SN/T 2206.2-2009 化妆品微生物检验方法 第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽胞杆菌 SN/T2206.2-2009 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2206.2—2009
化妆品微生物检验方法
第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌Determination of microbiological incosmeticsPart 2:Aerobic spore-former bacteria and Bacillus cereus2009-02-20发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2009-09-01实施
SN/T2206《化妆品微生物检验方法》分为以下部分：第1部分：沙门氏菌；
第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌；第3部分：肺炎克雷伯氏菌；
第4部分：链球菌；
第5部分：肠球菌。
本部分为SN/T2206的第2部分。
本部分的附录A和附录B均为资料性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T 2206.2—2009
本部分起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国新疆出人境检验检疫局中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本部分主要起草人：杨捷琳、顾鸣、韩伟、黄玲、许龙岩。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准I
1范围
化妆品微生物检验方法
第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌SN/T2206.2—2009
SN/T2206的本部分规定了化妆品中尤其是水分含量较少的粉类化妆品中需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的检验方法。
本部分适用于化妆品中需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的检验：2规范性引用文件
下列文件中的条款通过SN/T2206的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T7918.1化妆品微生物标准检验方法总则SN/T0176出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法3材料和设备
3.1三角瓶：250mL。
3.2玻璃珠。
3.3L形玻璃棒。
3.4刻度吸管：1mL,10mL。
3.5均质器。
3.6恒温培养箱：36℃±1℃,30℃±1℃,32℃±2.5℃。3.7高压灭菌器
3.8振荡器。
4培养基和试剂
4.1D/E中和培养基（Dey/Engley中和培养基）,见附录A第A.1章。4.2甘露醇卵黄多粘菌素琼脂培养基（MYP）,见附录A第A.2章4.3葡萄糖蛋白陈琼脂（DT培养基.加中和剂），见附录A第A.3章。4.4，API检测试纸条或其他等效产品注：API测试条是由法国梅里埃公司提供的产品的商品名给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。5检验程序
5.1化妆品中需氧芽孢杆菌检验流程图见图1。1
SN/T 2206.2—2009
检验样品
收介适浓度样品战液，按1:10调入化的葡萄糖蛋门脉脂
检样101制虑1:1详品稀液
空自对照
期！人等林积融化的莅荐籍步凹陈琼游
将样品及对照减入沸水溶1b imn轻微搅择玲却不%-60℃
等呈领注。其乎板
例置+1 , 培养 5 d
