NY/T 2060.3-2011
基本信息
标准号： NY/T 2060.3-2011
中文名称：辣椒抗病性鉴定技术规程 第3部分:辣椒
标准类别：农业行业标准(NY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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标准简介
NY/T 2060.3-2011 辣椒抗病性鉴定技术规程 第3部分:辣椒
NY/T2060.3-2011
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标准内容
ICS65.020
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NY/T2060.3—2011
辣椒抗病性鉴定技术规程
第3部分：辣椒抗烟草花叶病毒病鉴定技术规程
Rules for evaluation of pepper for resistance to diseases-Part 3 : Rule for evaluation of pepper for resistance to tobacco mosaic virus2011-09-01发布
2011~12-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T2060《椒抗病性鉴定技术规程》分为5个部分：第！部分：辣椒抗疫病鉴定技术规程；第2部分：辣椒抗青枯病鉴定技术规程；第3部分：辣椒抗烟草花叶病病鉴定技术规程；：－第4部分：辣椒抗黄瓜花叶叫病毒病鉴定技术规程；一一第5部分：辣搬抗南方根结线必病鉴定技术规程本部分为NY/T2060的第3部分。
本部分接照（B/11.1-2009给出的规则起草。本部分中华人民出和国农业部种植业管理司提站本部分由全国蔬菜标准化技术委员会（SAC/TC.167)归LI。本部分起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本部分主要越草人：杨宇红、谢丙炎、冯兰香、杨翠荣、葬慧芝，茹振川、陈国华，NY/T2060.3—2011
１范围
辣椒抗病性鉴定技术规程
NY/T 2060. 3-2011
第3部分：辣椒抗烟草花叶病毒病鉴定技术规程本部分规定了辣椒抗烟萨花叶病毒病鉴定的术语和定义.接种体制备、室内抗性鉴定、病情调查、抗疯性评价以及鉴定记载表格。
本部分适用于各种辣椒（CapsicununnuumL.）资源对疫病抗性的室内鉴定及评价2术语和定义
NY/T1857.7—2010界定的以及下列术语和定义适用于本文件。2.1
辣椒TMV病毒病tolacconosaicvirusanpeppers由烟草花叶病毒（Tolaccomosaicvirus，TMV)引起的病株望系统花，病叶偏小、稍皱缩；病株的茎部、枝条、叶柄、果柄甚至吓脉上山现长、短不一的祸色坏死条斑，大最落叶，严重时只剩少数叶片，尤以甜椒为最。病果表面有英化斑或坏死斑，果肉变薄，提早脱落等症状的辣橄病毒病。3烟草花叶病毒接种体制备
3.1病原物分离
以常规汀液摩擦法，从受烟草花叫病毒危害的辣椒植株的典型病叶上分离病原物。分离物经血清学、寄上范闹、枯斑奇上、埋化性状及传播方式测定，电「显微镜观察病毒粒形态等方法鉴定，确认为烟草花叫病毒（Tobaccomosaicvirus)后，再进行分离物纯化和致病性测定，保存备用3.2、株系鉴定
用于抗病性鉴定接种的病毒分离物首先进行株系鉴定，鉴定方法参见A.2。3.3接种体繁殖和保存
3.3.1接种体繁殖
取少最烟草花叫病毒供试株系侵染的新鲜病叶摩擦接种在\普逗烟（Nicatiurtu.tabacuI.）”的健康叫片上，置防业溢室内（25℃~28℃）培养约2周，采收病叶。3.3.2接种体保存
