SN/T 1446-2010 猪传染性胃肠炎检疫规范 SN/T1446-2010 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国境检验检疫行业标准S/T 1446 .-2010
代W SN1 6. 2001.SN/ 1248 2--2006,SN/T 1697---8006猪传染性畅发检疫规范
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2010-12-01赖
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SN/T 144G--2010
本东代磷14【2消传量路凰新源账价版降试，N下622305传染胃阶孩中和试盗换作期！：和辫染性型肠续病费和销呼吸消流状病出作阳断FSA试常作电
称密国际动物组多notTesnaVcinTerTeaa]AAR教路用件版M有美你文
本你准涵认认学带年
本极游超典单的：中人美商净龄检疫间本保双想单人个储张游熊等颜品求点本深都所代弥降市次股术发中为--N,46. 2
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猪烤斑阁酸检炫煤霜
5N/T 1445-2013
水标规了洛传染心化场费心澳！学公性畅总润能检测的痛摄分离器家，按华疫费密法双沉体实心验联负点限常鉴成：舒技最而抗体设测的微民循中和试验阳断灡联像婆吸试照燃的技个要求本标准适用工器传院理照资用诊：理：意及流行病学调会等规范性引用文件
烈件对实销惠腔不生阅的讯安件贷所注期的服木点用于文作。凡资不单自期的开文伴品款服有在用质量的悠漫单语用本文件B/16682分析实验用本期制路
[18088用大将检
下刻缩降落活尼于本文行
猎传染件胃断药病等
消织增平数感实域
光密度假。
麟谢盐察冲液。
核核發
e细牌
非洲凝猴野细范
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TEITEAT
$9/1446--2010
315细膜
黏肾洲胸
STE细胞
猪耀传代细胞：
4、1 发病筛状
股固龄以内的们智感梁活聪h～2h会出理呕吐，继而出现严重的水伴邮赖献将节，类望的伯·常爽有未消化的遂实是，体最遇连子降、尔群呀壶脱求，装纳了（外「死「率达100在2周整周肇的们深）。，离乳猎感染后&小「发病，表规求滑，呈赋款粪使求色戒性。个别能收用：中新最泻信秘！供林放下降，脂装现发育不良。微为慢猪、有北思清与跑详德这复遵状山小尚泌萨止儿赏欲不振和腹褐也有哺乳母猪不表现而雍状，冬在壁节是发中小样游医：开其亲周龄得发斑深和死I率高等特点节以作用初乐诊断：但据流行性接寄品（PLLV）筛状病萨（PR1V)等脑道病辞让常常起类似的猪股江治诊症，所以纹假依惑临诊追获作为了计讼脂的你标热点所，成进行病原半利油学好法的新，能确诊4.3病理变化
TE病薛通过消化道利呼吸滑人慢机降：雨经可潮，食管·再洲人消化道：在小畅皮细腹签件越染：针致畅和同场而平靠客菱缩。不度举伏膜很，一般为1218h存帮发病活征花表屿为严重悦水而死丰强的病理变就为急我，以强细自可见程度不的存谢性炎症。而场究神乳块，胃慎充车小豚充满气体，肠冲下降，管碎安道旱透明战平逸啊状肠肉容旱沫状、蓝色通现肠索游门验，母常没干：心免明最癌！到病发，病现织学变化而呢小肠续落缩是短，是至环死，与經累猪相比，绒十短的比例为！：7肠上皮纠跑变性衔膜周信宏内可原案液性渗出和细胞凝海：肾计了动潮尿管皮尿管闭密而发牛無肿脂肪变性：电户闹微錦观蔡，可有剑小中感康微绒，践整绿、闪网度供他细胞助防成分在胞游内有版囊粒子存在。
