GB/T 27828-2011 化学品 体外皮肤腐蚀 经皮电阻试验方法 GB/T27828-2011 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net
本标准规定了化学品体外皮肤腐蚀经皮电阻试验方法的术语和定义、试验原理、试验方法、试验数据和报告。 本标准适用于经皮电阻体外皮肤腐蚀试验。
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准与经济合作与发展组织OECD化学品测试指南No.430(2004)《体外皮肤腐蚀:经皮电阻试
验法》(英文版)技术性内容一致。
本标准做了下列结构和编辑性修改:
———增加了范围一章;
———将OECDNo.430:2004“介绍”部分并入了“引言”部分;
———删除了OECDNo.430:2004“介绍”部分中的“本指南中的定义见附录”;
———将OECDNo.430:2004“初始考虑”部分并入了“引言”部分;
———将OECDNo.430:2004“附录:定义”章并入了“术语和定义”部分;
———计量单位改成为我国法定计量单位。
本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。
本标准起草单位:中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、宁波检验检疫科学技术研究院、中国检验检疫科学研究院、中国化工经济发展中心。
本标准主要起草人:侯粉霞、马中春、慈颖、林铮、杨挺、陈小青、龙再浩、林振兴。

ICS 13.300;11.100
中华人民共和国国家标准
GB/T27828—2011
化学品
体外皮肤腐蚀
经皮电阻试验方法
Chemicals-Test metliod of in vitro skin corrosionTranscutaneous electrical resistance test(TER)2011-12-30 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2012-08-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。言
GB/T 27828-—2011
本标准与经济合作与发展组织OECD化学品测试指南No.430(2001)《体外皮肤腐蚀：经皮电阻试验法》英文版)技术性内容-致。本标准做了下列结构和编辑性修改：-增加了范围一章；
一将QECDNo.430：2004\介绍”部分并人了“引言\部分；—珊除了OECDNo.430：2001\介绍”部分中的“本指南中的定义见附录\；-将OECDNo.430：2004“初始考”部分并入了“引言”部分；-将OECDNo.430：2004\附录：定义”章并人了术语和定义”部分；-计量单位改成为我国法定计量单位。本标准出全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、宁波检验检疫科学技术研究院、中国检验检疫科学研究院、中国化工经济发展中心。本标准主要起草人候粉假、马中春、慈颗、林静、杨挺、陈小肯、龙再浩、林振兴。GB/T 27828—2011