一种方法是将辣椒上炳草花叶病毒的不同株条接种在不同的辣椒品种上，即IMVP〇株系，TMV-P1株系、TMV-P1.2株系和TMV-P1.2.3株系分别接种在\薪门甜椒（Cupsicamannuumcv. qicnen)\,\Cupstcurn anmutm cv. Verbeterde Glas\,\C. frulesrens cv. Tabasco\和\C. chinense Pl159236”辣椒植株工，置防虫温窄内长期保存，缺点是病毒容易被污染；另一种方法是将树草花川病不同株系的新鲜病叶制作戒冻干叶，在20以下可保存2年～3年。冻下叶的筒易制作法：将鲜病叶剪成小块，在吸水纸「均勾地铺放，-层，可照此连续铺放数层，但各展瑕水纸乏间必须用硅胶或氯化钙隔开，然后置于密封的容器平，再将容器置于4℃冰箱，头两天每更换一次十燥剂，以后每两天更换一次，直到碎病叶彻底干燥，整个制作过程应防止其他病毒的污染4室内抗性鉴定
4.1鉴定室
NY/T 2060.3--2011
苗期抗病性鉴定的鉴定室通常是可调节温度和光照的防虫日光温室，使之具备良好的发病环境。4.2鉴定设计
鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每一重复10株苗，4.3鉴定对照材料
设茄门甜椒为感病对照品种；抗病对照品种依接种的TMV株系而定：如接种TMV-PO株系HCapsicurn annuum cv. Verbeterde Glas 辣椒,TMV - Pl 株系用\C.fruterrens ty.Tabasto\辣椒TMVP1.2株系用\CapsicurnchinensePr159236\辣椒4.4鉴定材料育苗
鉴定种子在10%磷酸钠溶液中浸泡15min,清水冲洗后置于恒温培养箱中28℃芽,播种于育苗钵内。育苗基质为草炭蛭石和菜山土（2：1：1).经高温蒸汽灭菌（134℃，30min）。在日北温室甲苗，室内温度为18℃～25℃。幼苗应生长健壮、一致。4.5接种
4.5.1接种时期
幼苗在4片～5片真旧期逃行接种。4.5.2接种浓度
1g鲜病叶加50mL的0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0)匀浆，纱布过滤或3000rpm离心15 min,共滤液或上清液为接种悬浮液。4.5.3接种方法
接种前，将辣椒幼苗经黑暗处理一查夜，再在叶面上撒一薄层600）日金刚砂。常用两种接种方法：少量鉴定可采用摩擦接种然，即充分洗净的手指薦取接种悬浮液，在叶而轻度摩擦造戏微伤.每株苗接种第1片～第2片真叶，大量鉴定采用喷枪接种法，即喷枪的杯内盛接种恐浮液，喷枪咀距叶片约2cr1，空气压缩机压力为205.8kPa-~245.0kla。接种后立即用清水冲洗叶面上多余的病毒汀液。尼论采用哪种接种法，一般需接种两次，间隔d-5让。4.5.4接种后的管理
接种当天的室内温度为25℃～28℃以后门大温度为21℃～30℃，夜问温度为20℃~22℃，常规光照，正常栽培管理
5病情调查
5.1调查时间
第1次接种后约21d行
5.2病情级别划分
幼菌病情级别及其相对应的疣状描述见表1。表1烟草花叶病毒引起的辣椒病毒病病情级别的划分病情级别
5.3调查方法
无症状
疝状描述
心叶的叶脉为明脉，或接种叶比出现急性小情斑少数叶片轻花吓，或接种叶片脱落，茎部产生小环死斑点多数叶片花叶，少数叶片畸形,皱缩·或落部产生坏环处条斑多数叶片为重花叶、崎形、皱缩·植株矮化，或基茎、枝和吡脉有系统坏死斑鲍大多数吐片为重花叶、崎形、被缩，杭蛛矮化明显+或植株严重系统坏死谢查每份鉴定材料接种株发病情况，根据病症状粘述，逐份材料进行调否，记载病情级别，计算出病情指数(DI)。病情指数按式(1)计算：2
武中：
病情指数：
S-一各病情级别的代表数值；
-各病情级别的植株数；
N-一调查总植株数；
最高病情级别的代表数值
6抗病性评价
6.1抗病性评价标准
(s×n)
NY/T 2060.3-2011
依据鉴定材料3次重复的病情指数（DI)平均值确定其抗性水平，则分标准见表2。表2辣椒对烟草花叶病毒病抗性的评价标准病情招数(DT)
病情指数一0
S-0I-1G
JODI---20
203D-40
60D100
6.2鉴定有效性判别
抗性评价
免疫 Inmume(1)
高护Highlyesistant(TIR)
抗病Resistan(K)
中ModeralelyIesistanMR
感病 Sucerible(S)
高感Highlysusceptible(Hs)
感病对照材料达到其村应感病程度(DI40)时，该批次鉴定视为有效，7
鉴定记载表格