4.3流行病学
猪对E病学最为易感，奇泽个特的常石山！叫外的动物如衔猫，新独燕八能等不致病它们康非尚：心润学调点国：性同的间家手尚终猪祥官不用：E病的储存宿士至少有国单，一独中的！享家安的我如育理群场或不凝有新生行我的猪埃病闻持续荐径」这些猪场：！例！客病与活萃，即而明题不病的爆发，第二种是额、猴、猴独最八部、世蛇等半排！吊本病：种提带毒搭或装病猪加过感内分泌物、奠使乳排萨第阿种乐感微了摘声“，业准而液利以密脂的激奔物可将甲病择传人猪群。在满游症期界享销的征院管根凝不司血龄器的易感，：生，主流行性知易感的猎群当TG病群人设之脂，常常会述速导敏许种龄帮家孩，求在奇学：其数游表境不商程度的临诊症状：H雪品伙水伴欧httr
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最助方流行性品限了经常有端的落不断川易许猪的场中品然年猪能从第游成从母猪乳净中我得被动穿骏到的限创，开病游感染为愿划骆的免魔力时，将会受到属染：所以TCE满长期作自总律中H车周博性流行，常发生十TCE病率重新没人有色变母猪的猪场，司「前冬学端界裕主以人会教人以被启举，新进的学于猪和出栏者使成为易浆
读给超诊断
1常样
5.1.1深格标准
刘该病的迟步诊断需丧计行病高分离等密、分了生物学或清学检查等接/T1888期点更祥并境送样单送实验室。1.，病料荆深策
取润染或猪内容榜：义广猪果小场博常性准，取H内容物及小肠而于病静梭测，样品扇新解或冷凝
51.血梯的乐幕制衡
菌提作果集动物血，科头不女：自然凝后店菌分离而清分装，加盖密判封质冷嫩保存5.2.端素分离察案
5.2.1设备、材料和试剂
本标准所阳水应符个（66S2中“缤图瑰格：下列诚剂除特殊舰定外，购分所纯试剂。下标滩研性核储器性温游中指净发概供5.3.13细购存猪背原红瓶或P15.纪。51模m清;不含菌支原体6长器3min：5培择滚维持，润奇墩澈P經浮滚：州涤录A5.24. 1. 5
牛物态金
倒置微馆
二氧化蕨增养箱。
5.8可单头微里移液带21cu0
.名1.冷冻离心机：
52.2病料然理
将果集的小质空肠剪碎及肠内究将整3用年穿素10000儿钟霖累10000ml的2酸级冲液(的液翁康AA：：审需成：点，耀装解处理店条件下300miu离心nm取上清滴，经0.um微乳链费.要：2r保存务用5,2、操作计骤
安常期方法制备律骆肾原代维册惑长，！组膜单思：将病料过滤解（满毒培养液的1为)接科3
雪品伙伴欧ht
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到已恶成良好单层的细腹上感款：十补加卡官净常、5一简化碳增养箱培券，题非观细展病变（CTE，延续3务品服实：则收取济养物继代于新制备的细上自传3代，出现组孢纳兴收最新款物1“以下好鉴。同时设立未种的纠跑对照5.2.4缩集判宽
524、1对照统翘胞正常提神控品的心件：孕清靠病密存划为阴性。5.2.4.2本病清CPF变化的球点纸的卖择单家.胃缩，早胖状或驾需中样均3分作.细跑被损，脱落。不司细跑增辨物，CPE可能个5.2.31现1述痣变的细购普举密、量2认格主签家半：，效宁本实心降联免疫吸附试验，反转录聚金酶链式成做进一步病将定。
5. 3道接免疫荧光法
5.3.设备，挞料和试剂
本标准所用水应待合G%/6人十银实前者路。列诚测除持殊规外，均常分积纯试剂。53.TGE蒙光标证就体A指单
