GB/T 26938-2011
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GB/T 26938-2011 牛胚胎生产技术规程
GB/T26938-2011
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ICS 65. 020. 30
中华人民共和国国家标准
GB/T26938—2011
牛胚胎生产技术规程
Standard for production technology of bovine embryo2011-09-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标化管理委员会
2012-02-01实施
本标准的附录 A 为规范性附录,附录 B、附录 C、附录 D为资料性附录。本标由中华人民共和国农业部提山。本标由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)归口。本标准起草单位：内蒙古自治区家畜改良工作站。GB/T26938—2011
本标准主要起草人：高雪峰张立，包呼挤、韩锦龙、李忠书、陈巴特尔、黄寿华.包和平、德庆、刘长海。
1范围
牛胚胎生产技术规程
GB/T 26938—2011
本标难规定了供体牛的选挥与饲养管理、超数排卵及配种、牛非手术冲胚皮胚胎质量鉴定、胚胎的拎冻与保荐等技术规程。
本标准适用于牛体内胚胎生产技术操作。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的亲款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用下本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注Ⅱ期的引用文件，其最新版本适用于本标准GB4143牛冷冻精液
GB/T5458液氨生物容器
3术语和定义
下列术语和定受适用于本标准。3. 1
供体牛donor
可用于胚胎生产的母牛：
4供体牛的选择与饲靠管理
4.1供体牛的选择条件
4.1、1品种优良，符合品种外貌特征，生产性能好。4.1.2遗传性能稳定，谱系清楚。4. 1.3年龄以14月龄至 10 岁为宜。4.1.4无流产史，产后空怀90 d以上，有两次以上正常发情周期。4，1.5体质健让，生殖器官和蔡殖机能正常，无遗传和传染性疾病。4. 2供体牛的间养普理
4.2、1保持饲养环境卫生、温湿度适宜，避免应激反症。4. 2. 2制定合理的目粮配方。
4.2.3满足清洁卫生的饮水需要。4,2、4超排前8周加强饲养管理,并适量补充维生素 A、维生素D,维生素 E和微量元素。5供体牛的超数排卵及配种
5.1超数排卵
5.1.1供体牛的同期发情处理
5. 1. 1. 1 药品
所用药品见附录A。
GB/T 26938—2011
5.1.1.2同期发情方法
5. 1. 1, 2. 1 肌肉注射 PG 法第一次注射：在任意一天。
第二次注射:在第一次注射后第 11 天。第二次注射后 24 h～96 h时观察发情。5. 1, 1. 2. 2 CII>R 法
选定任意一天政人CIDR(含孕激索阴道栓）。5. 1.2超数排卵方法
以母牛自然发情,PG 法发情或放 CIDR之日作为发情周期第 0 天,在 9 d～13 ±中的征意一天开始注射 FSH,每天早,晚各注射 1 欲,隔 12 h 连续 4 d,递减注射。效 CIDR 的供体,在第 8 次注射 FSH之后,取出 CIDR。其体方法参见附录 B。5. 1. 3重复超数排卵
重复超排间隔时间—般为45d-60 d,方法同 5.1.2。5. 1. 4供体牛发情鉴定
在第8砍注射FSH之后，对超数排卵供体牛，每瞄 6 h观察一次，每砍0,5 h 以上。以母牛稳定站立接受其他牛爬跨或直肠检查作划发情的确时间。5.2配种
