NY/T 2547-2014
基本信息
标准号： NY/T 2547-2014
中文名称：生鲜乳中黄曲霉毒素M1筛查技术规程
标准类别：农业行业标准(NY)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准简介
NY/T 2547-2014 生鲜乳中黄曲霉毒素M1筛查技术规程
NY/T2547-2014
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标准内容
1CS67.100
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2547-2014
生鲜乳中黄曲霉毒素M筛查技术规程Technical regulation of on-site screening aflatoxin M, in fresh milk2014-03-24发布
2014-06-01实施
中华人民共和国农业部bzxz.net
本标准按照GB/T1.1·2009给出的规则起草本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。NY/T2547—2014
本标雅起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、中国农业科学院北京密牧兽医研究所、农业部油料及制品质量监臀检验测试中心。本标准主要起人：李培武、郑楠、张奇、丁小霞、唐晓情、张文、周海燕，李松励、下督、姜梭、张兆城T
1范围
生鲜乳中黄曲霉毒素M，筛查技术规程本标准规定了生鲜乳中黄曲霉毒素M，筛查技术规程本标准适用于牛鲜乳中黄曲霉毒素M的时间分辨免疫层析法的筛查。2规范性引用文件
NY/T 2547—2014
下列文件对丁本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引用文件，仪注日期的版本适州下本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于木文件（B/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试剂
除非另有规定·仅使用分析纯试剂，3.1水.按照GB/T6682中的要求，二级。3.2伊醇(CH,OI)。
3.3标记黄曲霉毒素M抗体溶液：黄曲毒素M，抗体纯度80%以上与其他黄曲霉毒素交叉反应率小十10%抗体亲和力常数不低于1.00×10%1./mo1。3.41000ng/ml黄曲获毒素Ml标准溶液。3.5100ng/l.黄曲霉毒素M，标准储备液：准确吸取黄曲等毒素标准溶液（3.4)l.0ml十10mL容量瓶中，甲醇定容，4℃保存有效期：90d)，备用。替告：
由于黄曲霉毒素毒性很强，试验人员应注意自我保护。操作时应避免吸人、接触黄山霉再素标准溶液，配制标准溶液应在通风樹内进行，工作时成戴眼镜、穿工作服、裁医用乳胶手套。凡接触黄曲每毒素的容器.需浸泡于10%次氯酸钠溶液中12h-然后清洗。间时，为了降低接触黄曲罪毒素的机合，本标准鼓动直接购买并使用黄拍导毒素的有证标准诺备液。
4仪器设备与材料
4.1时间分辨荧光检测仪：激发波长为（3651-5）m.检测波长为（61515）1m：4.2黄曲霖毒素Mi免疫层析装置（图1)：固定有AFM,-BSA偶联物，检测灵敏度不低于-0.1ng/kg，用于样品中黄曲霉毒素 M与铕标记抗体预反应后再与黄曲霉毒索一BSA 偶联物反应的载体;不得出现假阴性，假相性率低于15岁，NY/T2547—2014
说明：
（)正规阁
■—底板
——水;
3—硝酸纤维素膜：
(h)测视陶
4—样品：
7—质控线：
G-—将测线。
图1黄曲霉毒素M，免疫层析装置示意图4.2.1AFM,BSA偶联率为(1+5)~(I20)(BSA：AFM)。4.2.2样品垫：玻璃纤维、聚酯纤维或纸质薄片等。4.2.3硝酸纤维素膜：4cm毛细时间不小于75s。4.2.4吸水纸
4.2.5底板。
4.2.6连接胶带。
4.3恒温装胃：（37.0=2.0)℃，4.4漩涡混合器。
4.5微量移液器：20uL200μL，100ul.~1000l.4.6分析天平：感量为0.01g。
4.7水浴锅。
4.810ml移液管.