5.3.2TOFV图朗性对焦”措宁空踪惠：T操存5，字0.1%任文斯监原液瞬孩在钱计测所路录八A帝5.3.1.4荧光以微能，
3.1.5冻切机，
53.5可调单以微率移微器3 1
5.3.2梁样、送检和处理
从急性病例采服空肠（中段）、病科本，新境露山在选种纠织，慢性、隐性感染病例来联痛桃，建设来国死：0mn内的爱吻。等汇年成1，7m冰涤买片：或将组织标本制成深中病桃体新系膜淋巴结上H德新商除释签险制相成做您片，标本计觀好后，风平，子而所中固定mnPx
细胞培落盖破片：将喜1热及化X服在中洗三次风，内响国15 mine于s中湾m1！
5.3.3操作步骤
5. 3. 3. 热色
用002光供实思鉴溶液泽FA释2！激1G格），4000/mm离心10min，退上清滚满了标人F盒包服中冲饮依次为inin风间法探作阳性、南洲对照所。
5. 3. 3.2谢间
满如磷酸盘缓冲洲蓝破清同，！小的发光显微镜检，如当！盗香不完刷将荧光片登1袜中于样h为龄血完液：
5、3.A翁渠刻庭
敲检你本的纠恼装构减究整清断，门性片判策。细核暗黑仰，紧最苹素绿雪品伙伴欧ht
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色刘为留性，所组隐浆中正特计性要光服就免黑蓝染就红色，核照然色者则为阴性。4泥抗体实心酶联象凝鼠阳试输
5.4.1设备材料和试剂
本标能用求成符合（格：6）中“承的划择，下列剂除特涞规处外。均措分纯站剂：车1V标用件创接原待度中位提讯2搭情就单您提供
54售3洗滋、包被格释液祥品筛秘液，单价计体猫祥茂，底物济液、然止液配制方法见附求A筑A.3章
.4.1.41
冷冻离心榔
5.1.1. 5嗨标仪
56可谢学头微量移波带（5：：0l)5心之策样，设检和外瑚www.bzxz.net
取病宠举便胶任储场心客物：用泽带小1：：辅解靡瑞000min离心20m1n：取「清液分装立部低前或保存备
5.4.3操伴数骤
。、冲踩包被被
同孔注人洗，范！用，净人就液，改次油大凡内残激在滤鼠上吸干。5.52包被抗体
用焦被稀释液稀释铭折下分您用得签，能用加0：置4过夜.弃液：冲洗同5.35.4.3.5加摔品
制备的被检样品片料品释释落微！学费粹，人两个间每孔100L每块反应板改阴性抗原阿性抗原没深液对照各均孔置年用3齐颜，许就同1.3.1.1.3,4加酶标抗体
每孔1络醇标抗体带滋带学本德现激股的猪抗用-置37（2h冲游间3. 1. 3. 1
5.4.3.#加物料液
每灿新配制底物落液片
54.正应
传乳繁正或瑞m
5、.4节果
用服标仪在诚长测盟所值：同性现对照商平均梦倍）阳性价原划照需孔平陶（信品山应：控以中两个象件判定结被检护原值游阳性抗原他值被！别为品性不则为阴性就条雪品伙伴欧ht
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件销依」判避你班.可复检-欧改片得接哎终科剂元靡年5.，反转禄聚含酶链武反应
5.5.设备、材料和试剂
本标雅所用水应符个T！牛努水斯字：RA涤作所涉虑翁耗材等被国无RA醇产毕或处理：
5.5.1. 16核作酸随机列物;(:pm.5、51.2M-MIV 反转表酶(1 t. 1.5.5.1.sdNTP每种浓度离为 m m
5 5. 1.4kNAsir(23 (0/ul.) :
TagDNA聚联.μ)
TNA M:rker DL20!分于量标降。5. 6. 1.6
名二该黛碱鞍(DEPC)
3. 5. 1.7
5. 5. 1. 8
混凝(g)
Triton-X130(e 3.
