SC/T 7218.1-2015
基本信息
标准号： SC/T 7218.1-2015
中文名称：指环虫病诊断规程 第1部分：小鞘指环虫病
标准类别：水产行业标准(SC)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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标准简介
SC/T 7218.1-2015 指环虫病诊断规程 第1部分：小鞘指环虫病
SC/T7218.1-2015
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标准内容
ICS 65.020.30
中华人民共和国水产行业标准
SC/T7218.1—2015
指环虫病诊断规程
第1部分：小鞘指环虫病
Protocols for diagnosis of Dactylogyriasis-Part 1 :Infection with Dactylogyrus vaginulatus2015-02-09发布
2015-05-01实施
中华人民共和国农业部
SC/T7218指环虫病诊断规程》为系列标准：第1部分：小鞘指环虫病：
-第2部分：页形指环虫病；
第3部分：鋪指环虫病；
-第4部分：坏鳃指环虫病；
本部分足《指环虫病诊断规程》的第1部分本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草SC/T 7218. 1—2015
请注意本文件的某些内容可能渺及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业政管理局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：河北省水产养殖病害防治监测总站，本部分主要起草人：曹杰、张志华、刘文青、李全振、李风超、康现江、赵宝华、申红旗、侯金良。丁
1范围
指环虫病诊断规程
第1部分：小鞘指环虫病
SC/T 7218. 1-2015
本部分规定了小鞘指环虫病的流行情况与临床症状，以及小鞘指环虫（Dactytogrusuuginulutus）采集与固定、形态学鉴定和分子检测的方法。本部分适用于链、等淡水鱼类患小鞘指环虫病的流行病学谢查、诊断、监测和检疫。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引而文件，仅注日期的版本适用丁本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修政单)适而丁本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范3试剂和材料
3.1水：配罩试剂用水应符合GB/T6682中一级的规定。3.2乙醇:分析纯。
3.3Taq酶：一20℃保存，不得反复冻融或温度剧烈变化。3. 4dNTPs:含 dATP、dTTI,dGIP.dCTP各 10 mmol/L的混合物。3.5上游物F:5-TTATGTGGACCTCTGT-3°3. 6下游物 R:5'-AGCCGAGTGATCCACCA-3。3.7DNA Markrrtbp):2000.1000.750,500.250.100。3.8其他试剂见附录A
4仪器和设备
4.1体视显微镜和生物显微镜
台微尺，月微尺、显微摄影设备。4.3PCR扩增仪。
4.4紫外透射仪或凝胶成像仪。
4.5电泳仪。
4.6普通冰箱和超低温冰箱。
4.7离心机和离心管。
4.8电子天平。
4.9恒温水浴箱和徽波炉。
4.10微量移液器及吸头。
4.11解剂盘，剪刀、镊子、解剖针。4.12载玻片、盖被片、橡皮泥，培养Ⅲ和吸管」
SC/T 7218. 1—2015
5流行情况与临床症状
5.1流行情况
小鞘指环虫能感染鲢（Hybobhzhatmichthsnotitrir）（Aristihthysnabhiis）等：全齐地均川发生，发病高峰水温灼9℃-~21℃。5.2临床症状
小鞘指环虫主要寄于色的鳃部、病鱼鳃组织损伤，鳃丝肿帐、贫血，斑点状淤血·鳃上有人量黏液，重度感染时，鳃丝鼠著肿胀，鳃盖张开、病伯极度不安、审动、狂游，或游动缓慢、呼吸困难、上浮水面而死。
6指环虫采集与固定
6.1病鱼采集
捞取其有典型症状的鱼，如果现场无病原分离条件，将采集的病鱼用80外乙醇固定。样品封存和运输应符合SC/T7103的规定。
6.2指环虫样品的采集