5.2.1对种公牛的要求
谱系清楚，检疫合格，遗传性能稳定，生产性能优良。5. 2. 2配种所需器材
配种所需器材见附录 A。
5,2. 3人工输精操作要求
5.2.3.1母牛外阴部应经过满洗消毒。5.2.3.2输精枪应保持无菌。
5.2.3.3冷精获质量符合GB4143的规定。5.2. 4配种时间
确认发情12h后，进行第一次输精，间隔12h进行第二次输精，每次输精1支～2支，共输精2次～3次。
6牛非手术胚胎采集及胚胎质量鉴定6. 1非手术胚胎采集
6. 1. 1 非手术胚胎果巢所需主要器材非手术胚胎采集所需主要器材见附录A。6.1.2非手术胚脂采集所霉药品
非手术冲胚所需药品见附录A。
6.1. 3改进的磷酸盐缓冲液的配制改进的磷酸盐缨冲液(PBS)配方参见附录 C。6. 1. 4 非手术胚胎采集时间
供体牛超排发情后 7 d士0.5 d采集胚胎。6. 1. 5非手术胚胎采集步亲
6.1.5.1将供体牛稳定,用 2%利多卡因在荐推和第一屠椎结合处或第一尾椎和第二尾椎结合处进行尾推硬膜外麻酵，利多卡因用量宜每头5mL.6.1.5.2薛后将牛尾周定，滑除直肠便，阴部及外阴清洗消毒。6.1.5.3用书宫棒书张子宫颈，然后插人宫颈黏器将黏液描出，随后把带内芯的冲胚管慢慢播入享2
GB/T 26938—2011
宫角，当冲胚管到达子宫角弯曲处，拔出内芯5cm左右，再把冲胚管往子宫角前端推进，至冲胚管到达子宫角前端 1/3~~1/2 处。
61.5.4冲胚管先充-定气体，待确定气囊位置后，再充气至冲胚管固定为宜。6.1.5.5抽出冲胚管内芯。
6. 1.5.6连接冲胚管。
6. 1. 5,7用 50 ml. 注射器每次吸取 30 mL~40 ml 冲卵液,夹伐三通导管的输出臂,将 PBS 从输入管注人子宫角，然后夹住输人管，使回收液从输出管流到集卵杯(00 mL容量）,反复冲洗，每个子宫角用400mL~500mL的PBS浴液。
6.1.5.8把集卵杯内的回收液在温室（20℃～25）下，用集邸漏斗过滤，最后保留10mL左右液体，倒人00m培养血中，进行镜检。
6.1.5.9两幅子宫角胚胎采集完成后，将气囊空气效出，冲胚管抽至子宫体，注人青霉素、链露素等抗南素或预防子炭的药物。
6.1.5.10肌肉注射或宫内输人前列腺紊或类似物。6.2胚胎的检出与质量鉴定
6.2.F检胚
把盛有可收液的培养血放在体视显微镜下，在培养血底划线分区，逐区检查，检出胚胎放入保存液中保存。
6. 2. 2胚胎的发育期鉴定
超数排卵后的供体牛在发情后7d士0,5d时，胚胎处于以下发育期：桑堪胚(M)、致密桑椹胚(CM)、早期囊胚(EB)、囊胚(B),扩张囊胚(EXB)。做好采胚记录。供体牛胚胎采、保存记录表参见附录D。
6.2.3胚胎质量鉴定
用形态学方法进行胚胎质量鉴定,将胚胎依次分为A,B,C.D四级。A级:透明带完整无缺陷、薄原均匀，胚龄与发育阶段相一致，卵裂球轮廊清楚，透明度适中，细胞密度大，卵裂球均对，无游离细胞或很少，变性细胞比例少于10%。B级：透明带完整无缺陷、薄厚均勾，发育价段基本符合胚龄，轮廊清楚，明暗度适中或稍暗或稍浅，细胞密度较小,哪裂球较均匀，有小部分游离细胞，变性细胞比例为10%~20%。C级：透明带完整或有缺陷，轮廓不清楚，色过暗或过淡，细胞密度小，突出细胞占一多半，细胞变性率为30%-40%。
D级：透明带完整或有缺陷胚胎发育停滞,变性、卵裂球少而散，为不可用胚胎。7 胚胎的冷冻与保存
7.1胚胎的冷冻
7.1.1胚胎冷冻所需解材
胚胎待袜所需器材见附录A。
7.1.2胚胎冷冻所需落液
胚胎冷冻所需溶液见附录A。
7.1.3胚胎冷冻操作步骤
7.1.3.1胚胎的洗涤
A级，B级胚胎登陈前在保存液洗涤10次～12欢。7.1.3.2胚腊的平衡
将洗涤后的胚胎放人冷冻液中，室温下长衡15min～20 min。3
GB/T26938—2011
7.1.3.3胚胎的装管Www.bzxZ.net