辣椒抗烟草花叶病毒病鉴定结果记载表格见表3。表3辣椒抗烟草花叶病毒病鉴定结果记载表，品种/种质
搬种口期
接种牛育期
株系类型
病情级别
接种口期
接种病原菌分离物编号
渊查口期
鉴定技术负责人（签疗）：
NY/T 2060. 3—2011
A.1学名和理化特性
A. 1. 1 学名
附录A
【资料性附录】
辣椒上烟草花叶病毒病病原和株系烟草花叶病毒，学名Tobhatco Fnosaicvirus，缩写TMVA. 1.2理化特性
病毒粒了直杆状，大小为300nm~320nm×18nm~20nm，分子量为39.4×10°，沉淀系数约为191S，等电点为pI13.5，^260/A280为1.19。核酸含量5%，单链RNA，由约6395个核自酸组成的螺旋状结构.分子量约为2×10″,G25.3：A29.8：（18.5：L:26.3。外壳蛋白分子量为1.75×101,含有158个氨基酸.其组分约为：Asp16、Thr11,Ser13、Clu17、Pro6、Gly7、Ala13、Cys1、Val13、Met2,le: 8,Leu 12,1yr 6,Phc 8、Lys 2,His 1、ArH 9,Trp 3. 病毒钝化温度 90℃以 上,稀限点 10 -6,体外保毒期为数月（室温下)或数年(0℃～一2℃)：A.2株系
A.2.1采用的鉴别寄生
鉴别寄主为5个辣椒品种或品系：Capricurtannuum cy.EarlyCalwonder，Cannuumcv.Verbctcrde Glas,Cfrutescens cv.Tabasco,C chinense PI 159236和 chinense Pl 260429A.2.2株系鉴定
病原病毒分离物接种鉴别寄主后.根据鉴别寄主病情级别计算其病情指数（DI)从而确定抗性反应，以特定的反成组合划分病毒株系（表A.1)。表 A.1辣椒上烟草花时病毒株系的鉴定婴别寄主名称/基因型
unt tv. Enfly Calwonrder/I.- 1.Capsicurnanmnu
Cannum tv.Vurlr-trduGlas>/ijjC. frulesreres tv, Tabasc/LL4( chinne PI 159236/L3L3
C heieyese PI 260429/L-L
注1:“：\为系统花叶：
注2：“为接种叶片1.有局部,但无系统花叶。T'MV P)
TMV-PI
iKAoNiiKAa-
TMV - PI. 2. 3
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辣椒抗病性鉴定技术规程
第3部分：辣椒抗烟草花叶病毒病鉴定技术规程
Rules for evaluation of pepper for resistance to diseases-Part 3 : Rule for evaluation of pepper for resistance to tobacco mosaic virus2011-09-01发布
2011~12-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T2060《椒抗病性鉴定技术规程》分为5个部分：第！部分：辣椒抗疫病鉴定技术规程；第2部分：辣椒抗青枯病鉴定技术规程；第3部分：辣椒抗烟草花叶病病鉴定技术规程；：－第4部分：辣椒抗黄瓜花叶叫病毒病鉴定技术规程；一一第5部分：辣搬抗南方根结线必病鉴定技术规程本部分为NY/T2060的第3部分。
本部分接照（B/11.1-2009给出的规则起草。本部分中华人民出和国农业部种植业管理司提站本部分由全国蔬菜标准化技术委员会（SAC/TC.167)归LI。本部分起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本部分主要越草人：杨宇红、谢丙炎、冯兰香、杨翠荣、葬慧芝，茹振川、陈国华，NY/T2060.3—2011
１范围
辣椒抗病性鉴定技术规程
NY/T 2060. 3-2011
第3部分：辣椒抗烟草花叶病毒病鉴定技术规程本部分规定了辣椒抗烟萨花叶病毒病鉴定的术语和定义.接种体制备、室内抗性鉴定、病情调查、抗疯性评价以及鉴定记载表格。