4.950ml.烧杯，
5抽样
5.1抽样人员应熟知抽样程序和方法，5.2抽样人员应准备相应的工具和包装容器。抽样工具和包装容器应清洁、十燥，不会对样品造成污染。
5.3样品应从足够量的同批产品中随机拖取。若用人桶或奶罐髂装的，应充分混匀后再采样。2
NY/T 2547—2014
5.4通常抽样量不低丁300mL.分样成3份，其中一份做检验样，份做复检样，--份做备用样品.分别盛放3个容器中。
6黄曲霉毒素筛查
6.1在室温条件下，取150.0ul.销标记的黄曲需毒素M:抗体溶液（3.3)于1.5ml.样品瓶，备用。6.2川分析天平(4.6)准确称取10.0k样品至50ml.烧杯中(精确至0.1g).混句备用6.3取300.0.样品（6.2），垂直滴加厂样品瓶（6.1)内.漩混合5s。取出黄曲蒋毒素M免疫层析装置（1.2），按箭头方向插人加样后的样品瓶中，将样品瓶置十恒湿装置中，37℃反应6min6.4取出黄曲霉毒素M，免胺层析装置（4.2).上机(4.1)检测6.5取阴性生鲜乳样品，将黄曲零毒素M，标准储备溶液（3.5）配制为0.1g/tmL，0.2ng/mL.0.3ng/ml..0.5mg/mL，1.0ng/mL.2.0ng/mL的系列标准工作液，由低到高液度进行（6.3.6.1)检.根据检测线工信号值与质控线C信号值的比值（T/C)和标准溶液浓度的然对数值（lc)建立标准曲线7结果计算
7.1结果计算与表示
试样中黄曲霖毒素M含量以质量分数X计.数值以微克每千克（u/k）表示.按式(1)计算。X=pxVXn.
我中：
β一从标准册线上查得的测定液中黄曲荐毒素含最的数值，单位为纳克每毫升（g/nl)；V—样品测定液体积的数值，单位为毫升（ml.)；1——试样稀释倍数的数值；
n—试样质量的数值，单位为克(g)计算结果保留小数点后两位。
7.2重复性
在重复性条件下，获得两次独立测定结果的绝对差值应不人于0.10/kg，7.3再现性
在再现性条件下，获得两次独立测定结果的绝对差值应不大于0.201高/kg8筛查结果确认
生鲜乳中黄曲霉毒素Mi筛查结果大十0.15u/kg时，应采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法进行结果确认。
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中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2547-2014
生鲜乳中黄曲霉毒素M筛查技术规程Technical regulation of on-site screening aflatoxin M, in fresh milk2014-03-24发布
2014-06-01实施
中华人民共和国农业部bzxz.net
本标准按照GB/T1.1·2009给出的规则起草本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。NY/T2547—2014
本标雅起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、中国农业科学院北京密牧兽医研究所、农业部油料及制品质量监臀检验测试中心。本标准主要起人：李培武、郑楠、张奇、丁小霞、唐晓情、张文、周海燕，李松励、下督、姜梭、张兆城T
1范围
生鲜乳中黄曲霉毒素M，筛查技术规程本标准规定了生鲜乳中黄曲霉毒素M，筛查技术规程本标准适用于牛鲜乳中黄曲霉毒素M的时间分辨免疫层析法的筛查。2规范性引用文件
NY/T 2547—2014
下列文件对丁本文件的应用是必不可少的。凡是注口期的引用文件，仪注日期的版本适州下本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于木文件（B/T6682分析实验室用水规格和试验方法3试剂
除非另有规定·仅使用分析纯试剂，3.1水.按照GB/T6682中的要求，二级。3.2伊醇(CH,OI)。
