GB/T 27520-2011 暗纹东方鲀 GB/T27520-2011 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS65.150
中华人民共和国国家标准
GB/T 27520—2011
暗纹东方
Obscure puffer
2011-11-21 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2012-03-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标摊由衣业部提出。
GB/T27520—2011
本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会（SAC/TC156/SC1)归口。本标准起草单位：江苏中洋集团股份有限公司、上海海洋大学。本标准主要起草人：钱晓明、李家乐、赵金良、秦桂祥、卢玉平，郭正龙T
TTKONKAcA
1范图
暗纹东
GB/T 27520—2011
本标准给出了暗纹东方（Takifugufusciatus)的主要形态结构特征，生长与繁殖、生化遗传特性和检测方法。
本标准适用于暗纹东方棘的种质检测与將定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅往日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的候改单)适用于本文件。GB/T 18654, 1 养殖鱼类种质检验第 1 部分:检验规则GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分：抽样方法GB/T18654.3养殖鱼类种质检验第3部分：性状测定GB/T18654.12养殖鱼类种质检验第12部分：染色体组型分析3名称与分类
3:1学名
Takifugufasciatus（McClland,1844)。暗纹东方
3. 2分类地位
形目（Tetraodontiformes)，純科(Tetraodontidae），东方純属（Takifugu）。4主要形态结构特征
4. 1 外形特征
4. 1. 1 形态
体呈亚圆简形，前端钝阈，向后渐狭小，尾柄略为衡扁。胸鳍宽短，无膜鳍背鳍后位，与臀鳍相对，间形，尾鳍后缘圆形，口小，端位。体棕色，体侧下方具谈黄色带，腰面白色。体色和条纹随体长不同而有变异。背部具不明显暗揭色横纹 4 条～6 条,纹之间具白色狭纹 3条～5 条。胸糖后上方体处具1圆形黑色大斑，逆缘白色。背毓基部具1长固形黑色大斑。胸鳍基底外和里侧常各具1黑斑。胸鳍、背鳍、臀鳍黄棕色，尾鳍后端灰褐色。头部及体背、腹面均被小刺，背刺区与腹刺区在眼后部相连。吻侧、鳃孔后部体侧及尾柄光清无刺。暗纹东方的外形见国1。1
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GB/T27520—2011
可数性状
背鳍鳍式：D.15~18。
臀鳍鳍式：A.13~16。
胸鳍鳍式：P.16~18。
可量性状
图1暗纹东方外形
暗纹东方可量性状比例值见表1。表1暗纹东方纯可量性状比例值
体长/体高
内部特征
体长/头长
头长/吻长
额与齿愈合，上、下各1对板状齿。4.4.2脊椎骨
脊椎骨数目为：21块～24块。
生长与繁殖
体长与体重关系参见附录A。
5.2繁殖
性成熟年龄
头长/眼径
雌鱼性成熟年龄3龄~4龄，雄鱼性成熟年龄2龄~3龄2
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头长/眼间距
尾柄长/尾柄高
5.2.2产卵特点
GB/T27520—2011
暗纹东方为一次产即型鱼类。绝对怀卵量1.0×10°粒5.0×10°粒。长江中下游地区产即期在4月上旬至6月下旬，5月为盛期。5.2.3
卵子特征
粘性卵，淡黄色，半透明，圆球形，卵径0.9mm～1.1mm，卵膜厚，有弹性，具油球，附着在基质上。6遗传学特性
6.1.细胞遗传学特性
核型公式：10m+6sm+8st+20t染色体组型见图2。体细胞染色体数为：2n=44。www.bzxz.net
2生化遗传学特性
暗纹东方染色体组型
肌肉组织乳酸脱氢酶(LDH)同工醇电泳图谱见图3。LDH
图3暗纹东方純肌肉乳酸脱氢酶（LDH）同工酶电泳图谱及扫描图3
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GB/T 275202011
7检测方法
7. 1抽样方法
按GB/T18654.2的规定执行。
7.2年龄的监定
采用脊推骨年龄鉴定法和鳃盖骨年龄鉴定法。7.2.1背椎骨年龄整定法
7. 2. 1. 1 取材
取靠近头部的许椎骨5块左右。
7. 2. 1. 2处理与观察
处理与观察步如下：
a)将去肉脊椎骨盐于水中煮沸 5 rnin :b)
弃脊推骨附着的脂肪和杂物;
