SN/T 2497.13-2010
基本信息
标准号： SN/T 2497.13-2010
中文名称：进出口危险化学品安全试验方法 第13部分：荧光原位杂交试验
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
发布日期：2010-03-02
实施日期：2010-09-16
出版语种：简体中文
下载格式：.rar .pdf
下载大小：1275009
相关标签： 进出口 危险 化学品 安全 试验 方法 荧光 原位杂交
标准分类号
关联标准
出版信息
出版社：中国标准出版社
标准价格：0.0 元
出版日期：2010-09-16
相关单位信息
发布部门：国家质量监督检验检疫总局
标准简介
SN/T 2497.13-2010 进出口危险化学品安全试验方法 第13部分：荧光原位杂交试验 SN/T2497.13-2010 标准下载解压密码：www.bzxz.net
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2497.13—2010
进出口危险化学品安全试验方法第13部分：荧光原位杂交试验
Test method of import and export dangerous chemicals-Part13:Florescencein-situ hybridization2010-03-02发布
中华人民共和国
数码防伤
国家质量监督检验检疫总局wwW.bzxz.Net
2010-09-16实施
SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验；第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型泽繁殖试验；
第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：率丸细胞UDS试验；
第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；
第8部分：翻窝淋巴结试验；
第9部分：血清溶血素测定试验；第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；-第11部分：种系突变试验；
第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验第13部分：荧光原位杂交试验；一第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；
第16部分：Western-Blot实验；第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；第19部分：NorthernBlot实验；-第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分：DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法：第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T2497系列标准的第13部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2497.13—2010
本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。
本部分主要起草人：张园、王利兵、王华、赵琢、韩伟、熊中强。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。1范围
进出口危险化学品安全试验方法第13部分：荧光原位杂交试验
SN/T2497.13—2010
SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品荧光原位杂交试验的主要试剂和材料、主要仪器、试验步骤、试验结果和试验报告。本部分适用于进出口危险化学品荧光原位杂交试验。2术语、定义和缩略语
2.1术语和定义
下列术语和定义适用于本部分。2.1.1
核酸探针nucleicacidprobe
能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交，杂交后又能被特殊方法检测的已知被标记的核苷酸链。2.2缩略语
下列缩略语适用于本部分。
DAPI4'6-diamidino-2-phenylindole4,6-联咪-2-苯基吲哚2.2.2
磷酸盐缓冲液
PIPropidiumIodine碘化丙啶
3原理
荧光原位杂交技术（FlorescenceIn-SituHybridization，简称FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常组织样本进行检测。4主要试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为灭菌蒸馏水或超纯水。4.1PBS：在800mL蒸馏水中溶解8gNaCl,0.2gKCl,1.44gNaHPO.和0.24gKHPO.，用HCI调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1L，在1.034×105Pa（151bf/in）高压下灭菌20min，保存于室温。
4.220×SSC：在800mL水中溶解175.3gNaCl和88.2g柠檬酸钠，加人数滴10mol/LNaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。4.32×SSC，由20X×SSC溶液稀释而成。4.4变性液：4mL20×SSC;8mL蒸馏水；28mL甲酰胺。每次新鲜配制。杂交液：5XSSC,50%甲酰胺（5XDenharts，100μL待检DNA，10%硫酸葡聚糖）。4.5
SN/T2497.13—2010
4.6杂交后洗涤液：20×SSC4mL，蒸馏水16mL，甲酰胺20mL。每次新鲜配制。4.7梯度乙醇。
4.81XPBD：4XSSC/0.05%Tween溶液。4.9PI或DAPI。
主要仪器
5.1恒温箱。
5.2荧光显微镜。
6试验方法
6.1用RNase处理标本片
将铺有染色体或细胞的玻片放人含有：100μg/μLRNase的溶波中60℃（70C）-→2×SSC室温洗4次，2min/次→+70%乙醇→80%乙醇-95%乙醇在-20℃中进行脱水2min/次-+室温干燥。6.2变性
70℃变性液中孵育2min，然后立即移入顽冷的70%乙醇中作用2min，再依次移人80%、90%和100%的一20℃预冷乙醇内，每次2min垒温干燥。6.3杂交
6.3.1将玻片放在小盒（平血)内底层与少许水，保持玻片有一定湿度，37℃，30min。6.3.2探针变性：取1.5mL生物标记DNA探针（10μg/μL)加人到30μL杂交液中，混匀后放人70℃水浴变性5min后迅速放人冰冷却后加到玻片上（每张玻片_30.L)用盖玻片盖好，置37℃，4h～6h。
6.3.3去掉盖坡片，浸入洗涤液中，43~C洗20mi中。
6.4杂交信号显示
、然后用2XSS6
37℃洗2次，再浸人1×PBD溶液
6.4.1将玻片从1×PBD溶液中取出；平放在玻片架上，加60L封闭液1，用石蜡膜盖好，室温下作用5min。
6.4.2去掉石蜡膜，加60μL荧光标记Avidih(抗生物素蛋白)37，20min。
6.4.3在1×PBD溶液中洗片次；每次2min。6.4.4杂交信号放大，在玻片上咖60uL封闭液2，室温下作用5/min，加抗Avidin的抗体37℃，20min。
6.4.5用1×PBD洗3次，再次2min（室温）加终止液1.6.μL室温5min加荧光标记Avidin，37℃，20min，用1×PBD洗3次。
6.4.6染色体显色，在玻片上加10ul.PI或DAPI等荧光染料，再加抗荧光淬灭剂封片液室温反应5min，加盖玻片在荧光显微镜下观察。7
试验结果
可采取镜下计数细胞、照相的方法，或可采用专业荧光原位杂交分析系统进行结果分析。SN/T2497.13-2010
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
进出口危险化学品安全试验方法第13部分：荧光原位杂交试验
SN/T2497.13—2010
