NY/T 2255-2012
基本信息
标准号： NY/T 2255-2012
中文名称：香蕉穿孔线虫香蕉小种和柑橘小种检测技术规程
标准类别：农业行业标准(NY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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标准简介
NY/T 2255-2012 香蕉穿孔线虫香蕉小种和柑橘小种检测技术规程
NY/T2255-2012
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标准内容
ICS65.020
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2255—2012
香蕉穿孔线虫香蕉小种和柑橘
小种检测技术规程
Technical code for detectian of banana burrowingnematode, banana race and citrus race2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准按照GB/TI.1给出的规则起，本标推由农业部垦局提出。
本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。NY/T2255—2012
本标准起草单位：中国热带农业科学院坏境与植物保护研究所、海南人学环境与植物保护学院。本标准主要起草人：郑服丛、小宁、丁晓帆、贺春萍。1范围
NY/T 2255-2012
香蕉穿孔线虫香蕉小种和柑橘小种检测技术规程本标准规定了香蕉穿孔线虫「Radophotussimitis（Cobb，1893)Thorne，1949香燕小种和柑橘小科的检测方法。
本标准适用于植物及其繁殖材料、上糜和栽培介质中的香焦穿孔线虫香蒸小种和柑橘小种的检测。
2规范性引用文件
下列文件对十本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件.仅注日期的版本适用于不文件。凡是不注日期的引用文件：其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T1485香蕉穿孔线虫检疫检验与鉴定技术规范3原理
香熊穿孔线出是植物根系的迁移性内寄牛线虫，其转播途径有植物繁殖材料、土壤和栽培介质。该线虫有香蕉小种和柑橘小种：前者不能侵染柑橘，后者可侵染柑橘。以线虫形态学及其在树橘上的致病性和繁殖率差异，可将其鉴别为香蕉小种或柑橘小种4用具、仪器及药品
4.1用真
铲，枝剪、砍刀、塑料袋、标签、漏斗（直径10cm～14cm）、乳胶管、止水夹、浅筛盘、网筛（100月、500）、培养血、面巾纸、纱布、滞斗架、坡璃丝、线虫挑针、干燥器、打孔器（直径15cm）、化盆、计数器等。
4.2仪器
解剖镜、光学显微镜、恒温水浴箱、电热板、灭菌锅、搅拌器等。4.3药品
福尔马林、三乙醇胺、中性树胶、甘油、苯酚、乳酸、石蜡、乙醇、苦味酸、氯化钙、指甲油、硫酸链霉素、软氯酸钠等。
5现场检验及取样
现场检验及取样参见NY/T1185机应的试验方法。6线虫的分离和标本制作
根据样品类型.按NY/T1485提供的方法分离线出和制作标本，7种的鉴定
在显微镜下对线虫标木的形态特征进行观紧、测量和记述，参见NY/T1485香蕉穿孔线虫形态特征记述，鉴定到种。
NY/T 2255—2012
8小种鉴别
8.1线虫的扩繁
8.1.1胡萝卜愈伤组织的制备
选取新鲜健康的胡萝卜，75%乙醇消每处理后，去皮并切成厚度1cm左右，直径4cm左右的圆块放在灭菌的培养Ⅲ中，用封口膜口后置于25℃恒温箱中黑暗培养14d左右，待长出愈伤组织后即可接种香燕穿孔线虫。
8.1.2线虫的接种培养
将分离状得的香蕉穿孔线血置了0.5%的硫酸链霉素中消毒21,然后用灭菌水冲洗2次-~3次，每次10min。在胡萝下愈价组织上挖取1个三角形的小礼·用移液管吸取已消毒的线虫，接种到小孔中，封口膜封口后在25℃下黑暗培养45d.获得大量纯化的线虫备凡。8.2在柑橘上的致病性测定
8.2.1柑橘苗的准备及接种