皮肤腐蚀作用是指皮肤接触受试物后所产生的不可逆的皮肤组织损伤[见全球化学品统一分类和标签制度(Globally Harmonized Systcm of Classification and Labclling of Chemicals,GHS)中的定义。本标准则提供了一项不使用活体动物就可进行皮肤腐蚀性评价的试验方法。皮肤腐蚀试验通常需要使用实验动物[\]。在（)ECD化学品测试指南404的2002年修订版及其增补中考虑到了该试验方法可能会对实验动物造成痛苦和伤害。因此，考虑变更为体外皮肤腐蚀试验方法以避免给实验动物造成的痛苦和伤害。完全取代动物体内皮肤腐蚀试验(OECD 404)的主要困难在于还没有正式的、独立的、经确认的体外魔蚀试验方法。建立皮肤腐蚀替代试验方法的第一步应该是开展方汰确认前的预验证试验3)，然后才能进行正式的体外皮肤腐蚀试验!45!的方法确认研究[68。根据上述有关试验的结果以及其他相关的文献资料，认为人体皮肤模型试验（OECD431)和经皮电阻试验方法（即本标推）可用于评价体内皮肤腐蚀性9-11]。
有关确认试验的研究结果以及其他已发表的研究资料表明大鼠经皮电阻试验方法（TER 试验)[12-13]能可靠地识别已知的皮肤腐蚀性和非皮肤腐蚀性[5,91。本试验可用于鉴定化学物及其混合物的腐蚀性。另外，依据已有的信息（如pH值、结构-活性关系、人和/或动物资料)并通过证据权衡分析，本标准也可用于鉴定化学物及其混合物的非腐蚀性[1-2.11.14]本标准通常不能提供受试物皮肤刺激方面的信息，也不能对腐蚀性物质按照GHS规则进一步加以分类!1！。
为全面评价单次经皮染毒后受试物对皮肤的局部作用，建议采用一种有前后顾序的测试策略（见OECD 401F2和GHSC1）。该测试策略包括先进行体外皮肤腐蚀试验和体外皮肤刺激试验,然后再考虑使用活体动物进行试验。
１范围
化学品体外皮肤腐蚀
经皮电阻试验方法
GB/T 27828—2011
本标准规定了化学品体外皮联腐蚀经皮电试验方法的术语和定义、试验原理，试验方法，试验数据和报告。
本标推适用于经皮电阻体外皮肤腐蚀试验。2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。2.1
体内皮肤腐蚀skin currosion in vivo皮肤接触受试物4h后产生的不可逆损伤，即从表皮到真皮出现了可见性坏死。腐蚀性作用的特征有：溃癌、出血、血性结痴，14d后表现为皮肤萎缩褪色、局部斑秃和结痴等改变。对于可疑的皮肤损伤要进行组织病理学检查。
经皮电阻transcutaoeouselectricalresistance，TER皮肤的电阻抗性，用电阻值（k2)来表示。采用惠斯登电桥来记录皮肤对离子的通透性，是一种筒单稳定的评价皮跌屏障功能的方法3试验原理
将受试物涂敷到置于两层测试系统中的表皮表面，保持24h。在该测试系统中，层与层之间的试验用皮肤可作为一个独立的功能层。试验用皮肤来自于经安乐处死的28日龄～30日龄的大鼠，根据皮肤角质层缺失的程度及皮肤屏障功能的减低(TER低于阅值)情况来鉴定受试物是否具有腐蚀性[121。大化学物的大鼠TER测试结果表明，大多数TER值远远高于5ka(常大于10kQ)或低于5k(常小于 3 kQ),故将判定大鼠皮肤腐蚀与否的 TER临界值定为 5 kα[1a]。通常，对活体动物皮联无腐蚀性的物质，无论是否具有刺激性，测定的 TER值一般不低于5k。此外，使用不同的皮肤或不同的试验装置时，TER临界值可能发生改变，此时，需要进一步验证。本试验程序中加入了染色方法，以确认阳性结果（包括TER值接近5kQ时）。如果角质层遭到了破坏，则会增加离子的通透性，从而可用染色方法进行验证。已有证据证明，采用大鼠皮肤进行的TFR试验可测家兔体内腐蚀性试验（OECD4042)结果。需要指山的是，采用家免体内试验进行皮肤腐蚀性和皮肤刺激性的检测结果与人体皮肤斑贴试验的结果具有高度的一致性[15]。4试验方法
4.1实验动物
已有研究证明大鼠皮肤对化学物更敏感，故选用大鼠皮肤进行试验。所用大鼠的鼠龄和品系很GB/T 27828—2011