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址www.spe.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刹厂印刷+
开本880×12301/16印张0.5字数6千字2010年6月第一次印刷
2010年6月第一版
印数1—1600
书号：155066·2-20946
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进出口危险化学品安全试验方法第13部分：荧光原位杂交试验
Test method of import and export dangerous chemicals-Part13:Florescencein-situ hybridization2010-03-02发布
中华人民共和国
数码防伤
国家质量监督检验检疫总局wwW.bzxz.Net
2010-09-16实施
SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验；第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型泽繁殖试验；
第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：率丸细胞UDS试验；
第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；
第8部分：翻窝淋巴结试验；
第9部分：血清溶血素测定试验；第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；-第11部分：种系突变试验；
第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验第13部分：荧光原位杂交试验；一第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；
第16部分：Western-Blot实验；第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；第19部分：NorthernBlot实验；-第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分：DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法：第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T2497系列标准的第13部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2497.13—2010
本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。
本部分主要起草人：张园、王利兵、王华、赵琢、韩伟、熊中强。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。1范围
进出口危险化学品安全试验方法第13部分：荧光原位杂交试验
SN/T2497.13—2010
SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品荧光原位杂交试验的主要试剂和材料、主要仪器、试验步骤、试验结果和试验报告。本部分适用于进出口危险化学品荧光原位杂交试验。2术语、定义和缩略语
2.1术语和定义
下列术语和定义适用于本部分。2.1.1
核酸探针nucleicacidprobe
能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交，杂交后又能被特殊方法检测的已知被标记的核苷酸链。2.2缩略语
下列缩略语适用于本部分。
DAPI4'6-diamidino-2-phenylindole4,6-联咪-2-苯基吲哚2.2.2
磷酸盐缓冲液
PIPropidiumIodine碘化丙啶
3原理
荧光原位杂交技术（FlorescenceIn-SituHybridization，简称FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常组织样本进行检测。4主要试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为灭菌蒸馏水或超纯水。4.1PBS：在800mL蒸馏水中溶解8gNaCl,0.2gKCl,1.44gNaHPO.和0.24gKHPO.，用HCI调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1L，在1.034×105Pa（151bf/in）高压下灭菌20min，保存于室温。
4.220×SSC：在800mL水中溶解175.3gNaCl和88.2g柠檬酸钠，加人数滴10mol/LNaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。4.32×SSC，由20X×SSC溶液稀释而成。4.4变性液：4mL20×SSC;8mL蒸馏水；28mL甲酰胺。每次新鲜配制。杂交液：5XSSC,50%甲酰胺（5XDenharts，100μL待检DNA，10%硫酸葡聚糖）。4.5
SN/T2497.13—2010
4.6杂交后洗涤液：20×SSC4mL，蒸馏水16mL，甲酰胺20mL。每次新鲜配制。4.7梯度乙醇。
4.81XPBD：4XSSC/0.05%Tween溶液。4.9PI或DAPI。
主要仪器
5.1恒温箱。
5.2荧光显微镜。
6试验方法
6.1用RNase处理标本片
将铺有染色体或细胞的玻片放人含有：100μg/μLRNase的溶波中60℃（70C）-→2×SSC室温洗4次，2min/次→+70%乙醇→80%乙醇-95%乙醇在-20℃中进行脱水2min/次-+室温干燥。6.2变性
70℃变性液中孵育2min，然后立即移入顽冷的70%乙醇中作用2min，再依次移人80%、90%和100%的一20℃预冷乙醇内，每次2min垒温干燥。6.3杂交
6.3.1将玻片放在小盒（平血)内底层与少许水，保持玻片有一定湿度，37℃，30min。6.3.2探针变性：取1.5mL生物标记DNA探针（10μg/μL)加人到30μL杂交液中，混匀后放人70℃水浴变性5min后迅速放人冰冷却后加到玻片上（每张玻片_30.L)用盖玻片盖好，置37℃，4h～6h。
6.3.3去掉盖坡片，浸入洗涤液中，43~C洗20mi中。
6.4杂交信号显示
、然后用2XSS6
37℃洗2次，再浸人1×PBD溶液
6.4.1将玻片从1×PBD溶液中取出；平放在玻片架上，加60L封闭液1，用石蜡膜盖好，室温下作用5min。
6.4.2去掉石蜡膜，加60μL荧光标记Avidih(抗生物素蛋白)37，20min。
6.4.3在1×PBD溶液中洗片次；每次2min。6.4.4杂交信号放大，在玻片上咖60uL封闭液2，室温下作用5/min，加抗Avidin的抗体37℃，20min。
6.4.5用1×PBD洗3次，再次2min（室温）加终止液1.6.μL室温5min加荧光标记Avidin，37℃，20min，用1×PBD洗3次。
6.4.6染色体显色，在玻片上加10ul.PI或DAPI等荧光染料，再加抗荧光淬灭剂封片液室温反应5min，加盖玻片在荧光显微镜下观察。7
试验结果
可采取镜下计数细胞、照相的方法，或可采用专业荧光原位杂交分析系统进行结果分析。SN/T2497.13-2010
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
进出口危险化学品安全试验方法第13部分：荧光原位杂交试验
SN/T2497.13—2010
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址www.spe.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刹厂印刷+
开本880×12301/16印张0.5字数6千字2010年6月第一次印刷
2010年6月第一版
印数1—1600
书号：155066·2-20946
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