用刺鱼脑，将色杀死。宪整的取下全鳃，荆小剪刀将鳃片分离，取一升鳃置丁培养血中，酒水少许。用解剖针将虫体从鳃丝上剥离，用吸管吸出，放在载玻片上。在盖玻片的四角涂少景橡皮泥避免盖玻片将虫体直接压碎，用镊于轻压盖玻片，显微镜下观察。6.3指环虫样品的固定与保存
加一滴清水到载玻片上，用吸管吸取·个虫体置于水滴中，轻轻地盖上盖玻片，用一张滤纸在盖玻片边缘缓慢吸水，直到水基本吸十为止。工滴APG溶液(见A.1)到盖玻片边缘，直到浸满盖玻片与载玻片之间的空隙。用于形态学鉴定的出体样品用70为乙醇保存，用于分子检测的出体样品用95%乙醇保存。
7小鞘指环虫的鉴定
7.1小鞘指环虫的形态学鉴定
显微镜下指怀业前端有2对头器.2对黑色龈点，呈方形排列，此为判断指环虫的简易特征。微调焦距即可观察到指坏出片吸器的中央大钩、联结片和边缘小钩，指环虫靠还头部端叮观察到交接器，后吸器与交接器是指环出鉴定的重要特征。根据需要用镊于轻压盖玻片以凸显儿几丁质结构进行拍照。小鞘指环虫出体大型.体长1.45mm~1.95mm，宽0.20mm~0.3111m。联结片呈片状，酬联结片是三角形。交接管基部粗大，管成弧状，端部斜截。支持器片状包住交接管，端部L翘。100倍显微镜下对小鞘指环出进行形态学鉴定，其中央人钩、联结片、交接器的形态特征参见图B.1、图B.2、图B.3、图B.1。小鞘指环虫的形态学测量特征指标见表1.表1小鞘指环虫形态学测量特征指标单位为微米
测量的特征
中火大钩金长
中央大钩基部长
中央大钩外窦长
中大大钩内突长
市火大钩尖长
边缘小钩全长
联结片长
-iiiKwcutKAca
变动范固
31.4-37.3
29. 7 -- 36. 7
11. 2---12.7
31. 2 33. 7
38. 6-~43. 2
5. 3~6. 4
测量的特征
联结片宽
副躲结片长
副联钻片宽
交接节长
支持器长
7.2小鞘指环虫的分子检测
7.2.1虫体DNA的提取
表1（续）
变动范函
30.9-~32.2
5. 1-- 5. 9
20. 2 ~ 21. 6
35. 3~-40. 5
42.8--48.3
SC/T 7218. 1—2015
用吸管吸取乙醇固定的出体标本1个，充分干燥以除去多余的乙醇后，转移至0.2ImL离心管中。用100μTE缓冲液（见A.2)浸洗2h3h离心后弃上清，加入9.裂解液（见A3）.末经乙醇固定保存的出体则直接加裂解液。65℃.水30min后，95℃处理10min：该裂解产物不需要进步纯化就可直接作为PCR的模板。也川用同等效用的试剂盒提取虫体INA。7.2.2PCR扩增
反应在50μL体系中进行：10倍浓缩缓冲液（见A.4）5μldVTPs2μL，引物（10μmol/L）各2μL.DNA模板2，Taq酶1μ双蒸水36I。反应程序为：94℃5mi194℃305.54℃30572℃1min，共25个循环；最后72℃10minPcR反应成设置阴性对照和阻性对照。7.2.3PCR产物的电泳和测序免费标准下载网bzxz
用1×TAE电泳缓冲液（见A.5)配成1%琼脂糖凝胶溶液，微波炉加热使琼脂糖完全溶解，待冷却至60℃左右加人核酸染料GoldView（见A.6）至终浓度为3μL/100mL-~4uL/100ml，混勺后倒入封固好的制胶板中，凝胶厚度在3mm~5mn.插入宽度适当的梳子。待凝胶完全凝固后.小心拔山梳子，拆去封条，将凝胶放入装有1×TAE电泳缓冲液的电泳槽，使电泳缓冲液刚好没过胶面（约1mim）。然后取5μl.PCR物与1μ工的6倍上样缓冲液（见A,7)混勾用微量加样器将混合样品加到胶孔中，以5V/cm的电压电泳，当溴酚蓝电泳至适当位置后用紫外观察灯或凝胶成像仪规察并记录结果。PCR阳性产物会山现条与小鞘指坏虫（1168bp)ITS1基因扩增片段一致的日的条带，空[I对照没有该目的条带。如存在目的条带，则取PCR扩增产物测序。8综合判定
8.1在显微镜下观察鲢鋪等鱼类的鳃丝，如果观察到虫体，且符合7.1描述的小鞘指环出特征，则判断为小鞘指环虫。如果形态鉴定不能完全确定指环虫种类，可进一步用PCR方法扩增其1T'S1序列，经测序后与小鞘指坏出的参考序列（参见附求（)进行对比，序列相似性在99%以上者，则判断为小鞘指环虫。
8.2鲢、等鱼类感染小鞘指环虫，月病鱼临床症状符个5.2的描述，则判定为小鞘指环虫病，3
SC/T 7218.1—2015
A.1APG溶液
附录A
【规范性附录】
试剂及其配制
将饱和的芯味酸铵溶液和廿油按照1：1的比例混合即成。A.2TE缓冲液pH9.0
Tris HC!
