GB 8270-2014 食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷 GB8270-2014 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB 8270—2014
食品安全国家标准
食品添加剂
2015-01-28发布
甜菊糖苷
2015-07-28实施
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
本标准代替GB8270—1999《食品添加剂甜菊糖武》。
本标准与GB8270—1999相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品添加剂修改了标准结构；
修改了结构式、分子式和相对分子质量等相关内容；取消了理化指标中的等级要求，统一指标；修改了鉴别试验；
甜菊糖苷”；
修改了理化指标中甜菊糖苷含量、灼烧残渣和干燥减量指标；删除了理化指标中甜度、比旋光度、比吸光度和重金属指标；增加了铅、甲醇和乙醇指标。
GB8270—2014
1范围
食品安全国家标准
食品添加剂
甜菊糖苷
GB8270—2014
本标准适用于以甜叶菊（SteviaRebaudianaBertoni）干叶为原料，经提取、精制而得的食品添加剂甜菊糖苷。主要糖苷为甜菊苷和瑞鲍迪苷A，其他已知糖苷包括瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷及甜菊双糖苷。2分子式、结构式和相对分子质量主要糖苷的分子式
甜菊苷：C3sH6oOis
瑞鲍迪苷A：C4H.O23
9种糖苷的结构式
CI. COO-R
9种糖苷的压合物名称、R位取代基和R2位取代基见表1。表19种糖苷的压合物名称、R，位取代基和R2位取代基化合物名称
中文名称
甜菊苷
瑞鲍迪苷A
瑞鲍迪苷B
瑞鲍迪C
瑞鲍迪苷D
瑞鲍迪苷F
英文名称
stevioside
rebaudioside A
rebaudiosideB
rebaudiosideC
rebaudiosideD
rebaudiosideF
R位取代基
β-Glc
β-Gle
β-Glc
β-Glc-β-Gle(2→1)
β-Glc
R，位取代基
β-Glc-β-Glc(2--1)
β-Glc-β-Glc(2-→1)
B-Gle(3→1)
β-Glc-β-Glc(2-+1)
B-Glc(3→+1)
β-Glc-α-Rha(2-1)
βB-Glec(3-→1)
β-Glc-β-Glc(21)
β-Glc(3→1)
β-Glc-β-Xyl(2-1)
β-Glc(3-+1)
中文名称
杜克苷A
甜茶苷
甜菊双糖苷
化合物名称
主要糖苷的相对分子质量
英文名称
dulcosideA
rubusoside
steviolbioside
表1（续）
甜菊苷：804.88（按2007年国际相对原子质量）瑞鲍迪苷A：967.03（按2007年国际相对原子质量）技术要求
感官要求
应符合表2的规定。
理化指标
应符合表3的规定。
甜菊糖苷含量（以干基计，w)/%灼烧残渣（）/%
干燥减量（w)/%
铅（Pb)/（mg/kg）
总碑（以As计）/(mg/kg）
甲醇/（mg/kg）
乙醇/（mg/kg）
白色至浅黄色
粉末或晶体
干燥温度和时间分别为105℃±2℃和2h。Ri位取代基
β-Gle
β-GlebZxz.net
感官要求
GB8270—2014
R2位取代基
β-Glc-α-Rha(2-+1)
β-Gle
β-Gle-β-Glc(2-→1)
检验方法
取适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下观察其色泽和状态
理化指标
检验方法
附录A中A.4
GB5009.3直接干燥法
GB5009.12
GB5009.11
注：商品化的甜菊糖苷产品应以符合本标准的甜菊糖苷为原料，可添加用于标准化目的的淀粉等食品原料，2
A.1一般规定
附录A
检验方法
GB8270—2014
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601,GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.2鉴别试验
甜菊和瑞鲍迪苷A试验
在甜菊糖苷含量试验中，试样溶液的液相色谱图中甜菊苷和瑞鲍迪苷A两个主峰应与混合标准溶液的色谱图相对应。
试样溶液的pH
称取1g试样，溶于100mL水中，用酸度计测定试样溶液的pH在4.5~7.0A.3甜菊糖苷含量的测定
A.3.1方法一
试剂和材料
A.3.1.1.1
A.3.1.1.2
A.3.1.1.3
A.3.1.1.4
A.3.1.1.5
乙睛：色谱纯。
磷酸二氢钠：色谱纯。
磷酸：色谱纯。
水：GB/T6682—2008中规定的一级水。乙睛水溶液：乙睛和水的体积比为30：70。磷酸钠缓冲液（pH2.6）：称取1.20g磷酸二氢钠（NaH,PO,），溶于800mL水中，用磷酸调A.3.1.1.6
节pH至2.6。
A.3.1.1.7甜菊苷标准品：甜菊苷含量（质量分数，以于基计）≥99.0%。A.3.1.1.8
瑞鲍迪者A标准品：瑞鲍迪首A含量（质量分数，以于基计）≥99.0%A.3.1.1.9
其他7种糖标准品：瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪昔C、瑞鲍迪昔D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷。
