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SN/T 2357-2009

基本信息

标准号: SN/T 2357-2009

中文名称:可疑样品中烟曲霉毒素现场排查检测方法

标准类别:商检行业标准(SN)

标准状态:现行

发布日期:2009-07-07

出版语种:简体中文

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相关标签: 样品 曲霉 毒素 现场 排查 检测 方法

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发布部门:国家质量监督检验检疫总局

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标准内容

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 23572009
可疑样品中烟曲霉毒素
现场排查检测方法
Spot investigation and examinalion methods forfumonisins in suspicious samples2009-07-07发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2010-01-16实施
本标雅的附录A为规范件翁录,录为资料性翁录!本标雅山冉家认认目随祭管理委员会淀并归口本标滩由中华人民!利国古林出人境检骑检疫局负责越节SV/T2357—2009
本标准主安起学人:杨怀宁、浦均、赵人力、谢兵、理秀古、冯华、柴景谷、十旁,邹红、十娣,一振国。建平
本标淮为百次发布的出人境检验憶疫行业标准http://www,foodmatee.net
1范围
可疑样品中烟曲霉毒素
现场排查检测方法
SV/T 2357—2009
本标淮规定了回境口岸可斑样品中焖曲得寺索勇场排查检测方法、结果报苔、引性结景处五,本标淮适用十国境口严可疑样品中州山每毒索的现场拆侨检测2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的叫用而成为本标准的条款:凡足注期的用文件,共随后所有的修收单(不包助误的内穿)或修订版均和适丁不标准·然而,技励根据本标准达成办设的各方研究是否叫使用这些义件的最新版本。从足不汁H期的引用文件,上最新版本适用丁不你推,G3G01化学式剂标准滴定溶液的制备G1319189实验室生物安全通用要求SN/T186120C7山入境口岸突发公儿卫十子件应急处理规程总则3术语和定义
下列术谱和定义适用本标准。
烟曲霉毒素fumonisins,s
称伏青素·是口轮枝嫌菌与巾院嫌他菌产生的一美水溶性代谢物,热稳是性亮:蒸点不易被被坏,几前山知11种牛物,其中要的刺山每毒索共毒性最迹。常见州山毒索还包括[32和13.:该类毒素对大鼠、小鼠、像优、猪、羊等十枢经系统有较强毒性,川引起动物的强烈泽掌巧至死,此种毒索也对人类健康均戚减胁,与致癌性,若感染叫诱发食道痴肝遍遍等疾病,烟廿每毒索泛分右在十壤中,尤以科山十样中检出率高·因此极有可继污染粮食和饲料,对人畜的健造成潜在威册。
suspicious samples
可疑样品
从发现叫显的被污染状说、极易发现不鉴别出污染物可能发魂不鉴斯出污染物的整批货物中所采集的样品,
4对象
化含间能被烟曲得毒素污染的下列物的的人山说货物或人员携带物:同疑粉(检测限量标准参“供人类食用的下来及下米产\);供人类食用的玉米及玉米产品:一玉米原料:
长米饲料。
5可疑样品处理
5.1用于ELISA检测的可无样品处理粉碎5息可疑样品与5ml.7巾溶液混介:振荡3 mir:
雪品伙伴欧ht
SN/T 2357—2009
用wlamenN或当的滤很过惑:
一1偿滤滴用13偿双蒸水惑离了水烯择收50叫1。稀释铱逊行分析
注:根需要口以增伴品,币济液的量也成成(SAG·签测次取端品01币5.2用于单克隆免疫亲和柱-高效液相色谱法检测的可疑样品处理裤25.0可疑样品于均质杯中:
加人g氯化谢和59 ml的巾晾水(容量比:1,盖上动质盖子:高速均质2min.l rnin
一将抚取液用搏纹滤纸过滤:用1C0ml.的烧杯收集滤液取10 ml.滤波」烧巾,圳人40mL.的 PI3S缓冲率液泥匀:一经玻璃纤维滤纸过滤.用50mL的烧杯收集滤液·待用,6准备
检验设备,器材及试剂的准备见附录A。7检验方法