A.3裂解液
500 mmol/1
200 mmol/L
10 mnol/L
0.45%NP-AC.0.45%Tween-20.100mmol/I.ED1A和100μ/mL蛋H酶K蛋白酶K用5Ctmmol/I. Tris - HCl (pH8. 0)和 1. 5 mmol/ 1. CaAc2 配置:A.410倍浓缩缓冲液(10×buffer)pH8.8Tris-HCl
氯化铆(KCI)
氯化镁（MgCl）
100 mmol/1
500 mmol/L
15 mmol/1.
A55倍TAE电泳缓冲液（5×TAEbuffer）Tris
加双蒸水溶解到1000,0 mL,用5.0mol/L的盐酸(HCl)调pH例&.0.A.6核酸染料(Goldview)
用水配成10.0mg/ml.的浓缩缓冲液，用时每20.CmL电泳液或琼脂中加1.5zLA,76倍上样缓冲液（6×buffer）溴酚蓝100mg,加双蒸水5mL在室温下过夜,待溶解片再称取蔗糖25g,加双蒸水溶解店移人溴盼蓝溶液,摇勺后定穿至50mL加人氢氧化钠(NaOH)溶液一滴，调至蓝色。-iiiKwcutKAca
附录B
【资料性附录】
指环虫的中央大钩、联结片、交接器的测量特征B.1指环虫几种几丁质结构及测盈方法示意图见图R1。
说明：
指环虫中史天钩的几种给见形戏，发育完全的边缘小钩；
继形的迟缘小钩：
指环业交按帮及其各部分：
中火大钩全长：
一基部长;
外灾长；
-内淀长；
均尖长：
一腱带：
8—钩尖；
指环虫几种几丁质结构及测量方法示意图常见指环虫联结片形态及测量方法示意图见图 B. 2 .
SC/T 7218. 1—2015
小钩全长+
交按管基座：
一定接管毕部：
交接管：
支持据
SC/T 7218. 1—2015
说祺：
一联结片的长；
眠结片的觉，
图B.2常见指环虫联结片形态及测量方法示意图B.3指环虫副联结片的几种形态及测量方法示意图见图B.3，
X生学
指环虫联站片的儿神带见形式：联驾片的长，
副联结片的宽。
图B.3指环虫副联结片的几种形态及测量方法示意图B.4小鞘指环虫的后吸器和交接器形态特征见图 B.4。
说明：
[一-后吸馨：
一交接露，
图R.4小鞘指环虫的后吸器和交接器形态特征6
-iiiKwcutKAca
附录C
【资料性附录]
SC/T 7218. 1—-2015
小鞘指环虫核糖体3NA内转录间隔区(ITS1)扩增产物的参考序列小鞘指环虫核糖休DNA内转录间隔区（ITSI)扩增产物的参考列（1168bp），下划线为物，TTATGTGGAC CTCTGITCAG GTACCTCTGG TGCTTGGATA GAACCACATA AGCAGGIGAAACTTCTTAGA GGAACTGGCGCTCGAAAAGGCGCACGAGAA AGAGCAATAA CAGGTCTGTG121
ATGCCCTAAG ATGTCCGGGG CCGCACGCGT GCTACAATGA CGATGCTACT GAGCATGATTAACTTGTCCG AAAGGATCGG TGAAACTGTT CAATCATCGT CGIGACTGGG ATTGGGGTTTGEAATIGTCC
TACGTCCCTG
CCCATGAACC
AGGAATTCCT
AGTAAGCACA AGTCATAAGC TTITGCTGACCCCITTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGTTTACKCAAGGGCATTGGATCGAGCCITTG CGGTTCACGC TGCTTGGGTI TGAGAAGATGTCCGAACTTG