菌率确证,计数及结果报背
图1化妆品中需氧芽孢杆菌检验流程图5.2化妆品中蜡样芽孢杆菌检验流程图见图2。检样10 g 制或 1:;10 群品稀释液0.m,除布
MYP半烫
带强口陈统胎平版
跳取可妮尚格，染色能检
证实实验
计数及站果报告
图2化妆品中蜡样芽孢杆菌检验流程图5.3样品制备
温度对照管
装有等体积热磷水及温度计的温度刘照管
样品参照GB/T7918.1供检样品的制备方法进行。样品制备时，也可参照附录A第A.1章的D/E中和培养基代替生理盐水或SCDLP培养基。参照附录B中列出的化妆品中常用防腐剂种类及微生物检验时所使用的中和剂种类和配方，可根据不同产品成分参照使用。5.4取1：10稀释液10.0mL加人到含有90.0mL生理盐水的稀释瓶中，置30℃±1℃水浴中15min，经常振摇，取出后静置15min，取上清液10.0mL制成1：100的稀释液，每个稀释度换用一支10.0mL无菌吸管，按上述操作程序递增十倍稀释至合适浓度5.5需氧芽孢菌计数
5.5.1移取合适浓度样品悬液10mL，搅拌加入融化的葡萄糖蛋白陈琼脂100mL，混合均匀，沸水浴15min，轻微搅拌冷却至50℃～60℃，再将混合物等量倾注5块平板，待凝固后表面覆盖一薄层2%灭菌琼脂（防止蔓延型菌落出现），待覆盖琼脂凝固后，倒置30℃士1℃，培养5d。2
SN/T2206.2—2009
5.5.2选取平板上10个以上菌落，进行革兰氏染色镜检，芽孢菌应为革兰氏阳性杆菌，有明显芽孢体存在，氧化酶、触酶实验，需氧芽孢菌多为阴性，进一步采用API等生化鉴定试剂条进行鉴定5.5.3计数：计数五个平板上的菌落数，相加，乘以稀释倍数，即为每克（毫升）[g（mL）化妆品中需氧芽孢总数
5.6蜡样芽孢杆菌计数
5.6.1取各稀释液0.1mL分别接种到MYP琼脂平板和葡萄糖蛋白陈琼脂平板，用无菌L形玻璃棒均匀涂布于整个琼脂表面，每个稀释度各接种两块平板。5.6.2平板置于30℃土1℃培养24h士2h。5.6.3蜡样芽孢杆菌在MYP琼脂平板上生成的菌落为微粉红色，环绕产生卵磷脂酶沉淀环，如反应不典型，可继续培养24h再计数
5.7革兰氏染色：挑取上述可疑菌落，染色镜检，蜡样芽孢杆菌为革兰氏阳性大杆菌，呈长链或短链，芽孢呈椭圆形位于菌体中央或偏端，不使菌体胀大。5.8镜检后，挑取可疑菌落分别接种营养琼脂斜面，于30℃培养24h，按照SN/T0176进行证实实验。5.9计数及报告：选取具有15个～150个已确证为蜡样芽孢杆菌菌落的平板进行计数，并计算同一稀释度两个平板的平均菌落数，结果报告。6中和剂验证
6.1微生物菌株
采用蜡样芽孢杆菌（ATCC11778)或其他等同性菌株。6.2验证实验
6.2.1接种物的制备，在测试前，用蜡样芽孢杆菌（ATCC11778)接种葡萄糖琼脂（DT)培养基，32.5℃土2.5℃培养18h～24h。收集培养物，调整悬液浓度为10°CFU/mL注：在2h内使用制备的悬液和稀释液。6.2.2梯度稀释菌悬液，以获得100CFU/mL与500CFU/mL之间的浓度。为了计数调整的菌悬液中的活菌数量.移取1mL悬液放入平Ⅲ内，混皿法倾注平板，倒置32.5℃土2.5℃培养20h～24h计数。6.2.3取样品1g或1mL，按照GB/T7918.1供检样品的方法1：10制备样液，无菌方式加人0.1ml调整好浓度的菌悬液；未添加细菌的样品作为对照6.2.4划线分离于添加中和剂（DT+）和未添加中利剂（DT一）的平板，32.5℃士2.5℃培养20h～24h。6.3验证结果的解释
如果DT（十）平板上有标准菌株生长，在DT（一）平板上不生长，中和剂的中和效果得以验证。当DT（十）和DT（一）上均有细菌生长，如果DT（十）生长菌株为添加的标准菌株时，中和剂的中和效果得以验证。在DT（十）和DT（一）无细菌生长或仅DT（一）有杂菌生长均表明抗菌活性仍然存在，应改变样品与培养基稀释比例，或改变中和剂配方，进一步选择合适的中和剂配方，验证中和效果3
SN/T 2206.2—2009
附录A
（资料性附录）
培养基
A：1D/E中和培养基（Dey/Engley中和培养基）A.1.1成分
葡萄糖
大豆磷脂
五水硫代硫酸钠
聚山梨醇酯80