重要，以确保用于试验的大鼠皮肤处于毛发尚末开始生长前的毛囊休眠阶段。选用约22日龄的 Wistar大鼠(或其他相近品),雌雄皆可。用小剪刃仔细剪掉大鼠背部和侧腹部毛发。然后小心擦拭动物。同时把染毒部位涂抹抗生素液（如含有效浓度的链霉素，青霉素，氯素和两性霉素溶液，以抑制细菌生长），3d～4d后用抗生索溶液再清洗动物一遍。如剪毛后角质层已经恢复正常，在第二次清洗庐3d内，动物可用于试验。4.2试验用皮肤的制备
在大鼠为28日龄～30日龄（该年龄非常关键)时将其处以安乐死。取下每只动物的背侧部皮肤并小心去除多余的皮下脂肪，制成直径大约为20mm的试验用皮肤，试验用皮肤可采用适当方法败存备用，因为人量试验结果证明，贮存之后试验用皮肤的阳性对照和阴性对照的数据与新鲜皮肤获得的数据相同。
将试验用皮肤置于聚四氟艺烯（PTFE)管的一端，并使皮肤的表皮面期向PTFE管并与其接触。再用“O\形橡胶环将试验用皮肤压紧并固定在PTFE管的底部，剪去多余的皮肤。PTFE管和“O\形橡胶环的规格(见附录 A中A.1)，用凡士林将“O\形橡胶环与 PTFE管端密封。用弹簧线夹将 PTFF笋固定在一个装有硫酸镁溶被(154 mmol/L)的接收管中(见附录 B中 B. 1),并使 PTFE臂下端的试验用皮肤完全浸人硫酸镁溶液中。每只大鼠的皮肤可制备10块～15块试验用皮肤。试验开始前，分别从每只动物制备的试验用皮肤中取两片进行电阻测定以进行质量控制。这两块试验用皮肤的电阻均须大于10k2时才可使用剩余的试验用皮肤进行试验。如果低于10ka,则由该！动物的皮肤制成的试验用皮肤都不能用于试验。4.3受试物和对照物的染毒
每次试验应同时设立阳性对照和阴性对照以确保试验系统处于正常状态。应使用来自同一只动物的试验用皮肤。建议阳性对照使用 10 mol/L的盐酸、阴性对照使用蒸馏水。试验时,将150μL液态受试物均勾地涂敷于PTFE管内的试验用皮肤表面。如果受试物是固体，则应加人足够最的受试物均句地铺到试验用皮肤上以保证整个外皮的表面都被覆盖，再向固体受试物表面加150μI.去离子水并轻轻摇动臂子，混勾：为使固体受试物与皮肤达到最有效的接触，应将受试物加热至30℃使其熔解或软化，或将受试物研磨成细粉状。试验时每个试验组和对照组要使用 3个试验用皮肤。受试物应在 20 ℃～23 ℃条件下染毒皮肤24 h后，用30℃水将试验用皮肤上的受试物冲洗干净。4.4TER测定
采用低电压交流惠斯登电桥（Wheatstonebridge)测定皮肤阻抗即TER（经皮电阻）(3]，通常惠斯登电桥的工作电是 1 V～~3 V,正弦波或三角被惠斯登电桥的交流电频率为 50 Hz～1 000 Hz,测景范围至少为0.1kn～30k2。在验证试验中使用的电桥在频率100Hz1000HIz(可以串联也可以并联）时,其电感系数,电容、电阻的应能分别达到 2 000 H,2 000 μF 和 2 M 的上限。进行 TER腐蚀性测定时，测量结果以颊率为100 Hz、净联条件下的电阻值来表示。测量电阻前，应在试验用皮肤上涂敷足够量的70%酒精以降低皮肤的表面张力。几秒钟后去除酒精并加人154mmol/l.硫酸镁溶液3L使皮肤组织水化。将电桥的电极放置于试验用皮肤的两侧、测量电阻值（kQ/试验用皮肤）（见附录B中B.1）。电极的直径和位于鳄鱼嘴夹光距以下部分的电极长度见图A,1。电阻测量过程中，要将夹持内电极的鱼嘴夹罩于PTFE管项端以确保浸泡在硫酸镁溶液中的电极长度保持不变。将外电极插人到接收管底部。PTFE管上的弹性回形针和底部的距离应保持不变(见附录A中A.1),因为这个距离会影响电阻的测量值。因此，内电极与试验而皮肤之间的距离也应保持不变并且要尽量短(1mm～2mm)。2