ATCATTTAGA
CGGAAGGATC
GGAAGTAAAA GTCGTAACAA GGTTTCCGIAGGTGAACCTGATTATCAAGT
TCCTATACAA AATGCACGGT CCAGTGCTCG TATCGGCAGAGTGTATTGTT
TGCTCGACGC
GGCAAAGCCT
TAAGGTTGGTCGCGAGCACG CATTGCCTGTTTGGTGCGAG
CCTCCTGTTC
CGCTGTGTTT
GATCCTACCC
GAEGGOCTGCGCCCTCATGT
GGATEACTGT
GGTACAGAAA
TGTACGTAACAGTACOGAIG TAACACTCTTACTCCCGGTATCIAGTTGCG
TACAICCGCC
TGGAGCTTCC
TGGCTCTAAC
GAATGGCTACGTGCGGGTGG
TGATGIGTCG
CACGTAGACT
TTGGTCGCAA
CCTTGTATTG AAACTATCCA GTTAITGTTG GGIACAITACAACCTTCTCCCTTCGGGTGA
GTCTCTTGTT
TGTGCTTTTTAAACTTAAAA
AAATTGGTCA
GTATGGACGC TGGGTTGCCT GATCGCTCTC TGCCTCTTTC GCTCGTACTG CTCCTATCTGCGTGCATCCT TAACGGGGTG CGTGTGGGTG TGGGGCGGTGCTTGTGTCTCGGTGGCTAGGAGETTGAGCGGGCTGACTAG GTGTCTGTICAGGCCAGGTATACGCCCGCTCATIGICGTGGTGTGTGCAC TIAACTGGGC ATGCATCGGG ACCTTGGGTG GTTAACGTGT ATCAACCTAT1141
ACAACTGCAAGTGGTGGATC_ACTCGGCI
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中华人民共和国水产行业标准
SC/T7218.1—2015
指环虫病诊断规程
第1部分：小鞘指环虫病
Protocols for diagnosis of Dactylogyriasis-Part 1 :Infection with Dactylogyrus vaginulatus2015-02-09发布
2015-05-01实施
中华人民共和国农业部
SC/T7218指环虫病诊断规程》为系列标准：第1部分：小鞘指环虫病：
-第2部分：页形指环虫病；
第3部分：鋪指环虫病；
-第4部分：坏鳃指环虫病；
本部分足《指环虫病诊断规程》的第1部分本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草SC/T 7218. 1—2015
请注意本文件的某些内容可能渺及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业政管理局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：河北省水产养殖病害防治监测总站，本部分主要起草人：曹杰、张志华、刘文青、李全振、李风超、康现江、赵宝华、申红旗、侯金良。丁
1范围
指环虫病诊断规程
第1部分：小鞘指环虫病
SC/T 7218. 1-2015