仪器和设备
高效液相色谱仪：配备紫外检测器，或其他等效的检测器3
A.3.1.3参考色谱条件
GB8270—2014
A.3.1.3.1色谱柱：Ci反相色谱柱，250mmX4.6mm，粒径5um；或其他等效的色谱柱。A.3.1.3.2
流动相：乙晴：磷酸钠缓冲液=32：68A.3.1.3.3
流动相流速：1.0mL/min。
4检测波长：210nm。
A.3.1.3.4
5进样量：2μL~10μL。
A.3.1.3.5
A.3.1.3.6
柱温：40℃。
A.3.1.4分析步骤
A.3.1.4.1混合标准品溶液的制备分别称取适量甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷标准品，置于同一个容量瓶中，用乙水溶液完全溶解后定容，得到混合标准品溶液。混合标准品溶液用于确定9种糖苷的相对保留时间A.3.1.4.2标准溶液的制备
分别称取0.05g甜菊昔标准品和瑞鲍迪昔A标准品，精确至0.001g，分别置于50mL的容量瓶中，用乙睛水溶液溶解后稀释至刻度，得到甜菊苷标准溶液和瑞鲍迪苷A标准溶液。A.3.1.4.3试样溶液的制备
称取0.05g~0.1g试样，精确至0.001g，置于50mL的容量瓶中，用乙睛水溶液溶解后稀释至刻度，得到试样溶液。
A.3.1.5测定
在A.3.1.3参考色谱条件下，分别对混合标准品溶液、标准溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图相比较，以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷的峰面积及标准溶液色谱图中甜菊苷和瑞鲍迪苷A的峰面积。A.3.1.6结果计算
瑞鲍迪苷A含量（以干基计)的质量分数w.按式（A.1)计算：=mkA.
式中：
瑞鲍迪苷A标准溶液中瑞鲍迪苷A的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；试样溶液中试样的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；试样溶液色谱图中瑞鲍迪苷A的峰面积值：瑞鲍迪苷A标准溶液色谱图中瑞鲍迪苷A的峰面积值其他8种糖苷含量(以干基计)的质量分数w，按式（A.2)计算：w
式中：
.(A.1)
.（A.2)
s、b、c、d、f、da、ru、sb,分别对应甜菊苷、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、4
杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷：甜菊昔标准溶液中甜菊昔的质量（以干基计），单位为毫克（mg)；ms
试样溶液中试样的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；GB8270—2014
i组分与甜菊苷的式量比值：1.00（甜菊苷）、1.00（瑞鲍迪苷B）、1.18（瑞鲍迪苷C)、1.40（瑞鲍迪苷D）、1.16（瑞鲍迪苷F）、0.98（杜克苷A）、0.80（甜茶苷）、0.80（甜菊双糖苷）；A
试样溶液色谱图中组分的峰面积值；甜菊苷标准溶液色谱图中甜菊苷的峰面积值。As
由式（A.1)和式（A.2)计算得到9种组分的含量waW、w、、wa、wi、Wa、wru和Ws，取各组分含量之和即为试样中甜菊糖苷含量。A.3.2
方法二
试剂和材料
?乙睛：色谱纯。
A.3.2.1.1
A.3.2.1.2
磷酸二氢钠：色谱纯
磷酸：色谱纯。
A.3.2.1.3
A.3.2.1.4水：GB/T6682—2008中规定的一级水。乙睛水溶液：乙和水的体积比为30：70。A.3.2.1.5
磷酸钠缓冲液（pH2.6）：称取1.20g磷酸二氢钠（NaH,PO4），溶于800mL水中，用磷酸调A.3.2.1.6
节pH至2.6.用水稀释至1000mLz。A.3.2.1.7甜菊苷标准品：甜菊苷含量（质量分数，以干基计）≥99.0%A.3.2.1.8其他8种糖苷标准品：瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖昔。
仪器和设备
同A3.1.2。
参考色谱条件
同A.3.1.3。
A.3.2.4分析步骤
A.3.2.4.1混合标准品溶液的制备分别称取适量甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪D、瑞鲍迪昔F、杜克昔A、甜茶苷、甜菊双糖苷标准品，置于同一个容量瓶中，用乙睛水溶液完全溶解后定容，得到混合标准品溶液混合标准品溶液用于确定9种糖苷的相对保留时间。A.3.2.4.2标准溶液的制备
称取0.05g甜菊昔标准品，精确至0.001g，置于50mL的容量瓶中，用乙水溶液溶解后稀释至刻度，得到甜菊苷标准溶液。
A.3.2.4.3试样溶液的制备
称取0.05g0.1g试样，精确至0.001g，置于50mL的容量瓶中，用乙睛水溶液溶解后稀释至刻度，得到试样溶液。
A.3.2.5测定
GB8270—2014
在A.3.2.3参考色谱条件下，分别对混合标准品溶液、标准溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图相比较，以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷的峰面积及标准溶液色谱图中甜菊苷的峰面积A.3.2.6结果计算
