SN/T 2131.2-2010
基本信息
标准号： SN/T 2131.2-2010
中文名称：进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法 第2部分：小鼠生物法
标准类别：商检行业标准(SN)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 进出口 贝类 腹泻 毒素 检验 方法 小鼠 生物
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
SN/T 2131.2-2010 进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法 第2部分：小鼠生物法
SN/T2131.2-2010
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标准内容
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2131.2—2010
代替SN0294—1993
进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第2部分：小鼠生物法
Determination of diarrhetic shellfish poisons in shellfish for import and export-Part2:Mousebiologymethod
2010-01-10发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
金银伴网
2010-07-16实施
SN/T2131《进出口贝类食品中腹泻性贝类毒素检验方法》共分为两部分：第1部分：荧光磷酸酶抑制法；
第2部分：小鼠生物法。
本部分为SN/T2131的第2部分
本部分代替SN0294—1993《出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法》。本部分与SN0294—1993相比，主要变化如下：SN/T2131.2—2010
法第2部分：小鼠生物法》；
将原标准名称修订为《贝类中腹泻性贝类毒素检验方法将范围进行了简化和修改；
增加了术语和定义；
试剂和材料中增加了1%吐温-60生理盐水的具体配制方法；一在结果计算和表述中，增加了报告表述方式；一增加了健康和安全的提示条款。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：曹际娟、王秋艳、郑秋月、徐杨、王刚、于兵、郑惠芳、赵昕、吴振兴。本部分所代替标准历次版本发布情况为：SN0294—1993。
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1范围
进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第2部分：小鼠生物法
SN/T2131.2—2010
SN/T2131的本部分规定了贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的小鼠生物测定方法本部分适用于贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的检验2规范性引用文件
下列文件中的条款通过SN/T2131本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB14925实验动物环境及设施
3术语和定义
下列术语和定义适用于SN/T2131的本部分3.1
腹泻性贝类毒素diarrheticshellfishpoisons，DSP化学结构以大田软海绵酸（okadaic acid.简称OA)及其衍生物为代表的，摄食后可产生以腹泻为主要特征的存在于贝类体内的海洋生物毒性物质的总称3.2
鼠单位mouseunit，MU
对体重为16g～20g的3只ICR雄性小白鼠腹腔各注射1mL贝类提取液后，使2只或3只小鼠在24h死亡的毒力为1个鼠单位。4试样保存和制备
4.1试样保存
4.1.1样品要有充分的代表性并尽可能没有个体差异。同时，还要有充分的个数。去壳贝肉、带壳的或罐装的等，均应采取足够的个数并使贝肉达400g以上。4.1.2远离实验室不能及时送检的样品，除了在常温下品质不会发生变化的，应将样品置于合成树脂袋内冷冻送检。如为带壳样品，应按4.2的方法开壳，去除水分后冷冻送检。4.2样品的制备
4.2.1生鲜带壳样品的前处理
用清水彻底洗净贝类外壳，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来物，取出贝肉。不应以加热或加药物的方法开壳。注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色）。
将去壳贝肉放在孔径约2mm的金属筛网上.沥水5min.按4.2.3制备检样4.2.2冷冻样品的前处理
在室温下，使冷冻样品呈半冷冻状态。带壳冷冻样品，按4.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉，此时的1
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SN/T2131.2—2010