5. 5. 1. 5
5. 5. . 10
5. 5. . 11
5.5.3, 12
葱水接0.1加人DEPC摇匀，案湿静替划夜，034×0F高20 min.冷划备用。琼脂耕（中泳毅）
lAnmu相RNA质试剂盒（Qiage或类微效效产品：商业购买，引物（0 M)：根据病尚S当综码基岗钠E端序列设死，F间引物为52-TATIT5.5.1.13
GTGGT YTTGG TYG TA ATG:HH Y. -RN TTIGG TAAT AATIT RGA-3T心E领计增段86 bp.PRCVi曾用05 214 bS.5.114样品裂解液.5度转录缓冲滚、×FR缓冲液、电泳缀冲液.6×载祥缀冲滚的制见附求A第A。I章
5. 5, 1. 16
5. 5. 1. 17
离心机低高连离…就量商谢离心视水浴敏0 1C0
激量移液器及对应滴头:209 000 m1,1 140 μ0.1uL~2℃ μt.c5.5.1. 18
滩祸振落器，
55.1.19核酸扩增议，
5.5. 1. 20
凝胶电泳仪、小电激槽
凝胶紫外轻测议，
. 5. 1.2 1
5.5.1.22牛物女个柜、
5.5.2采样、送验和处理
采靠的携便样品压样品裂解液：舒？：本效置10min底4℃件下000r/min离心》min职「消保存希用：采集的小最新是峻内容额：剪评创浆：川含青需索【0000链带素1c点/mL的17.2磷酸盐腰冲浓（液期附A落A1章制成1：10总液，4条下3000/mit.离心10mi.取F清液保存爸用5.5.3操作步骤
6. 5. 3.1 照NA 的提取
取上清液按照An，新股剂盒a进行提取。其他等效的随品化A提求就剂盒或法旭心华剂：
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s2转A
，532火药蒸水华：：！路的RA稀3股作好称的o是人
博衣成浓
中核爱源制级
RNaaii
及砖晟缓汁液
状素热水
！在浴滑球济
5.5 3.4. 1
zo..uorr微：依人
联服应体系
Tag DNA 美-i
ri.-x.00Js5
北南蒸水
53.特PR度成体系医71议比
54*物的检测
[-I ar/ui
/T: 1446-201e
4：s,，1mm，in进2个环：
产物AM中你各漫台！微样级冲液微前濑器分别加人城脂帮服传油沃证在行，蒙外灯检测下斌察结果H熙
5.4微现惠
闻性祥品六条业、澳平格小对照产中！国可判究，如被检样品无录带则给果为性如额教.
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样品有条势，扩弹片股格为TI.V用件·了片设p2吉为RCV阳性：如果出现与设计长度不尚的条带，为非特异增质满最，源次试验都为节特性反应附，判为阳性。5.微影血清中和试验
5,6。1设葡村料和试剂
本标准所用水应符T中：毁中惠格，T到剂特殊期定外，均指分析纯试剂。5.6.TGE病毒，Mle株减权感格识年媒56.1.2淄胞：落率究份代细潮（）热肾年（）标能限性血清：效价不低学单带摄按说期书使用5. . 1.32
5.61.4标期性血信：不含T0统件品争承常m货出挥单信供，接说项书值用。5.6.1,5稀释液、细胶生长液、维落液、的胞消学的期齐法与聚康A第A5章。二氧化碳培笋箱。
电热灯温水溶箱。
5.3.1.侧置鼠微镜。
说单头多头微显移液餐0
5.6.2采样.送检和处理
高渐采闻并分离出血消，待检工清率心得：，·保不，5.6.3操作步骤
5.6.3.1预备试验
5. 6. 3. 1. 1
细跑培养
按带规方法落关细胞（S或K：
565.3.1.2病毒增墙
在PK细跑成纸的形成单长室池，按按种量约为件长液1：的比例将猫病要液接种到游汽的细收单层，准科转使病来波免分激没细胞单层，置37：5头二氧化碳吸附【h，然后加人氧跑维净被需37：乳信微格举新毕养，途日观察。当75%80%细胞出明巅变时，冻融跑版次：然分整双低，写：或滚氮保市角用。5.6.3.1.3嘉价测定
首先将份辞用和释滴件管刻理释：认！。然后在孔平底组织培养板1，先乱加人0稀释额，再证人或名积解的满爱态滋，每稀释度做8孔设止常细胞对照4孔（伊孔含释释滋130细用蔻液，钱良群的成纤跑经细胞消化露游化扇用细跑继持液将细施每毫升：乐按“用大内置37%5路化碳培养箱磨养3d7d.记录舒病寄梯释激单2用数：取b7站计件舒50中TcI5.5. 3.？我试验
5. 6。3.2. 1清处理
持而准们性和现性落室，本浴箱开8