用白来水冲洗柑韬苗（株高20cm~30cm）根部，冲洗液过100目和500目的纽合筛网，收集500目上的滤渣，在解剖镜和显微镜下镜检，确认柑橘根际中没有线虫。再将柑橘的根部放在0.5%次氯酸钠巾消毒30min，用自米水冲洗3淡后，种到直径23cm的花盆（每盆种1谜柑苗：花盆中的裁培介质为沙上：炭土：有机七一1：12（121℃，火菌2h）。柑橘齿种植14d后.接种待测线虫，每200条，至少接种30盆，并设木接种线虫的植株为空日对照。接种时先用玻璃棒在苗基部周围插3个~5个小孔，注人线虫慧浮液，介质覆盖。接种后常规管理。8.2.2线虫致病性疫繁殖率检测
8.2.2.1接种150)d后.取出杜橘苗，观察柑橘根部是否有变红、变黑、爆裂、腐烂、空腔种隧道等症状，并记录和抑照。
8.2.2.2用水冲洗根系，冲洗液过100目和500目的组合筛网，收集500F1筛上的截留物于烧杯，定容之后，用移液管吸最1ⅢL于培养川中，在解剖镜下进行线虫计数，重复3次求山平均值，并计算出容液中的线虫数量。
8.2.2.3十壤或载培介质中的线虫用浅盘贝曼漏斗法分离，按8.2.2.2统计线虫数量。8.2.2.4将待分离的柑播根切成0.5cm左右的小段，放到玻璃瓶(5cm×13em)小，加入水浸没根，在25℃的培养箱黑暗培养7d.然后将根组织置于搅拌器中，打碎根，将悬浮液过100目和500目的组合筛网：按8.2.2.2统计线血数量
8.2.2.5每盆线虫总量按式(1)计算，并将调查结果旗人表A.1。N=N:+N+N
式中：
N-每盆线虫总量,单位为条www.bzxz.net
N1-—-根表冲洗液线出数量，单位为条，N。—-十壤或裁培介质中线虫数量，单位为条；N，一-根内线虫数量，单位为条。8.2.2.6线虫繁殖率按式(2)计算，并将结果填人表A.1.Rf - N/N, +
式中：
R厂——线虫繁殖率：
N一-每盆线虫总量,单位为条；
N。一一接种线虫数量,单位为条。2
9结果判定
NY/T 2255-2012
以摊、雄虫的形态特征为依据，符合NY/T1485中记述的香蕉穿孔线虫形态特征，且按8.2.2试验结果出现明显症状（根部变红、变熙、爆裂、腐烂、空腔和隧道）和R广>1，则可确定为香燕穿孔线虫柑橘小种；如果不出现明显症状，且Rf≤]，可确定为香蕉穿孔线虫香焦小种。NY/T2255—2012
附录A
（资料性附录）
香蒸穿孔线虫致病性调查记录表香焦穿孔线虫致病性调查记录见表A.1。表A.1香蕉穿孔线虫致病性调查记录表试验单位
负责人
谢查日期
植株编号
症状特征
地址及邮编
联系电话
试验地点
线山数量·条
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中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2255—2012
香蕉穿孔线虫香蕉小种和柑橘
小种检测技术规程
Technical code for detectian of banana burrowingnematode, banana race and citrus race2012-12-07发布
2013-03-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准按照GB/TI.1给出的规则起，本标推由农业部垦局提出。
本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。NY/T2255—2012
本标准起草单位：中国热带农业科学院坏境与植物保护研究所、海南人学环境与植物保护学院。本标准主要起草人：郑服丛、小宁、丁晓帆、贺春萍。1范围
NY/T 2255-2012
香蕉穿孔线虫香蕉小种和柑橘小种检测技术规程本标准规定了香蕉穿孔线虫「Radophotussimitis（Cobb，1893)Thorne，1949香燕小种和柑橘小科的检测方法。
本标准适用于植物及其繁殖材料、上糜和栽培介质中的香焦穿孔线虫香蒸小种和柑橘小种的检测。
2规范性引用文件
下列文件对十本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件.仅注日期的版本适用于不文件。凡是不注日期的引用文件：其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T1485香蕉穿孔线虫检疫检验与鉴定技术规范3原理
