SC/T 3048-2014 鱼类鲜度指标K值的测定 高效液相色谱法 SC/T3048-2014 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS 67.120.30
中华人民共和国水产行业标准
SC/T3048-2014
鱼类鲜度指标K值的测定
高效液相色谱法
Determination of K value as fishery freshness index-High performance liquid chromatography2014-03-24 发布
2014-06-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准力农业部渔业局提山，
SC/T3048—2014
本标准t全通水产标准化技术委员会水产品川工分技术委员会(SAC/TC155/SC3)归口。本标准起草单位：福建省水产研究所南海水产研究所、农业部渔业产品质量监督检验测试中心（门）北京市水产技术推广站。
本标淮工要起草人：钱卓其、汤水粉、杨贤庆、吴成业、刘淑集、张园、爱英1范围
SC/T 3048—2014
鱼类鲜度指标K值的测定，高效液相色谱法本标准现定了鱼类鲜度指标K值的高效液机色谱测定方法，本标准适用于鱼类川食部分鲜度指标K值的测定。2规范性引用文件
下列文件对丁文件的放用是必不可少的。凡是注H期的引用文件，仅注日期的版本适用于本义件。凡是不注H期的引用义件,其最新版本(包括所有的修改单)适用十本文件。GB/T6682分析实验室用水舰格和试验方法3术语和定义
下列术语和定义适用十本文件。3. 1
腺苷三磷酸降解产物thebreakdown pruductsntAlp鱼类死后，其肌肉内腺三磷酸（AcienosieTriphosphale，ATP)依次降解为腺当磷酸（AdenosineDiphosphate.ADP)腺酸(Adenosinc Manophosphale，AMP)、肌荠酸(InosnieAcid.IMP).次黄嘌呤核竹（Inosinc：HxR)和次黄嘌呤（Hypuxanhine，Hx）3.2
K值Kvalue
K值是腺凸三磷酸降解产物次黄嘌核、次黄噪呤量之和与腺百三磷酸美联化合物总量（ATP！ADIP+AMP+IMP+HxR+Hx)的百分比。4测定方法
4.1方法原理
样品叶的腺作·三磷酸放其降解产物用高氯酸提取，氛氧化钠溶液调节PH，沉淀，除去杂质用色谱杜分离，紫外检测器检测、外标法定量；以测得的次黄嘌岭核，次黄嘌呤量之和与腺伴三酸关联化合物总量的分比作为鲜度指标4.2试剂和材料
所用试剂除另有规定外，均为分析纯。4.2.1水：试验而水成符合（B/T66S2中：级水指标。4.2.2燃酸，
4.2.3高氯酸。
4.2.4氢鼠化钠。
4.2.5磷二氢钟(KII,PO)),
4.2.6磷酸氢二铆(K,HP，3H:O)，4.2.710%（V/V)高氟酸溶液：量取高氯酸0ml用水稀释至50lmL，并置于4℃冰箱冷藏保存4.2.85%（V/V)尚氯酸济液：量取高氯酸25ml.H水稀释至500mL.并置于4冰箱十冷截保存。4.2.10mbl/L氢氧化钠溶液：称取氧氧化钠400g,水溶解升加水稀释卒1600mLSC/T 3048-2014
4.2.101mol/1.氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠40g：用水溶解并加水稀释至1000mL4.2.110.02m1ol/L磷酸二氧钾溶液：准确称取2.722磷酸一氢钾（4.2.5),用水溶解并加水定容尘1 000 ml.
4.2.120.02mol/1.磷酸氢-钾液：准确称取4.566g磷酸氢二钾（4.2.6)，用水溶解并加水定容至Io0o ml..
4.2.13腺自三磷酸、腺片“磷酸、腺苷酸、肌书酸、次黄嘌呤核皆、次黄嘌岭标准品：纯度299.0%。4.2.14标准储备液：准确称腺者三磷腰、腺一磷酸、腺苷峻、肌羧、次黄嘌呤核节各10（精确至0.00001g），用水容扩10mL棕色窄量瓶中，此溶液浓度为1.00mg/mL；准确称取次黄赚岭5mg（精确至0.09001我），用水定容于10mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为0.500m%/mL。齐标准备液置上冰箱冷藏保存，保存期不超过用。4.2.15混合标准1作溶液：取适量标准储备液，用流动相肾系列标准溶液，使腺节三磷液、原件二磷酸、腺凸液、肌酸、次黄岭核者浓度为0.200g/mL、0.500μg/ml.、1.00ug/ml.5.00μg/ml、J5.cμg/1nl、40.0μg/ml.109pg/ml，使饮黄呤浓度为0.100μg/mL0.250μg/ml..0.=00pg/ml.2.50g/mL.7.5μg/ml.20.0pg/ml..50.0μg/mL；使用时现配现用4.2.16动相：0.0211o1/l,磷酸—氢钾溶液(4.2.11)+0.02mol/1.磷酸氢—钾液（4.2.12）1—]【V/V】.用磷酸调节H 至6.0。
4.3仪器和设备
4.3.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。4.3.2冷冻离心机：80001/min，44.3.3涡旋振荡器。
4.3.4pl1：精度0.01.