9种糖苷含量（以干基计）的质量分数w按式（A.3)计算：ms
式中：
.（A.3)
s、a、b、c、d、f、da、ru、sb，分别对应甜菊昔、瑞鲍迪昔A、瑞鲍迪昔B、瑞鲍迪昔C、瑞鲍迪昔D、瑞鲍迪昔F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷；甜菊苷标准溶液中甜菊苷的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；ms
试样溶液中试样的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；f
组分与甜菊昔的式量比值：1.00（甜菊苷）、1.20（瑞鲍迪昔A）、1.00（瑞鲍迪昔B）、1.18（瑞鲍迪昔C）、1.40（瑞鲍迪昔D）、1.16（瑞鲍迪昔F）、0.98（杜克昔A）、0.80（甜茶昔）、0.80（甜菊双糖苷）；
A，试样溶液色谱图中i组分的峰面积值；A：—甜菊苷标准溶液色谱图中甜菊苷的峰面积值。由式（A.3)计算得到9种组分的含量ws、wa、wh、w。、wa、wr、wa、w和wa取各组分含量之和即为试样中甜菊糖苷含量。
甲醇和乙醇的测定
试剂和材料
A.4.1.1甲醇：色谱纯。
乙醇：色谱纯。
水：一级水。
仪器和设备
气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID)和顶空进样器。A.4.3
参考色谱条件
色谱柱：键合聚乙二醇熔融石英毛细管柱（柱长为30m，柱内径为0.25mm，膜厚度为A.4.3.1
0.25pm），或其他等效的色谱柱。A.4.3.2载气：氮气（纯度≥99.99%）。A.4.3.3载气流量：5.0mL/min。A.4.3.4柱温：40℃保持5min，以10℃/min升温至120℃，保持2min，最后以16℃/min升温至200℃.保持5min。
A.4.3.5进样口温度：200℃。
检测器温度：250℃。
进样体积：1mL。
分流比：1：50。
参考顶空条件
顶空瓶温度：80℃。
顶空瓶平衡时间：30min。
分析步骤
空白溶液的制备
移取2mL水，置于顶空瓶中.迅速压紧瓶盖，备用标准溶液的制备
A.4.5.2.1甲醇标准溶液的制备
GB8270—2014
称取0.1g甲醇.精确至0.001g，用水稀释后转移至一个1000mL的容量瓶中，加水至刻度.摇匀，即得100mg/L的甲醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为50mg/L、20mg/L、10mg/L、5mg/L和2.5mg/L的甲醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2mL，分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。A.4.5.2.2乙醇标准溶液的制备
称取0.1g乙醇，精确至0.001g.用水稀释后转移至一个100mL的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得1000mg/L的乙醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为750mg/L、500mg/L、200mg/L、100mg/L和50mg/L的乙醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2mL，分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
A.4.5.3试样溶液的制备
称取1.0g试样，精确至0.001g，用水溶解后转移至一个10mL的容量瓶中，在室温下超声处理约3min，加水稀释至刻度，摇匀。移取该溶液2mL置于空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。A.4.6测定
在参考操作条件（A.4.3和A.4.4）下，分别对空白溶液、标准系列溶液和试样溶液进行测定，记录甲醇或乙醇的峰面积值。以标准系列溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值为Y轴，以对应溶剂浓度（mg/L）为X轴，绘制标准曲线，得到甲醇标准曲线或乙醇标准曲线。根据试样溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值，从标准曲线求得试样溶液中甲醇或乙醇的浓度（mg/L）。A.4.7结果计算
甲醇或乙醇含量ze以毫克每千克（mg/kg）计，按式（A，4）计算：exV
式中：
从标准曲线求得的试样溶液中甲醇或乙醇的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V—试样溶液的体积，单位为毫升（mL）；m——试样的质量，单位为克（g）。....(A.4)
附录B
混合标准品溶液的参考色谱图
混合标准品溶液的参考色谱图见图B.1。1. 12
6. 0c-2 -
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GB82702014
注：所测混合标准品溶液中，瑞鲍迪苷F的浓度约为0.1mg/mL，其余组分的浓度为0.5mg/mL图B.1
混合标准品溶液参考色谱示意图8
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