香熊穿孔线出是植物根系的迁移性内寄牛线虫，其转播途径有植物繁殖材料、土壤和栽培介质。该线虫有香蕉小种和柑橘小种：前者不能侵染柑橘，后者可侵染柑橘。以线虫形态学及其在树橘上的致病性和繁殖率差异，可将其鉴别为香蕉小种或柑橘小种4用具、仪器及药品
4.1用真
铲，枝剪、砍刀、塑料袋、标签、漏斗（直径10cm～14cm）、乳胶管、止水夹、浅筛盘、网筛（100月、500）、培养血、面巾纸、纱布、滞斗架、坡璃丝、线虫挑针、干燥器、打孔器（直径15cm）、化盆、计数器等。
4.2仪器
解剖镜、光学显微镜、恒温水浴箱、电热板、灭菌锅、搅拌器等。4.3药品
福尔马林、三乙醇胺、中性树胶、甘油、苯酚、乳酸、石蜡、乙醇、苦味酸、氯化钙、指甲油、硫酸链霉素、软氯酸钠等。
5现场检验及取样
现场检验及取样参见NY/T1185机应的试验方法。6线虫的分离和标本制作
根据样品类型.按NY/T1485提供的方法分离线出和制作标本，7种的鉴定
在显微镜下对线虫标木的形态特征进行观紧、测量和记述，参见NY/T1485香蕉穿孔线虫形态特征记述，鉴定到种。
NY/T 2255—2012
8小种鉴别
8.1线虫的扩繁
8.1.1胡萝卜愈伤组织的制备
选取新鲜健康的胡萝卜，75%乙醇消每处理后，去皮并切成厚度1cm左右，直径4cm左右的圆块放在灭菌的培养Ⅲ中，用封口膜口后置于25℃恒温箱中黑暗培养14d左右，待长出愈伤组织后即可接种香燕穿孔线虫。
8.1.2线虫的接种培养
将分离状得的香蕉穿孔线血置了0.5%的硫酸链霉素中消毒21,然后用灭菌水冲洗2次-~3次，每次10min。在胡萝下愈价组织上挖取1个三角形的小礼·用移液管吸取已消毒的线虫，接种到小孔中，封口膜封口后在25℃下黑暗培养45d.获得大量纯化的线虫备凡。8.2在柑橘上的致病性测定
8.2.1柑橘苗的准备及接种
用白来水冲洗柑韬苗（株高20cm~30cm）根部，冲洗液过100目和500目的纽合筛网，收集500目上的滤渣，在解剖镜和显微镜下镜检，确认柑橘根际中没有线虫。再将柑橘的根部放在0.5%次氯酸钠巾消毒30min，用自米水冲洗3淡后，种到直径23cm的花盆（每盆种1谜柑苗：花盆中的裁培介质为沙上：炭土：有机七一1：12（121℃，火菌2h）。柑橘齿种植14d后.接种待测线虫，每200条，至少接种30盆，并设木接种线虫的植株为空日对照。接种时先用玻璃棒在苗基部周围插3个~5个小孔，注人线虫慧浮液，介质覆盖。接种后常规管理。8.2.2线虫致病性疫繁殖率检测
8.2.2.1接种150)d后.取出杜橘苗，观察柑橘根部是否有变红、变黑、爆裂、腐烂、空腔种隧道等症状，并记录和抑照。
8.2.2.2用水冲洗根系，冲洗液过100目和500目的组合筛网，收集500F1筛上的截留物于烧杯，定容之后，用移液管吸最1ⅢL于培养川中，在解剖镜下进行线虫计数，重复3次求山平均值，并计算出容液中的线虫数量。
8.2.2.3十壤或载培介质中的线虫用浅盘贝曼漏斗法分离，按8.2.2.2统计线虫数量。8.2.2.4将待分离的柑播根切成0.5cm左右的小段，放到玻璃瓶(5cm×13em)小，加入水浸没根，在25℃的培养箱黑暗培养7d.然后将根组织置于搅拌器中，打碎根，将悬浮液过100目和500目的组合筛网：按8.2.2.2统计线血数量
8.2.2.5每盆线虫总量按式(1)计算，并将调查结果旗人表A.1。N=N:+N+N
式中：
N-每盆线虫总量,单位为条www.bzxz.net
N1-—-根表冲洗液线出数量，单位为条，N。—-十壤或裁培介质中线虫数量，单位为条；N，一-根内线虫数量，单位为条。8.2.2.6线虫繁殖率按式(2)计算，并将结果填人表A.1.Rf - N/N, +
式中：
R厂——线虫繁殖率：
N一-每盆线虫总量,单位为条；
N。一一接种线虫数量,单位为条。2
9结果判定
NY/T 2255-2012
以摊、雄虫的形态特征为依据，符合NY/T1485中记述的香蕉穿孔线虫形态特征，且按8.2.2试验结果出现明显症状（根部变红、变熙、爆裂、腐烂、空腔和隧道）和R广>1，则可确定为香燕穿孔线虫柑橘小种；如果不出现明显症状，且Rf≤]，可确定为香蕉穿孔线虫香焦小种。NY/T2255—2012
附录A
（资料性附录）
香蒸穿孔线虫致病性调查记录表香焦穿孔线虫致病性调查记录见表A.1。表A.1香蕉穿孔线虫致病性调查记录表试验单位
负责人
谢查日期
植株编号
症状特征
地址及邮编
联系电话
试验地点
线山数量·条
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