贝肉仍呈冷冻状态，除去贝肉外部附着的冰片，轻轻抹去水分后，按4.2.3制备检样；事先已去除水分的冷冻去壳样品·室温缓化后，按4.2.3制备检样。4.2.3制备检样
对于可以切取中肠腺的贝类（如：扇贝、贻贝及牡蛎等），称量200g贝肉后，仔细切取全部中肠腺，将中肠腺称量后作为检样备用，注意不要使中肠腺内容物污染制样工具；不便切取中肠腺的贝类样品，称量200g贝肉后，可将全部贝肉细切、混合，作为检样5测定方法
5.1方法提要
用丙酮提取贝类中DSP毒素，再转移至乙醚中，经减压蒸干后，再以1%吐温-60生理盐水为分散介质，制备DSP-1%吐温-60生理盐水混悬液，将该混悬液注射人小鼠腹腔，观察小鼠存活情况，计算其毒力。
5.2仪器和设备
5.2.1旋转蒸发器。
5.2.2圆底烧瓶：500mL、250mL、100mL、50mL。5.2.3均质器：转速1000r/min以上。5.2.4布氏漏斗。
5.2.5天平：感量0.1g。
5.2.6带塞刻度试管：15mL，具0.2mL刻度。5.2.7分液漏斗。
5.2.8冰箱：0℃~5℃和-15℃~=20℃一次性注射器（1mL）及注射器针头（8#）。5.2.9
5.3试剂和材料
除另有规定外，所有化学试剂均为分析纯或生化试剂，水为符合GB/T6682规定的一级水。5.3.1丙酮，(CH,),CO。
5.3.2无水乙醚，（CH,CH）2O。5.3.31%吐温-60生理盐水：称取1.0g吐温-60（C6H126O26），溶于生理盐水（0.85%氯化钠）中，并定容至100.0mL。
5.3.4小白鼠：体重为16g～20g的健康ICR品系雄性小鼠5.4测定步骤
5.4.1试样提取
5.4.1.1将检样置于均质杯内，加3倍量丙酮均质至少2min。如为小均质杯，可分两次操作。5.4.1.2将均质好的物质倒人布氏漏斗中抽滤，收集抽提液。5.4.1.3对残渣分别用残渣2倍量的内酮再抽滤两次，其抽提液与5.4.1.2所得抽提液合并。5.4.1.4将抽提液移入500mL的圆底烧瓶中，调整旋转蒸发器水浴温度为56℃士1℃，减压浓缩去除丙酮直至在液体表面分离出油状物。5.4.1.5将浓缩液移入分液漏斗内，以100mL～200mL乙醚和少量的水洗下粘壁部分，轻轻振荡（不能生成乳浊液），静置分层后去除水层（下层）。5.4.1.6用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醚层移人250mL或500mL的圆底烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，35℃土1℃）去除乙醚。5.4.1.7用少量乙醚将浓缩物移人50mL或100mL圆底烧瓶中，再次减压浓缩去除乙醚。5.4.1.8以1%吐温-60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10mL，充分振摇，制成均匀DSP-1%吐温-60生理盐水混悬液。此时1mL液量相当于预先测定的20g去壳贝肉的质量，以此悬浮2
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液作为试验原液进行动物实验。SN/T2131.2—2010
5.4.1.9以试验原液注射小鼠，24h内2只或3只小鼠死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射小鼠。稀释前，应先振荡使试液成均匀悬浮液，再取其部分以1%吐温-60生理盐水稀释。5.4.2小白鼠试验
5.4.2.1选择体重为16g～20g的健康ICR品系雄性小鼠6只.随机分2组：检测样品组和空白对照组（1%吐温-60生理盐水），3只/组5.4.2.2以振荡器使待测液（试验原液或其稀释液）成为均匀悬浮液。分别取1mL待测液或1%吐温-60生理盐水腹腔注射。注射时若有一滴以上提取液溢出，应将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠。记录注射完毕时间和小鼠停止呼吸时的死亡时间，未死亡的应连续观察24h。5.4.2.3观察时限24h内，在空白对照组小鼠正常的情况下，检测样品组若出现2只或3只小鼠死亡，则应按表1进行最小染毒量动物实验或最大稀释度实验。表1注射量与毒力的关系
试验液
4倍稀释液
4倍稀释液
16倍稀释液
16倍稀释液
注射量/mL
a以中肠腺为检样时,相当于含有中肠腺的去壳肉量。6结果计算和表述
检样量\/g
毒力/（MU/g）
6.1观察时限24h内，在空白对照组小鼠正常的情况下，若检测样品组无小鼠死亡或仅有1只小鼠死亡，则报告该检测样品中DSP毒力为：<0.05MU/g，6.2观察时限24h内，在空白对照组小鼠正常的情况下，若检测样品组有2只或3只小鼠死亡，则按5.4.2.3进行动物实验，并根据表1，计算检测样品中DSP毒力并报告结果，或报告该样品的毒力为大于0.05MU/g。
7健康和安全
任何DSP含量大于0.05MU/g的样品即被认为是有害的，人类食用不安全。腹泻性贝类毒素是一种有毒的混合物，为避免腹泻性贝类毒素的危害，应戴手套进行检验操作。橡胶手套、玻璃制品等用过的器材应在5%的次氯酸钠溶液中浸泡1h以上，以使毒素分解。同样，废弃的提取液等也应以上述溶液处理
所有对含有丙酮及乙醚溶液的操作应在通风橱中进行小鼠户体应按GB14925要求焚烧处理，其排放物应达到污物焚烧排放规定要求雪品伙伴网ht：
SN/T 2131. 2-2010
httr
