GB 14752-2010 食品安全国家标准食品添加剂维生素B2（核黄素） GB14752-2010 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB14752——2010
食品安全国家标准
食品添加剂维生素B2（核黄素）2010-12-21发布
中华人民共和国卫生部
2011-02-21实施
本标准代替GB14752—1993《食品添加剂维生素B2（核黄素）》。本标准与GB14752—1993相比，主要变化如下：GB14752—2010
鉴别试验增加了紫外-可见分光光度法和红外分光光度法鉴别，修改了荧光法鉴别：指标由≤3mg/kg修改为≤2mg/kg本标准的附录A和附录B为规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB14752—1993。
1范围
食品安全国家标准
食品添加剂维生素B2（核黄素）GB147522010
本标准适用于经化学合成法及生物发酵法制得的食品添加剂维生素B2（核黄素）。2规范性引用文件
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准3化学名称、分子式、结构式和相对分子质量3.1化学名称
7,8-二甲基-10-［（2S,3S,4R）-2,3,4,5-四羟基戊基]-3,10-二氢苯并蝶啶-2,4-二酮3.2分子式
CiH20N4O6
3.3结构式
3.4相对分子质量
HOHHOH
376.36（按2007年国际相对原子质量）4技术要求
感官要求：符合表1的规定。
表1感官要求
组织状态
橙黄色
结晶性粉末
约在280℃时熔融，同时分解。溶液易变质。在碱性溶液中或遇光变质更快
4.2理化指标：应符合表2的规定检验方法
取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和组织状态，其气味。
维生素B2（核黄素）（以干基计），w/%比旋光度α(20℃,D)/（(°)dmkg）感光黄素的吸光度
干燥减量，w/%
灼烧残渣，w/%
重金属（以Pb计）／（mg/kg）
砷（As）/(mg/kg)
理化指标
98.0~102.0
-120~-140
GB14752—2010
检验方法
附录A中A.4
附录A中A.5
附录A中A.6
附录A中A.7
附录A中A.8
附录A中A.9
附录A中A.10
A.1安全提示
附录A
（规范性附录）
检验方法
GB14752—2010
本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。A.2一般规定
本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682一2008中规定的三级水。未指明的溶液为水溶液。试验中所用标准滴定溶液和其他所需溶液，在未注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602GB/T603之规定制备。
A.3鉴别试验
A.3.1荧光试验
A.3.1.1方法原理
维生素B2（核黄素）具芳香环和杂环，有长共轭结构的元→元*跃迁，具有荧光性，在酸、碱性条件下及加入各种还原剂均会使维生素B，（核黄素）转变为无荧光的物质A.3.1.2试剂和材料
A.3.1.2.1盐酸溶液：1+2
A.3.1.2.2氢氧化钠溶液：40g/L。A.3.1.2.3连二亚硫酸钠。
A.3.1.3分析步骤
取约1mg实验室样品，加100mL水溶解后，溶液在透射光下显淡黄绿色并有强烈的黄绿色荧光：分成二份：一份中加盐酸溶液或氢氧化钠溶液，荧光即消失；另一份中加连二亚硫酸钠少许，摇匀后，黄色即消褪，荧光亦消失。A.3.2紫外-可见吸收光谱鉴别
A.3.2.1方法原理
维生素B2（核黄素）具苯环结构，有多个共轭双键，其紫外-可见吸收光谱中有三个吸收峰（444nm，375nm与267nm），用A444nmlA267nm及A375nm/A267nm的比值来鉴别维生素B2（核黄素）。A.3.2.2试剂和材料
A.3.2.2.1冰乙酸。
A.3.2.2.2乙酸钠溶液：14g/L
A.3.2.2.3实验室样品溶液：避光操作。取约0.075g实验室样品，精确至0.001g，置烧杯中，加1mL冰乙酸与75mL水，加热溶解后，加水稀释，冷却至室温，移置500mL棕色容量瓶中，再加水稀释至3
GB 147522010
刻度，摇匀；精密量取10mL，置100mL棕色容量瓶中，加7mL乙酸钠溶液，并用水稀释至刻度，摇匀。
A.3.2.3仪器和设备
A.3.2.3.1紫外-可见分光光度仪A.3.2.3.2石英池（1cm）。
A.3.2.4分析步骤
取实验室样品溶液扫描，在波长444nm±1nm、375nm±1nm与267nm±1nm处有最大吸收并测定吸光度（A），计算A375nm/A267nm的比值为0.31～0.33和A444nm/A267mm的比值为0.36～0.39。A.3.3红外光吸收图谱鉴别
A.3.3.1试剂和材料
溴化钾：光谱纯，干燥品。
A.3.3.2分析步骤
在红外灯下进行，以防止吸潮。将实验室样品和溴化钾粉末置入玛瑙乳钵中研匀，装入压片模具制备样片并进行扫描。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（附录B）一致。A.4维生素B2的测定
A.4.1方法原理