将平衡后的胚胎装入0.25mL细管，装管顺序：冷冻液（约7cm）一气泡（约0.5cm）一冷冻液加胚胎（约2cm）一气泡（约0.5cm）一冷冻液（约3cm）（见图1）。乙二醇冷冻液每支细管装1枚胚胎，甘油冷冻液每支细管装1枚～5枚胚胎。气泡
7.1.3.4胚胎标记
冷冻液
冷陈薇+胚胎
冷球液
图1胚胎装管图
封口处
细管标记
在细管塞上标记胚胎信息，包括供体牛号、发育期、数量、质量以及生产日期等。如1枚1级桑胚表示为1M，其中M表示发育期，M左侧数字1表示数量，右下角数字1表示质量。乙二醇冷冻的胚胎应标记直接移植“DT”符号。同时记录在附录D中。7.1.3.5胚胎冷冻程序
胚胎→保存液洗漆10次~12次→10%甘油/保存液或1.5mol/L乙二醇/保存液→平衡10min~20min装管→冷冻仪（-5.5℃~-7.0℃）平衡5min→植冰→平衡5min-以0.3℃/min~0.6℃/min的速率下降→—32℃～-35℃→平衡10min→投人液氮。7.2胚胎的保存
7.2.1存放冷冻胚胎的液氮罐符合GB/T5458规定。7.2.2将标记后的冷冻胚胎放人液氮中保存。4
A.1同期发情,超数排卵药品
A. 1. 1 前列腺紊(PG)或其类似物。A. 1. 2合有孕激素阴道检(CIDR)。A. 1. 3促射泡素(FSH)。
A,1.4生理盐水。
A.2超数排卵及配种所需主要器材附录A
（规范性附录）
前期准备药品、器材
GB/T 26938---2011
往射器(5 mL,10 mL,20 mL),CIDR放置器、解冻杯、温度计、剪毛剪，牛用输精枪、摘精枪塑料硬外粪.输精枪塑料软外套膜、下爆箱。A,3非手术冲胚所需主要器材
冲胚管（16#～20*）冲胚管内芯、子宫颈扩张棒、宫颈黏液吸除器、三迈管、硅胶管、注射器（5mL、10mL、20mL.50mL）.集卵漏斗、100mm培养血.435mm培养血、500mL量简、高压灭菌锅、剪毛剪、镊子等。
A.4非手术冲胚所需主要药品
改进的磷酸盘缓冲液（PBS),酒精，碘酊、0、1%新猪尔灭、2%利多卡因.生理盐水、肯毒素、链酶素等抗素,预防子宫炎药物等。
A.5胚胎冷冻所需主要器材
体视显微镜、胚胎冷冻仪,液氮罐、0. 25 mL 细管、细管塞,装管器,玻璃针,细菌滤器,培养Ⅲ,记号笔等。
A.6胚胎冷冻所需落液
A. 6. 1保存滋:含 0. 4%牛血白蛋自的 PBS液。A.6.2冷冻滋:10%甘油、1. 5 mol/L乙二醇冷冻液（含0. 1 mol/I.蔗糖）)。5
GB/T 26938—2011
发情周期天数
第0天
附录B
（资料性附录）
FSII 4 d 注射时间,剂量
第9天
2, 8 mL
FS且 4 d 注射时间,剂量
第10天
第11 天
PC 0.6 mg
第12天
注1本表以F5H总剂盘228mg为例：(2.8+2.3+1.8+1.3)×2×20-328mg注 2; FSH(每瓶 400 mg)用 20 ml. 生理盐水稀释。驻3：第五次注射FSH时，同时胍注PG0.6mR，注4：AI表示人工投精，
第13天
第14天
附录C
(资料性附录）
改进的磷酸盐缓冲液(PBS)配方
改进的磷酸盐缓冲液(PBS)配方
Na HPO,(Na HPO, + 12H, O)
CaCl,(CaCl 2H,0)
MgCl (MgCl, - 6H,0)
丙萄酸钠
葡萄糖(葡萄糖· H.0)
链霉藥
注，配微说明：
(1）配制PBS溶液的所有成分应是分析纯以上的化学制剂。(2)配制PBS溶液所用水是电阻值超过 18 Mn的超纯水。GB/T 26938—2011
8. 00 g/L
0. 20 g/1.
1. 50 g/L(2, 916 g/L)
0, 10 g/1.(0. 132 E/L)
0. 20 g/L
0. 10 g/L(0. 213 3 g/L)
0. 096 g/ L.
1. 00 g/1.(1. 10 g/1.)