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第2部分：小鼠生物法
SN/T2131.2—2010
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社案皇岛印刷厂印刷*
开本880×1230
2010年4月第一版
印张0.5
字数7千字
2010年4月第一次印刷
印数1-1600
书号：155066·2-20678免费标准bzxz.net
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定价14.00元
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进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第2部分：小鼠生物法
Determination of diarrhetic shellfish poisons in shellfish for import and export-Part2:Mousebiologymethod
2010-01-10发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
金银伴网
2010-07-16实施
SN/T2131《进出口贝类食品中腹泻性贝类毒素检验方法》共分为两部分：第1部分：荧光磷酸酶抑制法；
第2部分：小鼠生物法。
本部分为SN/T2131的第2部分
本部分代替SN0294—1993《出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法》。本部分与SN0294—1993相比，主要变化如下：SN/T2131.2—2010
法第2部分：小鼠生物法》；
将原标准名称修订为《贝类中腹泻性贝类毒素检验方法将范围进行了简化和修改；
增加了术语和定义；
试剂和材料中增加了1%吐温-60生理盐水的具体配制方法；一在结果计算和表述中，增加了报告表述方式；一增加了健康和安全的提示条款。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：曹际娟、王秋艳、郑秋月、徐杨、王刚、于兵、郑惠芳、赵昕、吴振兴。本部分所代替标准历次版本发布情况为：SN0294—1993。
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进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第2部分：小鼠生物法
SN/T2131.2—2010
SN/T2131的本部分规定了贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的小鼠生物测定方法本部分适用于贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的检验2规范性引用文件
下列文件中的条款通过SN/T2131本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB14925实验动物环境及设施
3术语和定义
下列术语和定义适用于SN/T2131的本部分3.1
腹泻性贝类毒素diarrheticshellfishpoisons，DSP化学结构以大田软海绵酸（okadaic acid.简称OA)及其衍生物为代表的，摄食后可产生以腹泻为主要特征的存在于贝类体内的海洋生物毒性物质的总称3.2
鼠单位mouseunit，MU
对体重为16g～20g的3只ICR雄性小白鼠腹腔各注射1mL贝类提取液后，使2只或3只小鼠在24h死亡的毒力为1个鼠单位。4试样保存和制备
4.1试样保存
4.1.1样品要有充分的代表性并尽可能没有个体差异。同时，还要有充分的个数。去壳贝肉、带壳的或罐装的等，均应采取足够的个数并使贝肉达400g以上。4.1.2远离实验室不能及时送检的样品，除了在常温下品质不会发生变化的，应将样品置于合成树脂袋内冷冻送检。如为带壳样品，应按4.2的方法开壳，去除水分后冷冻送检。4.2样品的制备
4.2.1生鲜带壳样品的前处理
用清水彻底洗净贝类外壳，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来物，取出贝肉。不应以加热或加药物的方法开壳。注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色）。
将去壳贝肉放在孔径约2mm的金属筛网上.沥水5min.按4.2.3制备检样4.2.2冷冻样品的前处理
在室温下，使冷冻样品呈半冷冻状态。带壳冷冻样品，按4.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉，此时的1
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贝肉仍呈冷冻状态，除去贝肉外部附着的冰片，轻轻抹去水分后，按4.2.3制备检样；事先已去除水分的冷冻去壳样品·室温缓化后，按4.2.3制备检样。4.2.3制备检样
对于可以切取中肠腺的贝类（如：扇贝、贻贝及牡蛎等），称量200g贝肉后，仔细切取全部中肠腺，将中肠腺称量后作为检样备用，注意不要使中肠腺内容物污染制样工具；不便切取中肠腺的贝类样品，称量200g贝肉后，可将全部贝肉细切、混合，作为检样5测定方法
5.1方法提要