本部分规定了小鞘指环虫病的流行情况与临床症状，以及小鞘指环虫（Dactytogrusuuginulutus）采集与固定、形态学鉴定和分子检测的方法。本部分适用于链、等淡水鱼类患小鞘指环虫病的流行病学谢查、诊断、监测和检疫。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引而文件，仅注日期的版本适用丁本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修政单)适而丁本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范3试剂和材料
3.1水：配罩试剂用水应符合GB/T6682中一级的规定。3.2乙醇:分析纯。
3.3Taq酶：一20℃保存，不得反复冻融或温度剧烈变化。3. 4dNTPs:含 dATP、dTTI,dGIP.dCTP各 10 mmol/L的混合物。3.5上游物F:5-TTATGTGGACCTCTGT-3°3. 6下游物 R:5'-AGCCGAGTGATCCACCA-3。3.7DNA Markrrtbp):2000.1000.750,500.250.100。3.8其他试剂见附录A
4仪器和设备
4.1体视显微镜和生物显微镜
台微尺，月微尺、显微摄影设备。4.3PCR扩增仪。
4.4紫外透射仪或凝胶成像仪。
4.5电泳仪。
4.6普通冰箱和超低温冰箱。
4.7离心机和离心管。
4.8电子天平。
4.9恒温水浴箱和徽波炉。
4.10微量移液器及吸头。
4.11解剂盘，剪刀、镊子、解剖针。4.12载玻片、盖被片、橡皮泥，培养Ⅲ和吸管」
SC/T 7218. 1—2015
5流行情况与临床症状
5.1流行情况
小鞘指环虫能感染鲢（Hybobhzhatmichthsnotitrir）（Aristihthysnabhiis）等：全齐地均川发生，发病高峰水温灼9℃-~21℃。5.2临床症状
小鞘指环虫主要寄于色的鳃部、病鱼鳃组织损伤，鳃丝肿帐、贫血，斑点状淤血·鳃上有人量黏液，重度感染时，鳃丝鼠著肿胀，鳃盖张开、病伯极度不安、审动、狂游，或游动缓慢、呼吸困难、上浮水面而死。
6指环虫采集与固定
6.1病鱼采集
捞取其有典型症状的鱼，如果现场无病原分离条件，将采集的病鱼用80外乙醇固定。样品封存和运输应符合SC/T7103的规定。
6.2指环虫样品的采集
用刺鱼脑，将色杀死。宪整的取下全鳃，荆小剪刀将鳃片分离，取一升鳃置丁培养血中，酒水少许。用解剖针将虫体从鳃丝上剥离，用吸管吸出，放在载玻片上。在盖玻片的四角涂少景橡皮泥避免盖玻片将虫体直接压碎，用镊于轻压盖玻片，显微镜下观察。6.3指环虫样品的固定与保存
加一滴清水到载玻片上，用吸管吸取·个虫体置于水滴中，轻轻地盖上盖玻片，用一张滤纸在盖玻片边缘缓慢吸水，直到水基本吸十为止。工滴APG溶液(见A.1)到盖玻片边缘，直到浸满盖玻片与载玻片之间的空隙。用于形态学鉴定的出体样品用70为乙醇保存，用于分子检测的出体样品用95%乙醇保存。
7小鞘指环虫的鉴定
7.1小鞘指环虫的形态学鉴定
显微镜下指怀业前端有2对头器.2对黑色龈点，呈方形排列，此为判断指环虫的简易特征。微调焦距即可观察到指坏出片吸器的中央大钩、联结片和边缘小钩，指环虫靠还头部端叮观察到交接器，后吸器与交接器是指环出鉴定的重要特征。根据需要用镊于轻压盖玻片以凸显儿几丁质结构进行拍照。小鞘指环虫出体大型.体长1.45mm~1.95mm，宽0.20mm~0.3111m。联结片呈片状，酬联结片是三角形。交接管基部粗大，管成弧状，端部斜截。支持器片状包住交接管，端部L翘。100倍显微镜下对小鞘指环出进行形态学鉴定，其中央人钩、联结片、交接器的形态特征参见图B.1、图B.2、图B.3、图B.1。小鞘指环虫的形态学测量特征指标见表1.表1小鞘指环虫形态学测量特征指标单位为微米
测量的特征