3%氢氧化钾(KOH)溶液摄泡 48 hld）水洗烘于；
用解剖镜观察锥体中央斜凹面上的轮纹，以此确定鱼的年龄。7. 2. 2
螺盖骨年脚鉴定法
7. 2. 2. 1 取材
取山新鲜鱼体。
7. 2. 2. 2
处理与观
处理与观察步骤如下：
a)用开水烫 1 次～2 次;
b）洗净、去除附着物：
c）浸于甘油中10 min～15 min.然后加热到甘油沸点，骨片即变戚乳白色；d）用解剖镜观察白色宽层与暗熏色窄层组成的年轮以此确定鱼的年龄。7.3主要形态结构特征测定
按 GB/T 18654.3的规定执行。
7. 4细胞遗传学特性的检测
按GB/T18654.12的规定执行。
7. 5生化遗传学特性的检测
7. 5.1样品的采集与制备
取活体暗纹东方纯背部肌肉1名，用0.7%生理垫水清洗，加入3%的辅酶I（NAD)溶3mL,置4
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GB/T27520—2011
勺浆器中匀浆，将勾浆液于4℃，12000r/min离心30min，取上清液，重复以上离心过程至上清液澄清。
丙烯酰胺凝胶制备
将混勾的4%聚丙烯酰胺凝胶配方溶液，立即灌注到凝胶模具中，案合反应结束后，取出凝胶，放在保湿盒内备用。4%丙烯酰胺凝胶配方溶液及其制备见附录B中的B.上。7.5.3电漾分高
电极缓冲液为TC电极缓冲，配制方法见附录B中的B.2。预电泳：将预先制备的案丙烯酰胺凝胶放在冷却板上，在50mA电流下，电泳30min。前电泳：预电泳结束后,用散量加样器在凝胶的点样糖中加人8 μL的样品，在 25 mA电流下，电泳10min，
正式电：在电压275V下连续电泳2h。7. 5. 4 染色
电泳结束后，取出案丙烯酰胺凝胶，人頭先配好并在37.℃恒温箱中保温的染色液中染色。乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的染色泌配制览附录 B 中的 B. 3。8检验规与结果判定
按GB/T18654.1的规定执行。
GB/T 27520---2011
体长与体重关系见式(A.1)t
式中;
附录A
（资料性附录）
养殖暗纹东方纯体长与体重关系W = 0, 043 6L 2. 9516 (R2
=0.945 6)
W—体体重，单位为克(g)；
一鱼体体长，单位为理米（cm）。+.................( A.. 1
B、1聚丙烯酰胺减胶
B.1. 1各种凝胶溶液配方
附录B
（规范性附录）
乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳分析溶液制备各种凝胶溶液配方见表B、1。
各种凝胶溶液配方
溶藏名称
TC制胶缓冲被
Arc. Bis 腋
25%TEMFD)
10% APS
4%聚丙炜酰胺凝胶配方
4%聚因烯酰胺凝胶配方见表B2。配制方法
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三羟甲基氮基甲烷丙烯酰胺（Arc)98g,N',V'-业中苯双丙烯酰胺（Bis)2g,用蒸增水溶解并定容到500ml
四甲基乙二般(TEMED)25 mL,加人75 mL蒸水过硫酸胺(APS)0, 1 g+摔解于 1 mL 蒸调水中表 B. 24%聚丙烯酰胺凝胶配方
落液名称
TC制胶缓冲液
Are. Bis .
25%TEMED
10SAPS
燕馏水
B.2电极缓冲液
电械缓冲被配方见表B.3。
猎额名称
TC电极织冲液
电极缓冲液配方
配制法
三羟甲基氨基甲烷(Tris)48.65g，用柠檬酸(citricacid)谢pH至B.0，蒸增水稀释至 10 L
GB/T 27520—2011
B. 3 乳酸脱氢酶(LDI)同工酶染色液B.3. 1
各种溶液配方
各种溶液配厅见表 B.4。
游液名称
1.5zi/LTrisHCI染色缓冲液(pH=9.5）10%氢化硝基四氮唑蓝（NBT)
1mol/1.乳酸钠
表 B. 4各种溶液配方
配制方法
二羟甲基蒂甲烷(Tris)181.71 R,用盐酸(HCI)调至 pH 9.5,蒸增水定容至 1 L.
氯化销基四氨唑蓝（NBT)250mR切人250mI.蒸增水乳酸(Lurlic acid)5B. 3 mL,用氢载化钠(Na(H)调至 pH 7. 0,蒸缩水容到500 mL.
B. 3. 2乳酸脱氢酶(LDII)同工酶染色液配方乳酸脱氢酶(IDH)间工酶染色被制备见表B.5.表B.5乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的染色液配方溶液名称
1. 5 mnI./L Tris-HCI 染色缨冲液(pH=J. 5)10%氯化硝基四氟吨蓝（NRT）
1 mol/L乳酸钠
燕馏水(,心)
辅酶I(NAD)
嗪甲酯硫酸盘(PMS)
溶液量
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