胰化酪蛋白
亚硫酸氢钠
酵母膏
β-基乙醇
溴甲酚紫
蒸馏水
pH7.3±0.1
A.1.2制法
1000mL
将各组分依次称取加入，加热后使之完全溶解，121℃灭菌15min，使用时，调节pH值至7.6士0.2。A.2
甘露醇卵黄多粘菌素琼脂培养基（MYP）A.2.1成分
A成分
牛肉膏
蛋白陈
D-甘露醇
氯化钠
蒸馏水
pH7.2±0.1
B成分：50%卵黄液
C成分：多粘菌素B
A.2.2制法
1000mL免费标准下载网bzxz
100IU/mL
将A成分中各组分依次称取加入，加热后使之完全溶解，校正pH至pH7.2士0.1.加人酚红溶液，混匀后分装烧瓶，121℃灭菌15min，冷却至50℃后每升加人50mL50%卵黄液（B成分）和2.5mL多粘菌素B(C成分)。
A.3葡萄糖蛋白陈琼脂（DT培养基，加中和剂）A.3.1成分
酪蛋白陈
葡萄糖
2%溴甲酚紫乙醇溶液
卵磷脂
吐温-80
蒸馏水
pH6.7±0.2
A.3.2覆盖琼脂
蒸馏水
A.3.3制法
1000ml
1000mL
SN/T 2206.2—2009
将各组分依次称取加入，加热后使之完全溶解，121℃灭菌15min，使用时，调节pH值至6.7士0.25
SN/T2206.2—2009
防腐剂
酚类化合物
对羟基苯甲酸酯，
苯基乙醇，苯胺
季胺类化合物，阳
离子表面活性剂
氧化物
异噻唑啉酮，咪唑
金属盐类（Cu，Zn，
Hg).有机汞类
附录B
（资料性附录）
防腐剂对应使用中和剂清单
中和剂
防腐剂对应使用中和剂清单
中和剂及漂洗液配方（膜过滤法）聚山梨醇酯80.30g/L+卵磷脂，3g/L卵磷脂，聚山梨醇酯80，
脂肪酸环氧乙烷聚合物.非
离子型表面活性剂
卵磷脂卵磷脂，皂角苷·聚
山梨醇酯80.十二烷基硫酸
钠，脂肪酸环氧乙烷聚合物
甘氨酸，组氨酸
硫代硫酸钠
卵磷脂，皂角苷，胺，硫醇，
亚硫酸氢钠β-硫基乙醇
卵磷脂，皂角苷，聚山梨醇
重硫酸钠,L-巯基半胱氨
酸β-巯基乙醇
脂肪酸环氧乙烷聚合物.7g/L+卵磷脂，20g/L+聚山梨醇酯80.4g/L。
D/E中和培养基a
漂洗液：蒸馏水；蛋白陈，1g/L十氯化钠，9g/L；聚山梨醇酯80.5g/L
聚山梨醇酯80，30g/L十十二烷基硫酸钠，4g/L十卵磷脂.3g/L
聚山梨醇酯80.30g/L+皂角苷，30g/L+卵磷脂.3g/L。D/E中和培养基a
漂洗液：蒸馏水：蛋白陈，1g/L十氯化钠.9g/L：聚山梨醇酯80.5g/L.
卵磷脂.3g/L+聚山梨醇酯80.30g/L+L-组氨酸1g/L。聚山梨醇酯80,30g/L+皂角苷，30g/L+L-组氨酸，1g/L+L-半胱氨酸.1g/L。
D/E中和培养基a
漂洗液：聚山梨醇酯80.3g/L+L-组氨酸，0.5g/L。硫代硫酸钠，5g/L。
漂洗液：硫代硫酸钠，3g/L
聚山梨醇酯80.30g/L十皂角苷，30g/L十卵磷脂.3g/L。漂洗液：蛋白陈，1g/L+氯化钠.9g/L，聚山裂醇酯80,5g/L。聚山梨醇酯80.30g/L十皂角苔，30g/L+卵磷脂，3g/L.漂洗液：蛋白陈1g/L十氯化钠，9g/L；聚山梨醇酯80，5g/L3-硫基乙醇，0.5g/L或5g/L。
L-半胱氨酸.0.8g/L或1.5g/L
D/E中和培养基a
漂洗液：β-巯基乙醇，0.5g/L。SN/T 2206. 2-2009
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
化妆品微生物检验方法
第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌SN/T2206.2—2009
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社案皇岛印刷厂印刷*
开本880×1230
2009年5月第一版
印张0.75
字数12千字
2009年5月第一次印刷
印数1-2.000
书号：155066·2-19647
定价16.00元
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。