中火大钩金长
中央大钩基部长
中央大钩外窦长
中大大钩内突长
市火大钩尖长
边缘小钩全长
联结片长
-iiiKwcutKAca
变动范固
31.4-37.3
29. 7 -- 36. 7
11. 2---12.7
31. 2 33. 7
38. 6-~43. 2
5. 3~6. 4
测量的特征
联结片宽
副躲结片长
副联钻片宽
交接节长
支持器长
7.2小鞘指环虫的分子检测
7.2.1虫体DNA的提取
表1（续）
变动范函
30.9-~32.2
5. 1-- 5. 9
20. 2 ~ 21. 6
35. 3~-40. 5
42.8--48.3
SC/T 7218. 1—2015
用吸管吸取乙醇固定的出体标本1个，充分干燥以除去多余的乙醇后，转移至0.2ImL离心管中。用100μTE缓冲液（见A.2)浸洗2h3h离心后弃上清，加入9.裂解液（见A3）.末经乙醇固定保存的出体则直接加裂解液。65℃.水30min后，95℃处理10min：该裂解产物不需要进步纯化就可直接作为PCR的模板。也川用同等效用的试剂盒提取虫体INA。7.2.2PCR扩增
反应在50μL体系中进行：10倍浓缩缓冲液（见A.4）5μldVTPs2μL，引物（10μmol/L）各2μL.DNA模板2，Taq酶1μ双蒸水36I。反应程序为：94℃5mi194℃305.54℃30572℃1min，共25个循环；最后72℃10minPcR反应成设置阴性对照和阻性对照。7.2.3PCR产物的电泳和测序免费标准下载网bzxz
用1×TAE电泳缓冲液（见A.5)配成1%琼脂糖凝胶溶液，微波炉加热使琼脂糖完全溶解，待冷却至60℃左右加人核酸染料GoldView（见A.6）至终浓度为3μL/100mL-~4uL/100ml，混勺后倒入封固好的制胶板中，凝胶厚度在3mm~5mn.插入宽度适当的梳子。待凝胶完全凝固后.小心拔山梳子，拆去封条，将凝胶放入装有1×TAE电泳缓冲液的电泳槽，使电泳缓冲液刚好没过胶面（约1mim）。然后取5μl.PCR物与1μ工的6倍上样缓冲液（见A,7)混勾用微量加样器将混合样品加到胶孔中，以5V/cm的电压电泳，当溴酚蓝电泳至适当位置后用紫外观察灯或凝胶成像仪规察并记录结果。PCR阳性产物会山现条与小鞘指坏虫（1168bp)ITS1基因扩增片段一致的日的条带，空[I对照没有该目的条带。如存在目的条带，则取PCR扩增产物测序。8综合判定
8.1在显微镜下观察鲢鋪等鱼类的鳃丝，如果观察到虫体，且符合7.1描述的小鞘指环出特征，则判断为小鞘指环虫。如果形态鉴定不能完全确定指环虫种类，可进一步用PCR方法扩增其1T'S1序列，经测序后与小鞘指坏出的参考序列（参见附求（)进行对比，序列相似性在99%以上者，则判断为小鞘指环虫。
8.2鲢、等鱼类感染小鞘指环虫，月病鱼临床症状符个5.2的描述，则判定为小鞘指环虫病，3
SC/T 7218.1—2015
A.1APG溶液
附录A
【规范性附录】
试剂及其配制
将饱和的芯味酸铵溶液和廿油按照1：1的比例混合即成。A.2TE缓冲液pH9.0
Tris HC!
A.3裂解液
500 mmol/1
200 mmol/L
10 mnol/L
0.45%NP-AC.0.45%Tween-20.100mmol/I.ED1A和100μ/mL蛋H酶K蛋白酶K用5Ctmmol/I. Tris - HCl (pH8. 0)和 1. 5 mmol/ 1. CaAc2 配置:A.410倍浓缩缓冲液(10×buffer)pH8.8Tris-HCl
氯化铆(KCI)
氯化镁（MgCl）
100 mmol/1
500 mmol/L
15 mmol/1.