7.1酶联免疫吸附法(enzyme-linkelimunuusorbentassay.ELIS4)检测7.1.1检测注意事项
一以供人类食用的玉米及玉米产品中制由需丧索的检视为例,儿他检测对象可依比还行检测:获尚品化试剂盒的说可作作下面以RIASRFEN烟曲毒素签测试剂盒为例:用之前将所有试剂回升率流:
使用之后立即将所有试剂放-℃~8℃:在使用巾不安让微孔十操;
在EISA分所中的可现性,很人猛度上取决丁洗极的一效性,纤按照推荐的洗极序操作是HL.ISA测定程子中的安点:
一在所右恒温孵育过程,避免光线照射,用盖了盖微孔被7.1.2包被有抗体的微孔板条
锡箔煲沿横向川皱外边打升取出需用数量的微孔板及框架将不用的微孔板放进原锡箔袋巾并耳与提供的下燥剂一起平等密割保存于2-8不要冷冻。7.1.3标准液
根拆签测象和限量标准的不同:配制不同浓度范同的烟曲霉毒素标准液·并制定相应的标准曲线,此it剂盒山霉毒索标准液为直接施用液.标准液浓度为:U1g/kg.0.222im/kg.C.666ing/kg2mg/k,s mg/k,已丝考患了栏品制备的70倍释释,国北样品中的烟曲需毒素的浓度以卢接从标淮西读出
7.1.4测定程序
在1S~24C条件下操作:
权据样品量将足够数量的孔条懂人微孔架,记录品及标准位否;加人501的你雅处理好的样品到的微孔中,舞个标雅和拦品应用的吸头;加人5酶标记物到微孔底部;
1)差月农业邢夺物检验、装以及库孕管理向,2、该试剂盒是出德国R-Riorhe制光的产品鹿品名·已经终过美国UsPSA认注,是后合主伴产的实例,给山这一白是为了态本杀准的伸用者,并不示研这一产品的认川雪品伙伴欧ht
SN/T 2357—2009
加人μ抗体溶液到何·个微孔底部,充分混,在室温自 inmn;一倒出孔的液体,将微孔架到在吸水纸拍打以保证完个除孔的液体,用流瓶或多适道移液器将250蒸娴水加人孔中·可次们山孔中的液体·完全除云孔中的液体,可车复拱作洗蔡云骤两次以「3
加入2滴(或lcuμl)基质/发色试剂例微孔中:充分混合并在室温语处孵育5min工1min灿人2滴(IC)反应停止没到微孔中混合贮;在45处测量吸光度伴以空气为实凹,成在加人终液片0nm内读取光度值,7.1.5判读结果
依据下列方汰判读结果:
a)定量分析
所获得的标准品和样品吸光度值除以第一个标准(0标准)的吸光度值下菜以109见式1)。0标淮等于100%最人吸光度值,并川以而分比举出吸光度值。A-EC>130
A——吸光度值,次;
标准品的吸光度值:
样出的吸光度值;
标准的吸光度位
计算的标准值绘感为一个对应烟曲需肯素浓度(1/k)的半对效坐标系统曲线图:相对应每一个可样比的浓度(gkg)间以以标准线「读,仪器兰定量测
送择个适当的标准液与样品同运行,根据详品与标准吸光度值的高低比较,划断样品浓度佰足小于(吸光度高)还足大丁(吸光度低)标雅。c)测兰定量测定
选择一个延当的标准被与样品问运行,根据痒品与标准颜色深浅比较,判脚样品度值点小丁(颜包深)还是人于(颜色裁)标准值,特别注意如果选泽(.222mg/kg或0.666mg/kg的你准.7.1.4作第6步室湿赔处孵育!:min史收为2min~min7. 1. 6灵敏度
定量测下限为6.222mg/kg
7.2单克隆免疫亲和柱-高效液相色语法测定玉米中烟曲霉毒素B1.1327.2.1溶液配制
按照B G0I热行。
制山霉索称准诺谷液:淮确称取焖山霉毒索 B、:各1.,用容量比为1:1的中醉水济件并定容全10m1.的容早来中,此付巡曲等素3、132的质品涨度均为10/m1.;混个标淮诺备液,取标准裙备液3,B以容量比为1:1的比例混合,得泥介标淮诺备被,此时州山毒毒索约辰量浓均为/,
混个标滩1作铱:坡延量混个标准谐备液下10 ml.容早瓶中.用容虽比为1:1的H醇水定容.等烟葬毒索B:B.的质量瘀度分别为0.2、1..E.0.25.0,52.g/mL的混合标准T牛液;
P13S缓冲溶液:浒价称取磷酸氢钠1,2 g-磷酸氢钟0.2;氯化纳8g-氯化钾C.2 溶」090 m水用腹调节为7.,用水定:一祈牛剂:准确称最10 I1邻茎二中,溶于1 mL 中醉[,用0. 05 1o1/ 的四训骏纳溶液定深雪品伙伴欧ht
SN/T 7357—2009
至50m,加入25的统本乙转深均,在~1下保存月备用。7.2.2色谱条件
主要包括以下条件:
色带杆:Sphcrisrh(社或和当,25cm/1.$mm,粒度10r;注温:室温:
流动村:.05mol/L中醇-磷酸二氢钠(中醇,磷酸二氢钠的容量比为81:20)-pH为3.3;流速:0.xml./mir.:
一汇样量:20:
荧光检浏器波长:Fx33.rm.Fm+40nm。7.2.3测定方法
连接好玻璃汁射器和FuIrniTes:亲和柱,最10 I滤液于玻璃注射器针简接「泵流控制考,棕制压方使样液以mimm的流速个部通过FtnoriTes亲和i,直空气进人亲和:从玻璃注射突上收下亲和社,将亲和杜上部用以S缓冲液汁泄:把准和托连接到破璃注射获上,用1m的Pls缓汁液以6ml/min内流验淋洗亲和杆,直至圣气法人新和柱中:齐去全部流山液:用1cml.内PES级冲液重复淋沈亲和柱,次·准矿加人1.mL中萨以3imL,imir的流速洗悦,收掌个部洗脱液于玻璃管巾,用氮气吹十,如人20μ的中醇-小(1:1)溶辫瑕50μ,上状样液·加人150μ牛液,,在min内进卒0「行IIC分逝,根据峰保密时间是性,根据峰间识外标法是员8生物安全措施
州山每毒索实验室牛物安个见(:13189对牛物安个二叛(ESL2)实验室的牛物安个要求你准液含有炳山每毒索,应特别小心:惊用过的玻璃穿窈及烟曲写声素溶液应用pH=7的高氯羧溶液(0体积分数)浸泡过校:反应整止液为1 mol/.硫较.避免接触皮张,9检测结果报告
9.1限量标准
相关限量标准参见阴录阝:
根据不同捡测对象参烈相关限量标推,别定临界位、判定结果。9.?FT.ISA检测报告
9.2.1检测结某低十临界信,判定为阴性,报告\烟山霉毒索陈性”,并注明检测法9.2.2检测结呆高十临界信,判定为阳性,报告州山霉毒索阳性”并注明检测左法,9.3单克隆免疫亲和柱-高效液相色谱法检测报告9.3.1检测结忌侯下临他,判定为阴性,报光“未检山烟曲写南素\并汗明检测方法。9.3.2检测结某高于临界.判定为阳性,报\检出烟力薪毒索”,并注月检测方法10
阳性结果的处胃
对相应标本应送有资质实验室(或指定的实验室)做复检或整定11个人防护
按照SN/=1861-200%录A快行。
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A. 1 常用设备、器材
低温冰箱:
孔极标:
振落器:
粉机:
洗板机;
泻施泥包器:
高效液相色谱仪;
蒙光检测器:
数据处理机:
泵流控市台:
Eppendorf管;
附录A
(规范性附录)
烟曲霉毒素检验常用器材及试剂微量加栏及望料吸头
250mL量简;
30mL溺斗及容量瓶:
试管;
Whztmen No.1或相当的滤纸:
独纹滤纸:
玻璃纤维湛绷,
4. 2 ELIS1 检验材料,试剂
微孔披,包被兔单体微;
标准品,为炳山霉毒索标淮溶液;烟卅需素抗体济液.兔单克隆;
樽标记的咽卅素:
基质/发色剂:
反虚终山液1 mc/L硫酸;
蒸馏或去离了水,
43单克降免疫亲和柱-高效相色谱法检测材料,试剂Frmori Tesl免疫亲和性,
槽纹滤纸:
H醇,台塔纯:
磷酸二氢钠·分所纯:
氯化,分所纯;
氯化钾.分析纯;
http
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SN/T2357-2009
四柳钠分析纯;
一巯基乙游、分析纯;
邻米甲醛,分折纯:
烟书霖素标维储各液:
混合标准储备液;
混合标准工作液:bzxz.net
-TT3S缓冲溶波:
一衍生剂。
http://foodmate.net主
附录B
(资料性附录)
1:1)A 对烟曲霉毒素推荐限量标准(2000 年 6 月)表.1
供人类食用的三米主米产品
华和免
猪鲶价
一米长产品H于
下列效彻抗料
以一卡作为计并基准,
产、的技当动澳、家禽、
不十?力用十者产的反动物、
丁制作裘皮的
而丁宰的家禽
其他各牡1笼物
http://foodmate.netSV/T 2357—2009
淮学限母标汇
B/1/in/se)
原不过的20
200个超过食的 20只
个过的
0个超过食的2
不超过食年的
10不超寸食量的20%
SN/T 2357-2009
中华人尺六和国山人境检验检胺行业标准
可疑样品中烟曲霉毒素
现场排查检测方法
SN/T 2357
中国标社山版社亡版
北京门外河北街16号
邮疫编码:10325
网江wwwsc.el.cn
电话:5852394588517515
中国标准出版社英阜岛E.刷厂印别并至 N0×1230 1/16
2c09 三11J第
激 13 二了
2C09三11小第次E.刷
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5号 135066 - 2-16925
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