本部分适用于各种辣椒（CapsicununnuumL.）资源对疫病抗性的室内鉴定及评价2术语和定义
NY/T1857.7—2010界定的以及下列术语和定义适用于本文件。2.1
辣椒TMV病毒病tolacconosaicvirusanpeppers由烟草花叶病毒（Tolaccomosaicvirus，TMV)引起的病株望系统花，病叶偏小、稍皱缩；病株的茎部、枝条、叶柄、果柄甚至吓脉上山现长、短不一的祸色坏死条斑，大最落叶，严重时只剩少数叶片，尤以甜椒为最。病果表面有英化斑或坏死斑，果肉变薄，提早脱落等症状的辣橄病毒病。3烟草花叶病毒接种体制备
3.1病原物分离
以常规汀液摩擦法，从受烟草花叫病毒危害的辣椒植株的典型病叶上分离病原物。分离物经血清学、寄上范闹、枯斑奇上、埋化性状及传播方式测定，电「显微镜观察病毒粒形态等方法鉴定，确认为烟草花叫病毒（Tobaccomosaicvirus)后，再进行分离物纯化和致病性测定，保存备用3.2、株系鉴定
用于抗病性鉴定接种的病毒分离物首先进行株系鉴定，鉴定方法参见A.2。3.3接种体繁殖和保存
3.3.1接种体繁殖
取少最烟草花叫病毒供试株系侵染的新鲜病叶摩擦接种在\普逗烟（Nicatiurtu.tabacuI.）”的健康叫片上，置防业溢室内（25℃~28℃）培养约2周，采收病叶。3.3.2接种体保存
一种方法是将辣椒上炳草花叶病毒的不同株条接种在不同的辣椒品种上，即IMVP〇株系，TMV-P1株系、TMV-P1.2株系和TMV-P1.2.3株系分别接种在\薪门甜椒（Cupsicamannuumcv. qicnen)\,\Cupstcurn anmutm cv. Verbeterde Glas\,\C. frulesrens cv. Tabasco\和\C. chinense Pl159236”辣椒植株工，置防虫温窄内长期保存，缺点是病毒容易被污染；另一种方法是将树草花川病不同株系的新鲜病叶制作戒冻干叶，在20以下可保存2年～3年。冻下叶的筒易制作法：将鲜病叶剪成小块，在吸水纸「均勾地铺放，-层，可照此连续铺放数层，但各展瑕水纸乏间必须用硅胶或氯化钙隔开，然后置于密封的容器平，再将容器置于4℃冰箱，头两天每更换一次十燥剂，以后每两天更换一次，直到碎病叶彻底干燥，整个制作过程应防止其他病毒的污染4室内抗性鉴定
4.1鉴定室
NY/T 2060.3--2011
苗期抗病性鉴定的鉴定室通常是可调节温度和光照的防虫日光温室，使之具备良好的发病环境。4.2鉴定设计
鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每一重复10株苗，4.3鉴定对照材料
设茄门甜椒为感病对照品种；抗病对照品种依接种的TMV株系而定：如接种TMV-PO株系HCapsicurn annuum cv. Verbeterde Glas 辣椒,TMV - Pl 株系用\C.fruterrens ty.Tabasto\辣椒TMVP1.2株系用\CapsicurnchinensePr159236\辣椒4.4鉴定材料育苗
鉴定种子在10%磷酸钠溶液中浸泡15min,清水冲洗后置于恒温培养箱中28℃芽,播种于育苗钵内。育苗基质为草炭蛭石和菜山土（2：1：1).经高温蒸汽灭菌（134℃，30min）。在日北温室甲苗，室内温度为18℃～25℃。幼苗应生长健壮、一致。4.5接种
4.5.1接种时期
幼苗在4片～5片真旧期逃行接种。4.5.2接种浓度
1g鲜病叶加50mL的0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0)匀浆，纱布过滤或3000rpm离心15 min,共滤液或上清液为接种悬浮液。4.5.3接种方法
接种前，将辣椒幼苗经黑暗处理一查夜，再在叶面上撒一薄层600）日金刚砂。常用两种接种方法：少量鉴定可采用摩擦接种然，即充分洗净的手指薦取接种悬浮液，在叶而轻度摩擦造戏微伤.每株苗接种第1片～第2片真叶，大量鉴定采用喷枪接种法，即喷枪的杯内盛接种恐浮液，喷枪咀距叶片约2cr1，空气压缩机压力为205.8kPa-~245.0kla。接种后立即用清水冲洗叶面上多余的病毒汀液。尼论采用哪种接种法，一般需接种两次，间隔d-5让。4.5.4接种后的管理