100 000 U
50000u
(3) 配制成的 PBS游滋需过滤灭菌、低温冷颜(4 ～5 ). 目自制现用现配，
(4）配制成的PBS游孩批pH为7.2~7.6.渗透压为270mOam～290mOsm。(5）购买的成品按说明书准有效期内使用。GB/T26938—2011
激素处理：发情日
FSH品牌(厂家)
预计发情日
实际发情日
人工授日
第一次
第二次
第三次
技术员
冷冻液：10%甘油
提筛号
注册号
注册号
附录D
（资料性附录）
供体牛压胎采集、保存记录表
国产/进口
精液编号
冷冻日期
小满编号
细管编导
1.5 mal/L.乙二醇冷冻液(直接愁植DT)冲胚时间
孕酮处理
胚胎数基
胚胎质量
解冻日期
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牛胚胎生产技术规程
Standard for production technology of bovine embryo2011-09-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标化管理委员会
2012-02-01实施
本标准的附录 A 为规范性附录,附录 B、附录 C、附录 D为资料性附录。本标由中华人民共和国农业部提山。本标由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)归口。本标准起草单位：内蒙古自治区家畜改良工作站。GB/T26938—2011
本标准主要起草人：高雪峰张立，包呼挤、韩锦龙、李忠书、陈巴特尔、黄寿华.包和平、德庆、刘长海。
1范围
牛胚胎生产技术规程
GB/T 26938—2011
本标难规定了供体牛的选挥与饲养管理、超数排卵及配种、牛非手术冲胚皮胚胎质量鉴定、胚胎的拎冻与保荐等技术规程。
本标准适用于牛体内胚胎生产技术操作。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的亲款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用下本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注Ⅱ期的引用文件，其最新版本适用于本标准GB4143牛冷冻精液
GB/T5458液氨生物容器
3术语和定义
下列术语和定受适用于本标准。3. 1
供体牛donor
可用于胚胎生产的母牛：
4供体牛的选择与饲靠管理
4.1供体牛的选择条件
4.1、1品种优良，符合品种外貌特征，生产性能好。4.1.2遗传性能稳定，谱系清楚。4. 1.3年龄以14月龄至 10 岁为宜。4.1.4无流产史，产后空怀90 d以上，有两次以上正常发情周期。4，1.5体质健让，生殖器官和蔡殖机能正常，无遗传和传染性疾病。4. 2供体牛的间养普理
4.2、1保持饲养环境卫生、温湿度适宜，避免应激反症。4. 2. 2制定合理的目粮配方。
4.2.3满足清洁卫生的饮水需要。4,2、4超排前8周加强饲养管理,并适量补充维生素 A、维生素D,维生素 E和微量元素。5供体牛的超数排卵及配种
5.1超数排卵
5.1.1供体牛的同期发情处理
5. 1. 1. 1 药品
所用药品见附录A。
GB/T 26938—2011
5.1.1.2同期发情方法
5. 1. 1, 2. 1 肌肉注射 PG 法第一次注射：在任意一天。
第二次注射:在第一次注射后第 11 天。第二次注射后 24 h～96 h时观察发情。5. 1, 1. 2. 2 CII>R 法
选定任意一天政人CIDR(含孕激索阴道栓）。5. 1.2超数排卵方法
以母牛自然发情,PG 法发情或放 CIDR之日作为发情周期第 0 天,在 9 d～13 ±中的征意一天开始注射 FSH,每天早,晚各注射 1 欲,隔 12 h 连续 4 d,递减注射。效 CIDR 的供体,在第 8 次注射 FSH之后,取出 CIDR。其体方法参见附录 B。5. 1. 3重复超数排卵
重复超排间隔时间—般为45d-60 d,方法同 5.1.2。5. 1. 4供体牛发情鉴定
在第8砍注射FSH之后，对超数排卵供体牛，每瞄 6 h观察一次，每砍0,5 h 以上。以母牛稳定站立接受其他牛爬跨或直肠检查作划发情的确时间。5.2配种