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如果测量所得的电阻值大于20k2时，可能是出于试验用皮肤上留有变受试物所致，应进·步除去这些残留的受试物，例如可用戴手套的拇指堵住PTFE管，摇晃约10s，弃去管内的硫酸镁溶液并加入新鲜的硫酸镁溶液后再次测量电阻。试验装置的性能.人小以及所使用的试验程序可影响 TER值。判断腐蚀性的5kα临界值仅适用于在本方法要求的试验装置和试验程序条件下测量的TER值判定。如果改变试验条件或使用不同的试验装置，则可以选择不同的阅值。因此，有必要从用于验证试验的化学物质L4-5中或从与受试物类似的物质中选择一系列的参照物质逃行试验，借以对试验方法和电阻阅值进行矫正。一些推荐的合适化学物质参见附录C。
4.5染色方法
某些非腐蚀性物质可使TER值降低至5k临界值以下，因为这些物质可让离子通过角质层从而降低电阻5。例如，中性有机物和具有表面活性的化学物质（包括去污剂，乳化剂和其他表面活性剂）能去除皮肤上的脂质从而增加皮肤的离子通透性，因此，如果受试物的TER值低于或接近5k但没有肉眼间见的皮肤伤时，则对照组和染毒组都应进行染料渗透试验以确定TER值的降低是由于皮肤渗透性增高引起还是由于皮肤腐蚀引起(3.5]。由于后者常常会导致皮肤角质层损伤，当在皮肤表面加入硫酸若丹明B染料后，染料会迅速渗透皮肤角质层并使下面的皮肤组织染色，这种染料对很多种化学物质稳定，且不受后续的萃联试验影响。4.6硫酸若丹明B染料的应用与清除4.6.1测定TER后，去除硫酸镁溶液，并仔细检查皮肤有无明显损伤。如没有观察到明显损伤，则要在试验用皮肤上加人10%（质量/体积）的硫酸若丹明B(酸红52；C.I.45100;CAS号3520-42-1)水溶液150μL作用2h后，用温度至少为室温的自来水冲洗表皮约10s以去除多余或未结合的染料。4.6.2小心地从PTFE管上取下试验用皮肤并放入装有8mL去离子水的瓶中(例如20 mL的玻璃闪烁瓶），轻轻震摇5tmin以去除多余或未结合的染料。重复上述清洗步骤后，将试验用皮肤移人装有5mL30%（质量/体积)的十二烷基硫酸钠(SDS)蒸馅水溶液的瓶中，60℃孵育过夜。4.6.3孵育后，取出试验用皮肤并将其丢弃。将剩余溶液在21℃离心8min（相对离心力为175g），吸取1imI.上清液并用30%SDS溶液稀释到原体积的5倍，测氯溶液在565nm的光密度（D）。4.7计算染料含壁
可通过D值来计算每块试验用皮中硫酸若丹明B染料的含量[57（硫酸若丹明B染料在565nm处的摩尔消光系数是8.7×10°；相对分子质量为580）。用合适的标准曲线得出每块试验用皮肤的染料含量，并根据重复测定值(平行测定值)来计算每块试验用皮肤染料的平均含量。4.8结果解释
4.8.1如果阳性对照和阴性对照的TER测定值在表1要求的范围内，则可认为试验的结果是可信的。表1电阻抗范围
对照纽
10tnol/L盐酸
蒸馅水
电阻范围/kn
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4.8.2如果阳性对照和阴性对照的染料与试验用皮肤的结合量在表2要求的范国内，则m认为试验的结果是可信的。
表 2 染料量范围
对照组
10mol/L盐酸
蒸馏水
符合下列情况可认为受试物对皮肤不其有腐蚀性4.8.3
受试物的TER平均值大于5k；或者a)
b）TER平均值低于或等于5kn并且试验用皮肤未见明显的损伤|而且耳染料含量范围/（\g/试验用皮肤）40~100
试验用皮肤的染料含量均值低于10o1/L盐酸阳性对照的染料含量均值（见4.8.2中的可接受范围）。
