GB 28301-2012 食品添加剂 核黄素5’-磷酸钠 GB28301-2012 标准下载解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB283012012
食品安全国家标准
食品添加剂
2012-04-25发布
核黄素5'-磷酸钠
2012-06-25实施
中华人民共和国卫生部
1范围
食品安全国家标准
食品添加剂核黄素5'-磷酸钠
GB28301—2012
本标准适用于以核黄素为原料，经磷酸化、中和、精制等步骤生产的食品添加剂核黄素5'-磷酸钠。分子式和相对分子质量
2.1分子式
CiH2oN4NaO,P: 2H,O
2相对分子质量
514.36（按2007年国际相对原子质量）3
技术要求
应符合表1的规定。
感官要求：
表1感官要求
橙黄色
结晶性粉末
理化指标：应符合表2的规定，
核黄素（CiH2oN.Og）含量，w/%比旋光度am(25C,D)[()dm2kg）
干燥减量，w/%
灼烧残渣，w/%
游离磷酸，w/%
游离核黄素，w/%
核黄素二磷酸盐，w/%
铅（Pb）/（mg/kg）
表2理化指标
73.0~79.0
+37.0~+42.0
检验方法
取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和状态
检验方法
附录A中A.3
附录A中A.4
附录A中A.5
附录A中A.6
附录A中A.7
附录A中A.8
附录A中A.9
附录A中A.9
GB5009.12
A.1一般规定
附录A
检验方法
GB28301—2012
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682一2008中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2鉴别试验
A.2.1试剂和材料
A.2.1.1盐酸溶液：取盐酸1mL，用水稀释至3mL。A.2.1.2氢氧化钠溶液：取氢氧化钠1g，加水溶解并稀释至25mL。A.2.2鉴别方法
称取约1.5mg试样，加100mL水溶解，此为试样液。试样液在透射光下显淡黄绿色，并有强烈的黄绿色荧光。取试样液25mL，加入0.5mL盐酸溶液，荧光消失：另取试样液25mL，加入0.1mL氢氧化钠溶液，荧光消失。
A.3核黄素（C1H2ON4O：）含量的测定A.3.1试剂和材料
A.3.1.1冰乙酸。
A.3.1.2乙酸钠溶液：14g/L。
A.3.2仪器和设备
分光光度计。
A.3.3分析步骤
避光操作。称取约100mg样品，精确至0.0001g，置于500mL容量瓶中，加1mL冰乙酸和75mL水。待样品溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。精确量取10mL，置于100mL容量瓶中，加入7mL乙酸钠溶液，用水稀释至刻度，摇勾。以水作空白，用光程为1cm的比色杯，在444nm波长处测定样品溶液的吸光度。核黄素的吸光系数（Em）以328计。A.3.4结果计算
核黄素含量以核黄素的质量分数wo计，数值以%表示，按公式（A.1）计算：Wo
328xmx(1-w）
式中：
50稀释倍数；
A——样品溶液的吸光度值：
m样品质量的数值，单位为克（g）；wI——实测样品干燥减量的数值，%。x100%：
.（A.1)
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于1.0%。A.4比旋光度的测定
A.4.1试剂和材料
盐酸溶液：取盐酸27.0mL，用水稀释、定容至50mLA.4.2仪器和设备
旋光仪，精度±0.01°。
A.4.3分析步骤
GB28301—2012
避光操作。称取0.75g（以无水品计）样品，精确至0.0001g，置于50mL容量瓶中，加盐酸溶液溶解并稀释至刻度，在15min内、25℃1℃条件下用旋光仪测定比旋光度A.4.4结果计算
比旋光度αm（25℃,D）数值以（)·dmkg表示，按公式（A.2）计算αm(25℃,D)=
式中：
测得的旋光角，单位为度（°)：1—旋光管的长度，单位为分米（dm)：样品溶液的浓度，单位为克每毫升（g/mL）。Pa
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于1.0%。A.5pH的测定
仪器和设备
酸度计，精度±0.01。
A.5.2分析步骤
称取1.0g样品，精确至0.0001g，置于200mL清洁干燥的烧杯中，加水100mL溶解，在20℃下用酸度计测定其pH。
A.5.3结果计算
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于1.0%。A.6干燥减量的测定
A.6.1仪器和设备
恒温真空干燥箱。
A.6.2分析步骤
称取约2g样品，精确至0.0001g，置于已干燥至恒重的称量瓶中，于100℃±1℃、0.01MPa下干燥5h，然后置于干燥器中冷却至室温，称重。A.6.3结果计算
干燥减量以质量分数Wt计，数值以%表示，按公式（A.3）计算：ml-mzx×100%
式中：
干燥前样品和称量瓶质量的数值，单位为克（g）；干燥后样品和称量瓶质量的数值，单位为克（g）：干燥前样品质量的数值，单位为克（g）。（A.3)）
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与3
算术平均值的比值不大于1.0%。A.7灼烧残渣的测定
A.7.1仪器和设备
高温炉。
A.7.2分析步骤
GB28301—2012
称取约1g样品，精确至0.001g，置于已在600℃～700℃下灼烧至恒重的中，缓缓加热至样品完全碳化。将碳化的样品冷却，用0.5mL的硫酸润湿残渣，继续加热至硫酸蒸汽逸尽，并在600℃～700℃的高温炉中灼烧至恒重。