5.2.1对种公牛的要求
谱系清楚，检疫合格，遗传性能稳定，生产性能优良。5. 2. 2配种所需器材
配种所需器材见附录 A。
5,2. 3人工输精操作要求
5.2.3.1母牛外阴部应经过满洗消毒。5.2.3.2输精枪应保持无菌。
5.2.3.3冷精获质量符合GB4143的规定。5.2. 4配种时间
确认发情12h后，进行第一次输精，间隔12h进行第二次输精，每次输精1支～2支，共输精2次～3次。
6牛非手术胚胎采集及胚胎质量鉴定6. 1非手术胚胎采集
6. 1. 1 非手术胚胎果巢所需主要器材非手术胚胎采集所需主要器材见附录A。6.1.2非手术胚脂采集所霉药品
非手术冲胚所需药品见附录A。
6.1. 3改进的磷酸盐缓冲液的配制改进的磷酸盐缨冲液(PBS)配方参见附录 C。6. 1. 4 非手术胚胎采集时间
供体牛超排发情后 7 d士0.5 d采集胚胎。6. 1. 5非手术胚胎采集步亲
6.1.5.1将供体牛稳定,用 2%利多卡因在荐推和第一屠椎结合处或第一尾椎和第二尾椎结合处进行尾推硬膜外麻酵，利多卡因用量宜每头5mL.6.1.5.2薛后将牛尾周定，滑除直肠便，阴部及外阴清洗消毒。6.1.5.3用书宫棒书张子宫颈，然后插人宫颈黏器将黏液描出，随后把带内芯的冲胚管慢慢播入享2
GB/T 26938—2011
宫角，当冲胚管到达子宫角弯曲处，拔出内芯5cm左右，再把冲胚管往子宫角前端推进，至冲胚管到达子宫角前端 1/3~~1/2 处。
61.5.4冲胚管先充-定气体，待确定气囊位置后，再充气至冲胚管固定为宜。6.1.5.5抽出冲胚管内芯。
6. 1.5.6连接冲胚管。
6. 1. 5,7用 50 ml. 注射器每次吸取 30 mL~40 ml 冲卵液,夹伐三通导管的输出臂,将 PBS 从输入管注人子宫角，然后夹住输人管，使回收液从输出管流到集卵杯(00 mL容量）,反复冲洗，每个子宫角用400mL~500mL的PBS浴液。
6.1.5.8把集卵杯内的回收液在温室（20℃～25）下，用集邸漏斗过滤，最后保留10mL左右液体，倒人00m培养血中，进行镜检。
6.1.5.9两幅子宫角胚胎采集完成后，将气囊空气效出，冲胚管抽至子宫体，注人青霉素、链露素等抗南素或预防子炭的药物。
6.1.5.10肌肉注射或宫内输人前列腺紊或类似物。6.2胚胎的检出与质量鉴定
6.2.F检胚
把盛有可收液的培养血放在体视显微镜下，在培养血底划线分区，逐区检查，检出胚胎放入保存液中保存。
6. 2. 2胚胎的发育期鉴定
超数排卵后的供体牛在发情后7d士0,5d时，胚胎处于以下发育期：桑堪胚(M)、致密桑椹胚(CM)、早期囊胚(EB)、囊胚(B),扩张囊胚(EXB)。做好采胚记录。供体牛胚胎采、保存记录表参见附录D。
6.2.3胚胎质量鉴定
用形态学方法进行胚胎质量鉴定,将胚胎依次分为A,B,C.D四级。A级:透明带完整无缺陷、薄原均匀，胚龄与发育阶段相一致，卵裂球轮廊清楚，透明度适中，细胞密度大，卵裂球均对，无游离细胞或很少，变性细胞比例少于10%。B级：透明带完整无缺陷、薄厚均勾，发育价段基本符合胚龄，轮廊清楚，明暗度适中或稍暗或稍浅，细胞密度较小,哪裂球较均匀，有小部分游离细胞，变性细胞比例为10%~20%。C级：透明带完整或有缺陷，轮廓不清楚，色过暗或过淡，细胞密度小，突出细胞占一多半，细胞变性率为30%-40%。
D级：透明带完整或有缺陷胚胎发育停滞,变性、卵裂球少而散，为不可用胚胎。7 胚胎的冷冻与保存
7.1胚胎的冷冻
7.1.1胚胎冷冻所需解材
胚胎待袜所需器材见附录A。
7.1.2胚胎冷冻所需落液
胚胎冷冻所需溶液见附录A。
7.1.3胚胎冷冻操作步骤
7.1.3.1胚胎的洗涤
A级，B级胚胎登陈前在保存液洗涤10次～12欢。7.1.3.2胚腊的平衡
将洗涤后的胚胎放人冷冻液中，室温下长衡15min～20 min。3
GB/T26938—2011
7.1.3.3胚胎的装管Www.bzxZ.net
将平衡后的胚胎装入0.25mL细管，装管顺序：冷冻液（约7cm）一气泡（约0.5cm）一冷冻液加胚胎（约2cm）一气泡（约0.5cm）一冷冻液（约3cm）（见图1）。乙二醇冷冻液每支细管装1枚胚胎，甘油冷冻液每支细管装1枚～5枚胚胎。气泡
7.1.3.4胚胎标记
冷冻液
冷陈薇+胚胎
冷球液
图1胚胎装管图
封口处
细管标记