维生素B2（核黄素）具苯环结构，有多个共轭双键，在波长444nm处有最大吸收，将样品溶液于该波长处测定吸光度，以百分吸光系数（E1%）计算即得其质量分数。A.4.2试剂和材料
A.4.2.1冰乙酸。
A.4.2.2乙酸钠溶液：14g/L。
A.4.3仪器和设备
同A.3.2.3。
A.4.4分析步骤
取实验室样品溶液（A.3.2.2.3），在波长444nm±1nm处，以水为空白对照，测定吸光度（A）。A.4.5结果计算
维生素B2（核黄素）的质量分数W1，数值以%表示，按公式（A1）计算：W=
5000×A
323×m×(1-w2)x100
式中：
5000实验室样品稀释体积，单位为毫升（mL）：323——维生素B2（核黄素）的百分吸光系数（El%）；A—实验室样品溶液（A.3.2.2.3)的吸光度数值；m一实验室样品质量的数值，单位为克（g）；W2—A.7测得的干燥减量的数值，%。两次平行测定结果的绝对差值不大于1.5%。（A.1)
A.5比旋光度的测定
A.5.1方法原理
GB14752—2010
维生素B2（核黄素）的核糖醇侧链23,4-位有三个不对称碳原子，具有旋光活性，在碱性条件下，呈左旋光性，以此检查样品的比旋度。A.5.2试剂和材料
A.5.2.1二硝基苯肼试液：取1.5g2,4-二硝基苯肼，加20mL硫酸溶液（1+1)，溶解后，加水使成100mL，过滤。
A.5.2.2无醛乙醇：取2.5g乙酸铅，置具塞锥形瓶中，加5mL水溶解后，加1000mL乙醇，摇匀，缓缓加25mL乙醇制氢氧化钾溶液（1-5），放置1h，强力振摇后，静置12h，倾取上清液，蒸馏即得。检查：取25mL无醛乙醇，置锥形瓶中，加75mL二硝基苯肼试液，置水浴上加热回流24h，蒸去乙醇，加200mL硫酸溶液（2→100），放置24h后，应无结晶析出。A.5.2.3盐酸标准滴定溶液：c（HCI）=0.1mol/L。A.5.2.4无碳酸盐氢氧化钾溶液：取20g氢氧化钟，加100mL无醛乙醇，放置过夜后，吸取上清液加无醛乙醇稀释成0.1mol/L的溶液，用0.1mol/L盐酸标准滴定溶液标定后，再精密量取18mL，加新沸过的冷水至100mL，摇匀。
A.5.2.5实验室样品溶液：称取约0.25g实验室样品，精确至0.0001g，加无碳酸盐氢氧化钾溶液溶解并定量稀释制成每1mL中约含维生素B2（核黄素）5mg的溶液，摇匀。A.5.3仪器和设备
A.5.3.1旋光仪。
A.5.3.2旋光测定管。
A.5.4分析步骤
取实验室样品溶液，按GB/T613测定。A.5.5结果计算
维生素B2（核黄素）的比旋光度α㎡（20℃，D）按公式(A.2)计算：αm(20℃,D)=α
式中：
测得的旋光角，单位为度（°）；1—旋光管的长度，单位为分米(dm)：P——溶液中有效组分的质量浓度，单位为克每毫升(g/mL)。A.6
感光黄素的测定
A.6.1方法提要
维生素B2（核黄素）几乎不溶于三氯甲烷，杂质感光黄素溶于三氯甲烷，在440nm处有紫外吸收，因此用三氯甲烷提取感光黄素，排除维生素B2（核黄素）的干扰后，在此波长处测定，作限量检查。但维生素B2（核黄素）在乙醇中稍有溶解，为克服测定时的干扰，所以必须使用无醇三氯5
甲烷。
A.6.2试剂和材料
A.6.2.1无水硫酸钠。
GB 147522010
A.6.2.2无醇三氯甲烷：取500mL三氯甲烷，用水洗涤3次，每次50mL，分取三氯甲烷层，用无水硫酸钠干燥12h以上，用脱脂棉过滤，蒸馏，即得。临用前配制。A.6.3仪器和设备
A.6.3.1紫外-可见分光光度仪。A.6.3.2石英池（1cm）。
A.6.4分析步骤
A.6.4.1实验室样品溶液的制备：称取约0.025g实验室样品，精确至0.0001g，加10mL无醇三氯甲烷，振摇5min，过滤。
A.6.4.2测定
取实验室样品溶液，在波长440nm处，以无醇三氯甲烷为空白，测定吸光度（A）。A.7
干燥减量的测定
A.7.1仪器和设备
A.7.1.1扁形称量瓶。
A.7.1.2恒温干燥箱。
A.7.2分析步骤
称取约0.5g实验室样品，精确至0.0001g，置于105℃±2℃干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不可超过5mm，105℃±2℃干燥至恒重。A.7.3结果计算
维生素B2（核黄素）干燥减量的质量分数W，数值以%表示，按公式（A.3）计算：w
式中：
m-m2×100%
m干燥前实验室样品和称量瓶的总质量数值，单位为克（g）；干燥后实验室样品和称量瓶的总质量数值，单位为克（g）：m
m一实验室样品的质量数值，单位为克（g）（A.3）
取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.05%。A.8
灼烧残渣的测定
A.8.1方法原理
样品加硫酸经灼烧后所留的硫酸盐，用重量法测定。A.8.2试剂和材料
硫酸。
A.8.3仪器和设备
A.8.3.1瓷。
A.8.3.2高温炉。
A.8.4分析步骤
GB147522010
称取约1.0g实验室样品，精确至0.0001g，置于已在550℃±50℃灼烧至恒重的瓷埚中用小火缓缓加热至完全炭化，冷却至室温后，加1m硫酸使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，移入高温炉中，在550℃±50℃灼烧至恒重。A.8.5结果计算
维生素B2（核黄素）灼烧残渣的质量分数W，数值以%表示，按公式（A.4）计算：.m. .x100%.
