定方法。GB/T 14643.3—2009
本部分适用于工业循环冷却水中黏泥真菌的测定，也适用于原水，生活州水及其他水中黏泥真菌的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过（B/T14643的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然面，鼓励根据本部分达成协议的各力研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注月期的用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/1'603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备（CB/T6032002，ISO6353-1:1982，NEQ)
GI/T6682分析实验牢用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，JS(）3696：1987，MOD）3方法提要
本方法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的黏泥，所得的黏泥用石英砂充分研磨使细胞分散，再利用平Ⅲ计数技术在（29土1）℃培养72h来测定黏泥中真菌总数。4试剂和材料
本部分所用试剂，除非另有定，应使用分析纯试剂和符合GB/T6682三级水的规定。试验中所需制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T603之规定制备。4.1马铃薯：市售新鲜（无芽），去皮后切成约20mm×20mm×20mm小块。4.2葡萄糖。
4.3琼脂;生物试剂。
4.4石英砂：210μm~150μm（70目~100日）。4.5氯化钠。
4.6乳酸。
4.7乙醇溶液：75%（体积分数）。4.8牛皮纸，
4.9医用脱脂棉。
4. 10 医用脱脂纱布。
仪器、设备
5.1菌箱(室)或超净工作台。
5.2蒸汽压力火菊器。
GB/T 14643.3--2009
生化培养籍。
鼓风电热干燥箱：温度可控制在60℃～280℃。5.4
铝锅：200mm。
5.625号浮游生物网。
转子流量计(0~2tn/h）。
5.8瓷研钵。
5.9糖瓷量杯：1000mL。
5.10磨口三角瓶：1000ml，
5. 11 培养.$90 mm。
5.12容量瓶：1000mL。免费标准下载网bzxz
5.13刻度吸管:1 ml.。
5.14刻度吸管:5 mL。
5,15 三角瓶:500 ml
5.16量筒:500 mL
5.17量简：25mL.
6试验前的准备
6.1培养基的制备
称取约200g的马铃薯于铝锅中，加水约1000L于电炉上加热，煮沸10min并不断搅拌，趁热用叫层医用脱脂纱布过滤于塘瓷量杯中，收集到约900mL滤液，滤液搅勾待用。于上述滤液中加入20.0g琼脂和20.0g葡萄糖，并放在电炉上加热，不断地搅拌，待琼脂完全游化后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤，待滤液不再滴出时，用水补充至1000 rml-,并用乳酸调节pII至4.010.1，并分装在500ml.角瓶中，每瓶分装量不超过其总量的三分之一,塞上棉塞再用牛皮纸把瓶口包好.用蒸汽压力灭菌器于（121-1)℃灭菌15min。6.2无菌稀释水的制备
6.2. 1生理盐水的配制:称取 8.5 g氯化钠,溶解在 1 000 mL水中,混勾。6.2.2将生理盐水分装在100ml.磨口三角瓶中，每瓶45mL，每个三角瓶塞了和瓶间插人一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力灭菌器丁（121上1)℃灭菌15min
6.3刻度吸管的灭菌
6.3.1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上次用脱脂棉，棉花量要适宜，长度人约10mm~15mm，棉花量不宜藓在口外，多余的棉花可以用灭焰烧掉。6.3.2每支刻度吸管用1条约 40 mm-~50 Im 宽的牛皮纸条,以 45\左右角度螺旋形卷起来,吸管的尖端在头部粗端将多余的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若干支扎成一束，置电热于燥箱叫十160 ℃±2℃灭菌2 h。
6. 4培养血的灭菌
将洗净并烘干后的培养耻10个左右登在一起，用牛皮纸卷成一筒，置电热干燥箱中于(160土2)℃灭菌2 h。
6.5石英砂的灭菌
将洗净并烘丁后的石英砂装入磨口三角瓶中，按“无菌稀释水的制备“中三角瓶包托及灭菌步骤进行包扎，灭菌。
7测定步骤
7.1样品的采集
7.1.1采集黏泥的装置见图1。
转于流蛋计；
2.-.浮游生物网
[11X-10截止阀：
-X13W-10旋塞密阀;
盛简。
图1采集黏泥装置图
GB/T 14643.3—2009
7. 1.2调节采样装置中的阀门,使玲却水的流速控制在 0. 8 m/s左右,水流量在 1 rm/h左右,然后关_I:浮游生物网的璇塞阀,过滤 1 m水。7.1.3关闭水阀，取下浮游4:物网，打开旋塞阀，将黏泥收集在一个500mL量筒内，沉淀30min后倾出上层消液。将剩余汕液转至25nL量简内，静置30min，记录沉淀出的黏泥休积。黏泥量以V计,单位为毫升每立方米(mL/m\),按式(1)计算：Va
式中：
量简中黏泥体积的数值，单位为毫升（m)；通过浮游生物网过滤的循环水量的体积的数值，单莅为立方求（I\）（1）
7.1.4用无菌吸管移去25mL量简内的上清液，将量简内的黏泥或部分黏泥转移至洗净并烘于后的瓷研钵中,加人约 2 g灭过菌的石英砂,充分研磨后转移至 1 000 mL. 洗净并烘干后的容量瓶中,用无菌稀释水稀释至刻度，充分混勾，并立即进行测定。7.2无蘭箱(宰)灭菌
把试验所用的无菌稀释水，无菌培养血、无菌吸管等匝品效人无菌箱(室)内，打开紫外线灯灭菌30 trin.