在细管塞上标记胚胎信息，包括供体牛号、发育期、数量、质量以及生产日期等。如1枚1级桑胚表示为1M，其中M表示发育期，M左侧数字1表示数量，右下角数字1表示质量。乙二醇冷冻的胚胎应标记直接移植“DT”符号。同时记录在附录D中。7.1.3.5胚胎冷冻程序
胚胎→保存液洗漆10次~12次→10%甘油/保存液或1.5mol/L乙二醇/保存液→平衡10min~20min装管→冷冻仪（-5.5℃~-7.0℃）平衡5min→植冰→平衡5min-以0.3℃/min~0.6℃/min的速率下降→—32℃～-35℃→平衡10min→投人液氮。7.2胚胎的保存
7.2.1存放冷冻胚胎的液氮罐符合GB/T5458规定。7.2.2将标记后的冷冻胚胎放人液氮中保存。4
A.1同期发情,超数排卵药品
A. 1. 1 前列腺紊(PG)或其类似物。A. 1. 2合有孕激素阴道检(CIDR)。A. 1. 3促射泡素(FSH)。
A,1.4生理盐水。
A.2超数排卵及配种所需主要器材附录A
（规范性附录）
前期准备药品、器材
GB/T 26938---2011
往射器(5 mL,10 mL,20 mL),CIDR放置器、解冻杯、温度计、剪毛剪，牛用输精枪、摘精枪塑料硬外粪.输精枪塑料软外套膜、下爆箱。A,3非手术冲胚所需主要器材
冲胚管（16#～20*）冲胚管内芯、子宫颈扩张棒、宫颈黏液吸除器、三迈管、硅胶管、注射器（5mL、10mL、20mL.50mL）.集卵漏斗、100mm培养血.435mm培养血、500mL量简、高压灭菌锅、剪毛剪、镊子等。
A.4非手术冲胚所需主要药品
改进的磷酸盘缓冲液（PBS),酒精，碘酊、0、1%新猪尔灭、2%利多卡因.生理盐水、肯毒素、链酶素等抗素,预防子宫炎药物等。
A.5胚胎冷冻所需主要器材
体视显微镜、胚胎冷冻仪,液氮罐、0. 25 mL 细管、细管塞,装管器,玻璃针,细菌滤器,培养Ⅲ,记号笔等。
A.6胚胎冷冻所需落液
A. 6. 1保存滋:含 0. 4%牛血白蛋自的 PBS液。A.6.2冷冻滋:10%甘油、1. 5 mol/L乙二醇冷冻液（含0. 1 mol/I.蔗糖）)。5
GB/T 26938—2011
发情周期天数
第0天
附录B
（资料性附录）
FSII 4 d 注射时间,剂量
第9天
2, 8 mL
FS且 4 d 注射时间,剂量
第10天
第11 天
PC 0.6 mg
第12天
注1本表以F5H总剂盘228mg为例：(2.8+2.3+1.8+1.3)×2×20-328mg注 2; FSH(每瓶 400 mg)用 20 ml. 生理盐水稀释。驻3：第五次注射FSH时，同时胍注PG0.6mR，注4：AI表示人工投精，
第13天
第14天
附录C
(资料性附录）
改进的磷酸盐缓冲液(PBS)配方
改进的磷酸盐缓冲液(PBS)配方
Na HPO,(Na HPO, + 12H, O)
CaCl,(CaCl 2H,0)
MgCl (MgCl, - 6H,0)
丙萄酸钠
葡萄糖(葡萄糖· H.0)
链霉藥
注，配微说明：
(1）配制PBS溶液的所有成分应是分析纯以上的化学制剂。(2)配制PBS溶液所用水是电阻值超过 18 Mn的超纯水。GB/T 26938—2011
8. 00 g/L
0. 20 g/1.
1. 50 g/L(2, 916 g/L)
0, 10 g/1.(0. 132 E/L)
0. 20 g/L
0. 10 g/L(0. 213 3 g/L)
0. 096 g/ L.
1. 00 g/1.(1. 10 g/1.)
100 000 U
50000u
(3) 配制成的 PBS游滋需过滤灭菌、低温冷颜(4 ～5 ). 目自制现用现配，
(4）配制成的PBS游孩批pH为7.2~7.6.渗透压为270mOam～290mOsm。(5）购买的成品按说明书准有效期内使用。GB/T26938—2011
激素处理：发情日
FSH品牌(厂家)
预计发情日
实际发情日
人工授日
第一次
第二次
第三次
技术员
冷冻液：10%甘油
提筛号
注册号
注册号
附录D
（资料性附录）
供体牛压胎采集、保存记录表
国产/进口
精液编号
冷冻日期
小满编号
细管编导
1.5 mal/L.乙二醇冷冻液(直接愁植DT)冲胚时间
孕酮处理
胚胎数基
胚胎质量
解冻日期
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