式中：
m—残渣和埚的总质量数值,单位为克（g）；m4——的质量数值，单位为克（g）；实验室样品的质量数值，单位为克（g）。m
......(A.4)
取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.02%。A.9
重金属的测定此内容来自标准下载网
A.9.1方法原理
样品中杂质金属在酸性（pH3.5）条件下，与硫化氢或硫化钠试液显色。样品与标准铅溶液同法测定，以此检查其限度。
A.9.2试剂和材料
A.9.2.1硝酸。
A.9.2.2硫酸。
A.9.2.3盐酸。
A.9.2.4甘油。
A.9.2.5乙酸铵。
A.9.2.6硝酸铅。
A.9.2.7硫代乙酰胺。
氨试液：400-→1000。
氢氧化钠溶液：c（NaOH）=1mol/L。A.9.2.10
盐酸溶液：c（HCI）=2mol/L。
盐酸溶液：c（HCI）=7mol/L。
A.9.2.12氨水溶液：c（NH3·H20）=5mol/L。A.9.2.13酚指示液：10g/L乙醇溶液。A.9.2.14乙酸盐缓冲液（pH3.5）：取25g乙酸铵，加水25mL溶解后，加38mL7mol/L盐酸溶液用2mol/L盐酸溶液或氨水溶液准确调节pH至3.5（pH计），用水稀释至100mL，即得。A.9.2.15硫代乙酰胺试液：取约4g硫代乙酰胺，精确至0.01g，加水使溶解成100mL，置冰箱中保存。临用前取5.0mL混合液（由1mol/L15mL氢氧化钠溶液、5.0mL水及20mL甘油组成），加上述1.0mL硫代乙酰胺溶液，置水浴上加热20s，冷却，立即使用。A.9.2.16铅标准溶液：称取约0.160g硝酸铅，精确至0.0002g，置于1000mL容量瓶中，加5mL硝酸与50mL水溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为购备液。临用前，移取10mL0.02mL贮备液，置7
GB14752—2010
于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL相当于10μg的Pb）。配置与贮存用的玻璃仪器均不得含铅。
A.9.3分析步骤
按《中华人民共和国药典》2005年版二部附录VIIIH重金属检查法第二法测定，具体方法如下：取A.8中遗留的残渣，加0.5mL硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后（或取1.0g实验室样品，缓缓灼烧至完全炭化，冷却至室温，加0.5mL1.0mL硫酸，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加0.5mL硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，冷却至室温，在500℃～600℃灼烧至完全灰化），冷却至室温，加2mL盐酸，置水浴上蒸干后加15mL水，滴加氨试液至对酚酰指示液显中性，，再加2mL乙酸盐缓冲液（pH3.5），微热溶解后，移置纳氏比色甲管中，加水稀释成25mL；另取配制实验室样品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加2mL乙酸盐缓冲液（pH3.5）与15mL水，微热溶解后，移置纳氏比色乙管中，加1mL土0.01mL标准铅溶液，再用水稀释成25mL；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2mL，摇匀，放置2min，同置白纸上，自上向下透视，甲管中显示的颜色与乙管比较，不得更深。
A.10砷盐的测定
称取5.0g士0.01g实验室样品、量取10mL土0.05mL限量砷标准溶液（每1mL溶液相当于1Hg），分别按GB/T5009.76一2003第一法中5.2.2干灰化法处理试样后，按第二法砷斑法检测样品。试样的砷斑不得深于标准砷斑。
附录B
（规范性附录）
维生素B2红外光吸收图谱
注：引自《药品红外光谱集》447图第一卷（1995）中华人民共和国卫生部药典委员会编图B.1维生素B2红外光吸收图谱
GB147522010
光谱号447
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