7.3水样的稀释和接种
7.3.1关掉紫外线灯，打开荧光灯，将黏泥水样放入无菌箱（室）中，立即用75%的乙醇溶液浸泡的医用脱脂棉球擦手，点燃无菌箱(室)内的酒精灯。以下对水样的稀释和接种的操作应在无菌箱（室)内的火焰区进行：7.3.2选择适宜的稀释度，应使最后一个稀释度接种后，培养Ⅲ中生长的菌路数小丁300个，在空白稀释水样瓶上标上稀释度数。
7.3.3用10倍稀释法稀释水样,即用5mI.无菌吸管吸取5mL水样注人到45mL空白稀释水中充分摇勾，此时稀释度为101。
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7.3.4另取-支5ml.先菌吸管吸取5mL10-1水样移人到第二个稀释水中，充分摇勾，此时稀释度为10”，依次类推，直至需要的稀释度为止7.3.5将不同稀释度的水样分别接种到无菌培养Ⅲ巾，每个稀释度重复接种3~5个血，每血接种1 mL，接种时左手掌托住培养Ⅲ,大拇指和食指轻轻将培养血提起，吸管与培养血底成15°角相接。移开吸管时吸管不宜再碰到培养皿，接种时间不宜超过4s。每接种一个稀释度更换支无菌吸管。7.3.6另取一组培养血不接水样，作为空白，同时操作。7.3.7将灭过菌的培养基冷却至(45十1)℃,按7.3.5的方法掀开培养Ⅲ盖，将培养基灌人培养匪内，每Ⅲ应灌 15 ml,~20 mL。灌血时不要使培养基自接灌在水样上,灌血后要将融化的培养基和血中水样彻底混合，小心勿使混合液避到培养Ⅲ的边缘。测定-个水样从接种到灌Ⅲ不得超过20min。7.4培养
待培养中培养基固化后，倒置平Ⅲ，在生化培养箱中丁(29士1)C培养72 h。8计数与报告
8.1培养之后,取出培养皿,若空向养雁内出现菌落表明测定过程中有污染,本次测定无效8.2选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，文即进行计数，求得平均菌游数，并修约成二位有效数字（见表1示例1）
8.3若有两个稀释度，其作长菌葬数均在 30～300之间,则视一者之比值来快定,荐其比值小于2,应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字（见表1示例2及示例3）8.4若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则选择稀释度最高的培养ⅢL计数(见表 1 示例4)。8.5若所有稀释度的平均菌游数均小于30.则应选择稀释度最低的培养血计数（见1示表例5)。8.6著所有稀释度均无菌落生长，则以“小于1乘以最低稀释倍数”报告之（见表1示例6），8.7若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，其中一帮分大丁300而另…部分小于30时，则选择最接近30或300的培养耻计数（见表1示例7）。8.8黏泥真菌的数量以e表示，单位为个每毫升（个/mI.），按式（2)计算：p
式中：
1000x，
1 000 000FV—FV,×1 000
按(8.2)计数得出的培养而上牛长的平均菌落数.个按（7.1.3)计算的黏泥量的数值，单位为毫每立力米（ml/m*)；V.
按(7.1.4)测定时所取的黏泥体积的数值，单位为毫升(L)；k
-按(7.1,1)测定时,所取黏泥体积(V3)与黏泥总休积(V,)之比(V，一·V,);一计数组的样品稀释度数。
稀释度及菌落数
两稀释度
菌落数之比
黏泥真菊总数
个/mL
313000
报告方式
个/mL
2. 7×10t
精密度
GB/T14643.3—2009
9.1由于微生物能以单独个体、双双成对、链状、成簇或一团团等形式存在，而且没有单独·种培养基满足一个水样中所有细菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落数可能要低于其正常存在的活细胞的数目。
标准平Ⅲ计数的正确度随着平行样的增加而增加，当使用5个平行血，每Ⅲ加1nL样品时测定结果的置信度为95%。
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