用丙酮提取贝类中DSP毒素，再转移至乙醚中，经减压蒸干后，再以1%吐温-60生理盐水为分散介质，制备DSP-1%吐温-60生理盐水混悬液，将该混悬液注射人小鼠腹腔，观察小鼠存活情况，计算其毒力。
5.2仪器和设备
5.2.1旋转蒸发器。
5.2.2圆底烧瓶：500mL、250mL、100mL、50mL。5.2.3均质器：转速1000r/min以上。5.2.4布氏漏斗。
5.2.5天平：感量0.1g。
5.2.6带塞刻度试管：15mL，具0.2mL刻度。5.2.7分液漏斗。
5.2.8冰箱：0℃~5℃和-15℃~=20℃一次性注射器（1mL）及注射器针头（8#）。5.2.9
5.3试剂和材料
除另有规定外，所有化学试剂均为分析纯或生化试剂，水为符合GB/T6682规定的一级水。5.3.1丙酮，(CH,),CO。
5.3.2无水乙醚，（CH,CH）2O。5.3.31%吐温-60生理盐水：称取1.0g吐温-60（C6H126O26），溶于生理盐水（0.85%氯化钠）中，并定容至100.0mL。
5.3.4小白鼠：体重为16g～20g的健康ICR品系雄性小鼠5.4测定步骤
5.4.1试样提取
5.4.1.1将检样置于均质杯内，加3倍量丙酮均质至少2min。如为小均质杯，可分两次操作。5.4.1.2将均质好的物质倒人布氏漏斗中抽滤，收集抽提液。5.4.1.3对残渣分别用残渣2倍量的内酮再抽滤两次，其抽提液与5.4.1.2所得抽提液合并。5.4.1.4将抽提液移入500mL的圆底烧瓶中，调整旋转蒸发器水浴温度为56℃士1℃，减压浓缩去除丙酮直至在液体表面分离出油状物。5.4.1.5将浓缩液移入分液漏斗内，以100mL～200mL乙醚和少量的水洗下粘壁部分，轻轻振荡（不能生成乳浊液），静置分层后去除水层（下层）。5.4.1.6用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醚层移人250mL或500mL的圆底烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，35℃土1℃）去除乙醚。5.4.1.7用少量乙醚将浓缩物移人50mL或100mL圆底烧瓶中，再次减压浓缩去除乙醚。5.4.1.8以1%吐温-60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10mL，充分振摇，制成均匀DSP-1%吐温-60生理盐水混悬液。此时1mL液量相当于预先测定的20g去壳贝肉的质量，以此悬浮2
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液作为试验原液进行动物实验。SN/T2131.2—2010
5.4.1.9以试验原液注射小鼠，24h内2只或3只小鼠死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射小鼠。稀释前，应先振荡使试液成均匀悬浮液，再取其部分以1%吐温-60生理盐水稀释。5.4.2小白鼠试验
5.4.2.1选择体重为16g～20g的健康ICR品系雄性小鼠6只.随机分2组：检测样品组和空白对照组（1%吐温-60生理盐水），3只/组5.4.2.2以振荡器使待测液（试验原液或其稀释液）成为均匀悬浮液。分别取1mL待测液或1%吐温-60生理盐水腹腔注射。注射时若有一滴以上提取液溢出，应将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠。记录注射完毕时间和小鼠停止呼吸时的死亡时间，未死亡的应连续观察24h。5.4.2.3观察时限24h内，在空白对照组小鼠正常的情况下，检测样品组若出现2只或3只小鼠死亡，则应按表1进行最小染毒量动物实验或最大稀释度实验。表1注射量与毒力的关系
试验液
4倍稀释液
4倍稀释液
16倍稀释液
16倍稀释液
注射量/mL
a以中肠腺为检样时,相当于含有中肠腺的去壳肉量。6结果计算和表述
检样量\/g
毒力/（MU/g）
6.1观察时限24h内，在空白对照组小鼠正常的情况下，若检测样品组无小鼠死亡或仅有1只小鼠死亡，则报告该检测样品中DSP毒力为：<0.05MU/g，6.2观察时限24h内，在空白对照组小鼠正常的情况下，若检测样品组有2只或3只小鼠死亡，则按5.4.2.3进行动物实验，并根据表1，计算检测样品中DSP毒力并报告结果，或报告该样品的毒力为大于0.05MU/g。
7健康和安全
任何DSP含量大于0.05MU/g的样品即被认为是有害的，人类食用不安全。腹泻性贝类毒素是一种有毒的混合物，为避免腹泻性贝类毒素的危害，应戴手套进行检验操作。橡胶手套、玻璃制品等用过的器材应在5%的次氯酸钠溶液中浸泡1h以上，以使毒素分解。同样，废弃的提取液等也应以上述溶液处理
所有对含有丙酮及乙醚溶液的操作应在通风橱中进行小鼠户体应按GB14925要求焚烧处理，其排放物应达到污物焚烧排放规定要求雪品伙伴网ht：
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进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法第2部分：小鼠生物法
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2010年4月第一版
印张0.5
字数7千字
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