4.8.4符合下列情况则可认为受试物对皮肤具有腐蚀性：a) 受试物的 TER 均值低于或等于 5 kQ 并且皮肤有明显的损伤;或者b）TER均值低于或等于5k，并月试验用皮肤没有明显的损伤：但是试验用皮肤的染料含量均值高于或等于 10 al/ I 盐酸阳性对照的染料含量均值(见4.8.2 中的阳性对照值)。
5试验数据和报告
5.1数据
以表格的形式列出受试物组，阳性对照组和阴性对照组的电阻值（K)和试验用皮肤染料含量均值（\宫/试验用皮肤)(单个试验数据和平行组的均值），述应列出重复测定的每个测定值和均值。5.2试验报告
试验报告应包括以下信息：
受试物和对照物：
化学名(如 IUPAC或 CAS名称)及 CAS 兮；2）
化学物质或其制剂组分的含量（质量分数）、纯度和物理性质；理化特性(如物理状态、pH值、稳定性、水溶性)；3）
试验前对受试物和对照物的处理(例如加热、研磨等)；4）
稳定性如已知就在报告中提供）。实验动物：
动物品系和性别；
动物的年龄；
动物的来源、饲养条件及饲料等；皮肤制备的细节。
试验条件，
试验系统的标准曲线；
染料含量测定标准曲线；
TER测量的详细试验步骤；
染料含量测定的详细试验步骤(需要时)；对试验程序做任何修改的描述！6
腐蚀性作用判断标准。
结果：
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以表格形式报告每只动物及每块试验用皮肤的TER值和染料结合量的数据表格；1)
观察到的任何症状。
讨论。
结论。
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附录A
（规范性附录）
聚四氛艺烯（PTFE)管尺寸示意图A. 1聚四氟乙烯(PTFE)管的尺寸(见图 A.1)。弹簧线卖
图A.1聚四氯乙烯（PTFE)管尺寸示意图单位为毫米Www.bzxZ.net
附录B
（规范性附录）
鼠皮肤TER测试器具示意图
B.1鼠皮肤 TER测试器具的示意图(见图B.1)。弹瓷线夹
内宽梭（租）
PTFE管
弥黄火
接收节
植酸镁(154 mmbl/T,1
“O\型豫胶环
磁酸镁(154mmal/L
弹资线夹
外电极（纲）
试验用皮肤表皮
试验用皮肤真皮
鼠皮肤TER测试器具示意图
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c.1表C.1给出了相应的参考物质。化学品名
1,2-二氨基丙烷
丙烯酸
2-叔丁基举酚
氢氧化钾(10%）
硫酸(10%)
辛酸(正辛酸）
4-氨基 1,2,4 三唑
丁睿酚
溴乙基莱
四鼠乙烯
异硬脂酸
4-甲基硫代苯甲醛
附录C
(资料性附录）
参考物质
参考物质
化学文摘服务社让编号
78-90-0
79-10-7
88-18-6
1310-58-3
7664-93-9
124-07-02
584-13-4
97-53-0
103-63-9
127-18-4
30399-84-9
3446-89-7
严重腐蚀
严重腐蚀
无腐蚀
无腐蚀
无腐蚀
无魔谜
无腐蚀
无魔蚀
腐蚀程度
C,2表C.1所列的大部分化学物均来自于欧洲替代方法验证中心(the Europcan Centre for theValidation of Alternative Methods,ECVAM)国际一致性研究所选用的化学物列表。选择上述物质的标准如下：
相同数堂的腐蚀性和非腐蚀性物质，涵盖大多数化学品种类，并且可通过商业途径获取的化学物质；包含了严重腐蚀性和轻微腐蚀性的化学物，以保证对腐蚀能力加以区别；所选挥的化学物除了具有腐蚀性外，可以在实验室里正常使用，没有其他严重的危害。参考文献
GB/T 27828--2011
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