接种当天的室内温度为25℃～28℃以后门大温度为21℃～30℃，夜问温度为20℃~22℃，常规光照，正常栽培管理
5病情调查
5.1调查时间
第1次接种后约21d行
5.2病情级别划分
幼菌病情级别及其相对应的疣状描述见表1。表1烟草花叶病毒引起的辣椒病毒病病情级别的划分病情级别
5.3调查方法
无症状
疝状描述
心叶的叶脉为明脉，或接种叶比出现急性小情斑少数叶片轻花吓，或接种叶片脱落，茎部产生小环死斑点多数叶片花叶，少数叶片畸形,皱缩·或落部产生坏环处条斑多数叶片为重花叶、崎形、皱缩·植株矮化，或基茎、枝和吡脉有系统坏死斑鲍大多数吐片为重花叶、崎形、被缩，杭蛛矮化明显+或植株严重系统坏死谢查每份鉴定材料接种株发病情况，根据病症状粘述，逐份材料进行调否，记载病情级别，计算出病情指数(DI)。病情指数按式(1)计算：2
武中：
病情指数：
S-一各病情级别的代表数值；
-各病情级别的植株数；
N-一调查总植株数；
最高病情级别的代表数值
6抗病性评价
6.1抗病性评价标准
(s×n)
NY/T 2060.3-2011
依据鉴定材料3次重复的病情指数（DI)平均值确定其抗性水平，则分标准见表2。表2辣椒对烟草花叶病毒病抗性的评价标准病情招数(DT)
病情指数一0
S-0I-1G
JODI---20
203D-40
60D100
6.2鉴定有效性判别
抗性评价
免疫 Inmume(1)
高护Highlyesistant(TIR)
抗病Resistan(K)
中ModeralelyIesistanMR
感病 Sucerible(S)
高感Highlysusceptible(Hs)
感病对照材料达到其村应感病程度(DI40)时，该批次鉴定视为有效，7
鉴定记载表格
辣椒抗烟草花叶病毒病鉴定结果记载表格见表3。表3辣椒抗烟草花叶病毒病鉴定结果记载表，品种/种质
搬种口期
接种牛育期
株系类型
病情级别
接种口期
接种病原菌分离物编号
渊查口期
鉴定技术负责人（签疗）：
NY/T 2060. 3—2011
A.1学名和理化特性
A. 1. 1 学名
附录A
【资料性附录】
辣椒上烟草花叶病毒病病原和株系烟草花叶病毒，学名Tobhatco Fnosaicvirus，缩写TMVA. 1.2理化特性
病毒粒了直杆状，大小为300nm~320nm×18nm~20nm，分子量为39.4×10°，沉淀系数约为191S，等电点为pI13.5，^260/A280为1.19。核酸含量5%，单链RNA，由约6395个核自酸组成的螺旋状结构.分子量约为2×10″,G25.3：A29.8：（18.5：L:26.3。外壳蛋白分子量为1.75×101,含有158个氨基酸.其组分约为：Asp16、Thr11,Ser13、Clu17、Pro6、Gly7、Ala13、Cys1、Val13、Met2,le: 8,Leu 12,1yr 6,Phc 8、Lys 2,His 1、ArH 9,Trp 3. 病毒钝化温度 90℃以 上,稀限点 10 -6,体外保毒期为数月（室温下)或数年(0℃～一2℃)：A.2株系
A.2.1采用的鉴别寄生
鉴别寄主为5个辣椒品种或品系：Capricurtannuum cy.EarlyCalwonder，Cannuumcv.Verbctcrde Glas,Cfrutescens cv.Tabasco,C chinense PI 159236和 chinense Pl 260429A.2.2株系鉴定
病原病毒分离物接种鉴别寄主后.根据鉴别寄主病情级别计算其病情指数（DI)从而确定抗性反应，以特定的反成组合划分病毒株系（表A.1)。表 A.1辣椒上烟草花时病毒株系的鉴定婴别寄主名称/基因型
unt tv. Enfly Calwonrder/I.- 1.Capsicurnanmnu
Cannum tv.Vurlr-trduGlas>/ijjC. frulesreres tv, Tabasc/LL4( chinne PI 159236/L3L3
C heieyese PI 260429/L-L
注1:“：\为系统花叶：
注2：“为接种叶片1.有局部,但无系统花叶。T'MV P)
TMV-PI
iKAoNiiKAa-
TMV - PI. 2. 3
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