3.3标记黄曲霉毒素M抗体溶液：黄曲毒素M，抗体纯度80%以上与其他黄曲霉毒素交叉反应率小十10%抗体亲和力常数不低于1.00×10%1./mo1。3.41000ng/ml黄曲获毒素Ml标准溶液。3.5100ng/l.黄曲霉毒素M，标准储备液：准确吸取黄曲等毒素标准溶液（3.4)l.0ml十10mL容量瓶中，甲醇定容，4℃保存有效期：90d)，备用。替告：
由于黄曲霉毒素毒性很强，试验人员应注意自我保护。操作时应避免吸人、接触黄山霉再素标准溶液，配制标准溶液应在通风樹内进行，工作时成戴眼镜、穿工作服、裁医用乳胶手套。凡接触黄曲每毒素的容器.需浸泡于10%次氯酸钠溶液中12h-然后清洗。间时，为了降低接触黄曲罪毒素的机合，本标准鼓动直接购买并使用黄拍导毒素的有证标准诺备液。
4仪器设备与材料
4.1时间分辨荧光检测仪：激发波长为（3651-5）m.检测波长为（61515）1m：4.2黄曲霖毒素Mi免疫层析装置（图1)：固定有AFM,-BSA偶联物，检测灵敏度不低于-0.1ng/kg，用于样品中黄曲霉毒素 M与铕标记抗体预反应后再与黄曲霉毒索一BSA 偶联物反应的载体;不得出现假阴性，假相性率低于15岁，NY/T2547—2014
说明：
（)正规阁
■—底板
——水;
3—硝酸纤维素膜：
(h)测视陶
4—样品：
7—质控线：
G-—将测线。
图1黄曲霉毒素M，免疫层析装置示意图4.2.1AFM,BSA偶联率为(1+5)~(I20)(BSA：AFM)。4.2.2样品垫：玻璃纤维、聚酯纤维或纸质薄片等。4.2.3硝酸纤维素膜：4cm毛细时间不小于75s。4.2.4吸水纸
4.2.5底板。
4.2.6连接胶带。
4.3恒温装胃：（37.0=2.0)℃，4.4漩涡混合器。
4.5微量移液器：20uL200μL，100ul.~1000l.4.6分析天平：感量为0.01g。
4.7水浴锅。
4.810ml移液管.
4.950ml.烧杯，
5抽样
5.1抽样人员应熟知抽样程序和方法，5.2抽样人员应准备相应的工具和包装容器。抽样工具和包装容器应清洁、十燥，不会对样品造成污染。
5.3样品应从足够量的同批产品中随机拖取。若用人桶或奶罐髂装的，应充分混匀后再采样。2
NY/T 2547—2014
5.4通常抽样量不低丁300mL.分样成3份，其中一份做检验样，份做复检样，--份做备用样品.分别盛放3个容器中。
6黄曲霉毒素筛查
6.1在室温条件下，取150.0ul.销标记的黄曲需毒素M:抗体溶液（3.3)于1.5ml.样品瓶，备用。6.2川分析天平(4.6)准确称取10.0k样品至50ml.烧杯中(精确至0.1g).混句备用6.3取300.0.样品（6.2），垂直滴加厂样品瓶（6.1)内.漩混合5s。取出黄曲蒋毒素M免疫层析装置（1.2），按箭头方向插人加样后的样品瓶中，将样品瓶置十恒湿装置中，37℃反应6min6.4取出黄曲霉毒素M，免胺层析装置（4.2).上机(4.1)检测6.5取阴性生鲜乳样品，将黄曲零毒素M，标准储备溶液（3.5）配制为0.1g/tmL，0.2ng/mL.0.3ng/ml..0.5mg/mL，1.0ng/mL.2.0ng/mL的系列标准工作液，由低到高液度进行（6.3.6.1)检.根据检测线工信号值与质控线C信号值的比值（T/C)和标准溶液浓度的然对数值（lc)建立标准曲线7结果计算
7.1结果计算与表示
试样中黄曲霖毒素M含量以质量分数X计.数值以微克每千克（u/k）表示.按式(1)计算。X=pxVXn.
我中：
β一从标准册线上查得的测定液中黄曲荐毒素含最的数值，单位为纳克每毫升（g/nl)；V—样品测定液体积的数值，单位为毫升（ml.)；1——试样稀释倍数的数值；
n—试样质量的数值，单位为克(g)计算结果保留小数点后两位。
7.2重复性
在重复性条件下，获得两次独立测定结果的绝对差值应不人于0.10/kg，7.3再现性
在再现性条件下，获得两次独立测定结果的绝对差值应不大于0.201高/kg8筛查结果确认
生鲜乳中黄曲霉毒素Mi筛查结果大十0.15u/kg时，应采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法进行结果确认。
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