A.7.3结果计算
灼烧残渣以质量分数W2计，数值以%表示，按公式（A.4）计算：w.=\-mx100%
式中：
m4残渣和空质量的数值，单位为克（g）ms—空质量的数值，单位为克（g)：m6—样品质量的数值，单位为克（g)。（A.4)
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于1.0%。A.8游离磷酸的测定
A.8.1试剂和材料
A.8.1.1标准磷酸盐溶液：精确称取105℃干燥2h的磷酸二氢钾0.22g，置于1000mL容量瓶中，加适量的水溶解，并稀释至刻度，摇匀，临用时再稀释5倍。A.8.1.2钼酸铵［（NH4)6Mo^O244H20]溶液：70g/L。A.8.1.3硫酸溶液：3.75mol/L
A.8.1.4酸性钼酸铵溶液：将25mL钼酸铵溶液用水稀释至200mL，然后缓缓加入25mL硫酸溶液，摇匀。A.8.1.5硫酸亚铁溶液：精确称取10.0g的硫酸亚铁，置于100mL容量瓶中，加适量的水和2mL的硫酸溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀
A.8.2仪器和设备
紫外-可见分光光度计。
A.8.3分析步骤
A.8.3.1样品溶液的制备Www.bzxZ.net
精确称取300.0mg样品（按无水品计），置于100mL容量瓶中，加适量的水溶解，并稀释至刻度，摇匀。
A.8.3.2测定
精确量取标准磷酸盐溶液和样品溶液各10.0mL，分别置于50mL的锥形瓶中，然后向各锥形瓶中加入10.0mL酸性钼酸盐溶液和5mL硫酸亚铁溶液，混匀，以10.0mL水、10.0mL酸性钼酸盐溶液和5mL硫酸亚铁溶液组成的混合液为空白，用光程为1cm的比色杯，在700nm波长处测定各锥形瓶中溶液的吸光度。样品溶液的吸光度不得大于标准溶液的吸光度。A.8.4结果计算
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于1.5%。4
A.9游离核黄素和核黄素二磷酸盐的测定A.9.1试剂和材料
A.9.1.1KH,PO4溶液：0.054mol/L。A.9.1.2甲醇：色谱纯。
A.9.1.3核黄素标准品：核黄素含量不低于99.0%（质量分数）。A.9.1.4核黄素5'-磷酸钠标准品：核黄素含量不低于74.0%（质量分数）。A.9.2仪器和设备
高效液相色谱仪，配荧光检测器（激发波长440nm；发射波长470nm）。A.9.3参考色谱条件
A.9.3.1色谱柱：C18柱，3.9mmX300mm，或其他等效的色谱柱。GB28301—2012
A.9.3.2流动相：按KH2PO4溶液：甲醇=85：15（体积比）配制，混合均匀后，用0.45μm滤膜过滤，超声脱气后备用。
A.9.3.3柱温：室温。
A.9.3.4流动相流速：2.0mL/min。A.9.3.5进样量：100μL。
A.9.4分析步骤
A.9.4.1系统适应性溶液的制备
溶解100mg核黄素5'-磷酸钠标准品于水中，使其质量浓度为2.0mg/mL，加入等体积的流动相，混匀。吸取8mL，用流动相稀释至50mL，混匀备用。A.9.4.2标准溶液的制备
精确称取60.0mg核黄素标准品于250mL容量瓶中，小心加入1mL盐酸溶解，用水稀释至刻度，混匀。用移液管吸取4mL的核黄素溶液于100mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀备用A.9.4.3样品溶液的制备
精确称取100.0mg样品于100mL容量瓶中，加50mL水溶解，用流动相稀释至刻度，混匀。用移液管吸取8mL溶液于50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀备用。A.9.4.4系统适应性要求
取适量系统适应性溶液注入色谱仪中进行色谱分析。核黄素4'-单磷酸盐和核黄素5'-单磷酸盐之间的分离度应不低于1.0：核黄素5-单磷酸盐两次重复进样的相对标准偏差不大于1.5%。核黄素5-单磷酸盐的保留时间约为20min～25min。各组分的近似相对保留时间如表A.1所示。表A.1各组分的近似相对保留时间组分
核黄素3,4'-二磷酸盐
核黄素3,5-二磷酸盐
核黄素4,5-二磷酸盐
核黄素3°-单磷酸盐
核黄素4-单磷酸盐
核黄素5°-单磷酸盐
核黄素
A.9.4.5测定
相对保留时间
分别将等体积（约100uL）的标准溶液、样品溶液和系统适应性溶液注入色谱仪中进行色谱分析，记录色谱图，分别测量标准溶液和样品溶液色谱图中的峰响应值。通过比对系统适应性溶液色谱图中色谱峰的保留时间，确定样品溶液色谱图中待测的峰。A.9.5结果计算
游离核黄素含量以游离核黄素的质量分数w3计，数值以%表示，按公式（A.5）计算P
w=625×w×手
式中：
625样品的稀释倍数；
-标准溶液中核黄素浓度的数值，单位为亳克每毫升（mg/mL）：PF样品溶液色谱图中核黄素的峰响应值；Ps标准溶液色谱图中核黄素的峰响应值：GB28301-2012
......(A.5)
核黄素二磷酸盐含量以核黄素二磷酸盐的质量分数w4计，数值以%表示，按公式（A.6）计算：P
w=625xw,×
式中：
625—样品的稀释倍数：
++.++.+++ (A.6)
-标准溶液中核黄素浓度的数值，单位为毫克每毫升（mg/mL）：Ps—标准溶液色谱图中核黄素的峰响应值；Pp样品溶液色谱图中三种核黄素二磷酸盐峰的总响应值。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值不大于1.5%。6
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