4.3.5微孔滤膜：0.22μm，水相。4.3.6分析大平：感量0.00001
4.3.7天平感量0.01g
4.3.8均质机。
4.4测定步骤
4.4.1试样的制备
将样品去头、去鳞、去皮、去内脏，沿脊肯收肌肉部分：在4艺下匀质混勾4.4.2提取
称取均质后的样比（2.C0上0.02）g放人离心管内，加人高氯羧溶液（1.2.7)20mL，涡旋振荡1min在4℃下800)r/mim离心10min，取出上清液，再川高氯酸辫液（4.2.8)10 ml.提取沉凝物中的持测物,在4℃下8(00 r/rmin)离心J min，重复操作-次,合并上清液。川氢氧化钠溶液（4.2. 9)调提取凝PI近6.0),然后再用筑氧化钠溶液（2.10)继续调节PTI至6.0.6.4。将已调节后的溶液转移卒经预冷的容量瓶中，4℃水定容至50inI在1下8900/min离心10tni1.0.22 m微孔滤膜过滤，滤液丁4℃1下保存,待测。4.4.3色谱参考条件
色谱杜：,2心mm×4.6mm(i.d.),粒径μm;或性能相当者；b）
流速: 1. 0 ml,/ min;
）柱温：35;
检测波长：254nm；
进样量：20
4.4.4色谱测定
SC/T 30482014
取标准工作液利试样提取液等体积进样，按4.4.3测定、外标法定量，标准溶液和试样提取液中腺自三磷酸关联化合物的响应值均成在仪器检测的线性范用内。标准品色谱图卷见附录A。4.5结果计算和表达
4.5.1各组分含量计算
试样中腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、腺白酸、肌酸、次黄嘌吟核节、次黄嘌岭含量按式（1)计算，计算果保留两位有效数字。
：试样中腺苷三麟酸、腺竹二磷酸、腺酸、肌苷酸、次黄嘌吟核苷、次黄嘌呤含鼠，单位为微M.
摩尔每克(umol/g）：
标准工作溶液腺苷三酸、腺书一磷酸、腺白酸、肌芹酸、次黄嘌岭核芹、次贡璟呤的浓度，单位为微克每窘升（ug/mt.)：最终定容体积，单位为毫升（ml.)；一称取的试样质量，单位为克(g)：H
：腺片-磷酸摩尔质量551g/mml、腺昔一磷酸摩尔质量126g/mol.腺书酸嗪尔质量365g/nol.肌苷酸摩尔质置3929/mol.次黄嘌岭核年魔尔质量268g/mol、次黄嘌冷摩尔质量136g/mol.
4.5.2K值计算
将式（！)计算所得结分别代人式(2)，计算山K值，单位为百分率。MHx+MH
K值MAm=MNe+Ma+MunMirIMu
.......
式中：
样晶中腺苷三磷酸的含量，单位为微摩尔每克（u1l/g）；样品中腺苷一磷酸的含最，单位为徽摩尔每克（unol/)；样品中腺皆酸的含量，单位微魔尔每克（mol/g；样品中肌酸的含量，单位为微摩尔每克（umrl/g）；Mi样品中次茂嘌岭核作的含量，单位为微摩尔每克（umol/g)；MHx一样品中次黄嘌吟的命量，单位为微摩尔每克（umol/g）。5灵敏度、准确度和精密度
5.1线性范围免费标准bzxz.net
井三磷酸、腺告二磷酸、腺行峻、肌苷酸、次黄嘌岭核皆为0.20)/mL~-100号/mL；次黄嘌岭为 0. 100 μg/ml~50,0 μg/ml..5.2灵敏度
本力法检山限：腺芹三磷酸腺苷磷酸、原片酸、肌酸、淡黄嘌呤核节为5.00m/k：次黄嘌岭为 2. 50 mg/ kg.
本方法定量限：原芹磷酸、腺自磷酸、腺苷酸、肌升峻、次黄嘌冷核苷为1.0I/k；次黄嘌岭为 a.00 mg/kg。
5.3准确度
腺苷一磷酸、腺芹二酸、腺肯酸、肌扩酸在添加浓度分别为25mg/kg800)mg/kg时，回收率为70120%。
SC/T30482014
次黄嘌岭次黄赚呤核替在添加浓度为20tng/kg~~6001g/kg时，叫收率为70%~120%。5.4精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的相对标准偏差1；%，附录A
(资料性附录)
液相色谱图
SC/T 3048—-2014
A1腺苷三磷酸、腺苷二磷酸、腺苷酸、肌苷酸，次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤标准品液相色谱图见图A.1
EstAI-dWV--
S[9'E-y*--=-
腺苷三磷酸、腺苷二磷酸,腺苷酸、肌苷酸、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤标准品(10g/叫)的液相色谱图A.2鱼未加标样品液相色谱图
见图 A 2.
鱼未加标样品液相色谱图
EWLS-H*HC.
SC/r3048—2014
鱼加标样品的液相色谱图
见图A.3
lz'h-iry
E2081-V---
鱼加标样品的液相色谱图
（A/P、AIP、AMP、IMP川标益均为C0mg/kg.lxHxR加标品均为3C5rrg/）40.00
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