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5..3.2.2血滑帮辉
在96孔板上将每价被检血清用帮释游作：1：3.1：4.8.1：16稀释每个税释度为想孔，#份血清8个乱，销孔50其中！2添整设为临清专书对机51，3.2.33件病霉液的滴训
根据知效价将病品液称释成复管1下的作病旋滋到租5L训人到各平，输清凝性对照引不加工作病是液，训小都料滚简如派练均创，置37死5%氧化磁培养稳中利I i
5.63.2.，细的入
用细胞消化波将出长满的T成细游消：加人纠地缩待液，制减细胞想液（细胞含氧约为都开30个胞！：按孔！多内“微化媛熔养箱中培拳d？d菌用观絲结彩，
3.3.2.5对照
清照孔与检测的操件同时进了，正资制制对照，，何孔含稀辫藏100细抱感液100自性证滑对照操作与被检面洁拍同间性清来眼以格比称释将阳性也游稀释然1：32，每个稀释度作两个存引50旺，其中【：2稀释度出成为市可性照引而件摘毒液及细胞导液的方然与被检血清间
56.38病寄回财试娘
作满寄液帮释成，，10n：coC个馨释密收王作病激和个稀带度的病部波假滴家帮释度许！，50得孔再各加！500佛释液和1003细胞最液：
5,养4结棠判定
1.试验成支的章件
细对照细胞长形：性南洁照谢究会圳牌游读为一）阳性落照不出现C判读为E共效价与膜滴惠不超过：个滴度：病帝国归试验：以都出现FIT有个别孔出期或小出理，C.！TC，容我购不岛现CP5,.4.2结果判定
前实判血消照，套明有洁冠不行意我有活望，如呆全部对照点实，了作病游用量o成准5T编内。
被清在大于或等于，8糖择皮发实照均，该而清制为阳性之双非内细胸均有（F，判为阴性，当双孔中有自期：与孔在P，判为可需量检。若重检后，结果较然好大或等于释双引中行阳有附判为阳性5限断联免疫附试瑙
本标雅推教采用典VAOV款：游呼吸道减状病（PRV格染区别诊断1：SVAOVIR@出确实需医价所SVA，司翼供的品商品名，给出这-信息是为于方便本你邮的便用格，并不志求利孩产品的唯认县其效产品具有相尚的效某期可使用这造效产品，雪品伙伴欧ht
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5.7.1设摄树料和试剂
本你所川水应符合（下落分正实实表：线求规整：中列点剂除特殊外均指分析纯：1.1V抗康包被摄是板由单供
5.7、1.2THV下对照血消、V：V性3照助活RC组必对照典清：中指定单位投供5.7.1.3标准抗V单充降抗体：RV单点降抗体：H批单位带供5.7.4钟根过载化物障HR标证情的新业第购，使用前对尚提号的产品边行作浓度室。
洗激带科渡底物深海正滚工制法科A绝A产5.7. 1.5
5.7.1.冷陈密心机。
5.7.1.7分析天平
5.7.18单多引叫微2液器F200100.000.7.19，
5.7.1.10酶标仪、沿。
操作骤
独同的成户所有端剂，平室溢（1S%23）。将反应板/条做好标记5.7.2. 1
5。.2.2印洗液洗板一次排次证m.最度一次拍于去除所有线图液味5.7.2.3支图分册如人TGEV、PRCV性照班清和GEV/PRCV防性对照清创相应面清对照引, 10 1/。涤所渐录
57.2.4用多通道稳滴器添加用T所转！：00/孔然唐加人来稀释的待检血样，50礼德价格品两乳。经市器得、
5.1.2.5密真激吊板，七温育3。按5：“2操作板。5.7.2.6立即加人T滚康的标准抗TGE、C克降抗体和TGEV/PRCV单克整抗体，到对成血清.100H你降用降录1。座封微轻极，充温<18K25C>温行30Ymin。5.7.2.按5.72.3件涉板。
加入江作浓度R称记抗鼠1：.1ou/：“等微量板，室湿源前30mm。5 7.2.8
5.7.2.9按.7、2.2模作洗极
5.。10快速加人底物欲液，0孔消盒温（18丫2瀛分2mi在行颜色变化57.211加人终止液终正及应积孔。终止满溢加顺字与底腐物落密添加预序利同：充分振满用畴称标在波长生m：处测吸光位：，究表：气许为对照5.7,3续果判定
5.7. 3、1
邀据计算
分别计算被山得一对照和检离料品坊·号（用南。摄式1)计单阳性对照，检测样品的可分比制率单和V单
百分比制率（Pm性对照00成胆对照的D值10（1)#生对服街
5.7.3.2有效性判断
当下列亲州成支时、本试验才为节效-GV/R阴性m清
加V单抗作用产用
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