A55倍TAE电泳缓冲液（5×TAEbuffer）Tris
加双蒸水溶解到1000,0 mL,用5.0mol/L的盐酸(HCl)调pH例&.0.A.6核酸染料(Goldview)
用水配成10.0mg/ml.的浓缩缓冲液，用时每20.CmL电泳液或琼脂中加1.5zLA,76倍上样缓冲液（6×buffer）溴酚蓝100mg,加双蒸水5mL在室温下过夜,待溶解片再称取蔗糖25g,加双蒸水溶解店移人溴盼蓝溶液,摇勺后定穿至50mL加人氢氧化钠(NaOH)溶液一滴，调至蓝色。-iiiKwcutKAca
附录B
【资料性附录】
指环虫的中央大钩、联结片、交接器的测量特征B.1指环虫几种几丁质结构及测盈方法示意图见图R1。
说明：
指环虫中史天钩的几种给见形戏，发育完全的边缘小钩；
继形的迟缘小钩：
指环业交按帮及其各部分：
中火大钩全长：
一基部长;
外灾长；
-内淀长；
均尖长：
一腱带：
8—钩尖；
指环虫几种几丁质结构及测量方法示意图常见指环虫联结片形态及测量方法示意图见图 B. 2 .
SC/T 7218. 1—2015
小钩全长+
交按管基座：
一定接管毕部：
交接管：
支持据
SC/T 7218. 1—2015
说祺：
一联结片的长；
眠结片的觉，
图B.2常见指环虫联结片形态及测量方法示意图B.3指环虫副联结片的几种形态及测量方法示意图见图B.3，
X生学
指环虫联站片的儿神带见形式：联驾片的长，
副联结片的宽。
图B.3指环虫副联结片的几种形态及测量方法示意图B.4小鞘指环虫的后吸器和交接器形态特征见图 B.4。
说明：
[一-后吸馨：
一交接露，
图R.4小鞘指环虫的后吸器和交接器形态特征6
-iiiKwcutKAca
附录C
【资料性附录]
SC/T 7218. 1—-2015
小鞘指环虫核糖体3NA内转录间隔区(ITS1)扩增产物的参考序列小鞘指环虫核糖休DNA内转录间隔区（ITSI)扩增产物的参考列（1168bp），下划线为物，TTATGTGGAC CTCTGITCAG GTACCTCTGG TGCTTGGATA GAACCACATA AGCAGGIGAAACTTCTTAGA GGAACTGGCGCTCGAAAAGGCGCACGAGAA AGAGCAATAA CAGGTCTGTG121
ATGCCCTAAG ATGTCCGGGG CCGCACGCGT GCTACAATGA CGATGCTACT GAGCATGATTAACTTGTCCG AAAGGATCGG TGAAACTGTT CAATCATCGT CGIGACTGGG ATTGGGGTTTGEAATIGTCC
TACGTCCCTG
CCCATGAACC
AGGAATTCCT
AGTAAGCACA AGTCATAAGC TTITGCTGACCCCITTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGTTTACKCAAGGGCATTGGATCGAGCCITTG CGGTTCACGC TGCTTGGGTI TGAGAAGATGTCCGAACTTG
ATCATTTAGA
CGGAAGGATC
GGAAGTAAAA GTCGTAACAA GGTTTCCGIAGGTGAACCTGATTATCAAGT
TCCTATACAA AATGCACGGT CCAGTGCTCG TATCGGCAGAGTGTATTGTT
TGCTCGACGC
GGCAAAGCCT
TAAGGTTGGTCGCGAGCACG CATTGCCTGTTTGGTGCGAG
CCTCCTGTTC
CGCTGTGTTT
GATCCTACCC
GAEGGOCTGCGCCCTCATGT
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GGTACAGAAA
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GAATGGCTACGTGCGGGTGG
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CCTTGTATTG AAACTATCCA GTTAITGTTG GGIACAITACAACCTTCTCCCTTCGGGTGA
GTCTCTTGTT
TGTGCTTTTTAAACTTAAAA
AAATTGGTCA
GTATGGACGC TGGGTTGCCT GATCGCTCTC TGCCTCTTTC GCTCGTACTG CTCCTATCTGCGTGCATCCT TAACGGGGTG CGTGTGGGTG TGGGGCGGTGCTTGTGTCTCGGTGGCTAGGAGETTGAGCGGGCTGACTAG GTGTCTGTICAGGCCAGGTATACGCCCGCTCATIGICGTGGTGTGTGCAC TIAACTGGGC ATGCATCGGG ACCTTGGGTG GTTAACGTGT ATCAACCTAT1141
ACAACTGCAAGTGGTGGATC_ACTCGGCI
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