SC/T 7218.4-2015
基本信息
标准号： SC/T 7218.4-2015
中文名称：指环虫病诊断规程 第4部分：坏鳃指环虫病
标准类别：水产行业标准(SC)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准分类号
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标准简介
SC/T 7218.4-2015 指环虫病诊断规程 第4部分：坏鳃指环虫病
SC/T7218.4-2015
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标准内容
ICS65.020.30
中华人民共和国水产行业标准
SC/T7218.4—2015
指环虫病诊断规程
第4部分：坏鳃指环虫病
Protocols for diagnosis of Dactylogyriasis-Part 4 : Infection with Dactylogyrus vastator2015-02-09发布
2015-05-01实施
中华人民共和国农业部
SC/T7218《指环虫病诊断规程》为系列标准：第1部分：小鞘指环虫病；
一第2部分：页形指坏出病；
一第3部分;舖指环虫病；
一第1部分：坏懿指环虫病；
本部分是《指环出病诊断规程》的第4部分。本部分按照GB/T1.12009给出的规则起。SC/T 7218. 4—2015
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承扭识别这些专利的贵任，本部分中农业部渔业渔政管理局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SA(/T156)归口。本部分起草单位：河北省水产养殖病害防治蓝测总站。本部分主婴起草人：曹杰英、张志华、刘文青、李全振、李凤超、康现江、赵宝华、申红旗、侯金良.T
1范围
指环虫病诊断规程
第4部分：坏鳃指环虫病
SC/T 7218. 4—2015
本部分规定了坏鳃指环虫病的流行情况与临床症状，以及坏鳃指环出（Dactytogyrusvastator)采集与固定、形态学鉴定和分了检测的方法。本部分适用于鲤、鲫、金鱼等淡水鱼类患坏鳃指环虫病的流行病学调查，诊断.监测和检疫，2规范性引用文件
下列义件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仪注日期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用十本义件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范3试剂和材料
3.1水：配置试剂用水应符合GB/T6682中一级的规定，3.2乙醇：分析纯，
3.3Tag酶：-20℃保存，不得反复冻融或温度剧烈变化。3.4dNTP:含dATP.dTTP、dGTP、dCIP各10mmol/L的混合物。3. 5上游I物 F:5′ TTATGTGGATCTGT-3'。3. 6下游引物 R:5'- AGCCGAGTGATCCACCA - 3'.3.7 DNA Marker:2 000 bp.1 000 bp.750 bp.500 bp.250 bp,100 bp.3. 8其他试剂见附录 A。
4仪器和设备
4.1体视显微镜和生物显微镜。
4.2合微尺、日微尺、显微摄影设备。4.3PCR扩增仪，免费标准下载网bzxz
4.4、紫外透射仪或凝胶成像仪。4.5电泳仪，
4.6普通冰箱和超低温冰箱。
4.7离心机和离心管。
4.8电子大平。
4.9恒温水浴箱和微波炉。
4.10微量移液器及吸头，
4.11解部盘、剪刀、镊子、解剖针。4.12载玻片、盖玻片、橡皮泥、培养皿和吸管。1
SC/T7218.4—2015
5流行情况与临床症状
5.1流行情况
坏鳃指坏虫能感染鲤（Cyprinuscurpio）、鲫（Curussusauratus）、金鱼（Carassiusaurutus）等。全国各地均Ⅲ发牛，发病高峰水温为20℃~-25℃。5.2临床症状
坏鳃指环虫主要寄升鱼的鳃部，病鱼鳃组织损伤，鳃丝肿服贫血，有斑点状淤血，鳃上有大量黏液。重度感染耐.鳃丝显著肿胀，鳃盖张开，病鱼极度不安、窜动、征游.或游动缓慢、呼吸困炸、上浮水面葡死
6指环虫采集与固定
6.1病鱼采集
捞取具有典型症状的鱼。如果现场无病原分离条件，将采集的病鱼瓜80%乙醇固定。样品封存和运输应符合SC/T7103的规定。
6.2指环虫样品的采集
针刺鱼呐，将鱼杀死。完整的取下全鳃，用小剪刀将鳃片分离，取：片鳃置于培养血中，洒水少许。川解剖针将虫体从鳃丝上剥离，用吸管吸出，放在载玻片上。在盖玻片的四角涂少量像皮泥避免盖坡片将虫体直接压碎，镊”轻压盖玻升：显微镜下观察：6.3指环虫样品的固定与保存
加滴消水到载玻片上，用吸管吸取，个虫体置丁水滴中，轻轻地盖上盖玻片·用-张滤纸在盖玻片边缘缓慢吸水.直到水基本吸干为止，加I：滴APG溶液（见A.1)到盖片边缘，直到浸满盖玻片与载玻片之问的空隙。用十形态学鉴定的虫体样品用70%乙醇保存.用于分了检测的虫体样品用95外乙醇保存。
7坏鳃指环虫的鉴定
7.1坏鳃指环虫样品的形态学鉴定显镜下指环虫前端有2对头器、2对黑色眼点，呈方形排列·此为判断指坏虫的简易特征。微调焦距即可观察到指环虫后吸器的中央大钩、联结片和边缘小钩，指坏必靠近头部端可观察到交接器，后吸器与交接器是指环虫鉴定的重要特征，根据需要用镊子轻压盖玻片以凸显几」质结构进行拍照，坏鳃指环血虫体中型，体长0.41mm-~0.86mm,宽0.1lmm~~0.18mm，中类大钩的内突外突均极发达，后吸器只有一联结片，联结片早直绒型，边缘小钩叫显区分出柄、柄轴及钩尖基突一部分。支持器部与管本部相连，丁+部分山一叉·均抱于交接管，另-叉则间前略超过普端部。40C倍显微镜下对坏鳃指环虫进行形态学鉴定，其中央人钩、联结片，交接器的形态特征参见图B.1.图B.2、图13.3环鳃指环虫的形态学测量特征指标见表1。表1坏鳃指环虫形态学指标
单位为微米
测年的特征
中共大钧全长
中大大钩本部长
中决大钩外突长
中央人钩内窦长
中决大钠尖长
边缘小钩仓长
-iiiK wcutKAca
变动范围
32.2--35. 5
27, 2-~29. 0
-2. 0 ~-13. 0
16.0~·15.0
22.0-~26.0
测的特征
联结片长
联结片宽
交接管长
支持器长
7.2坏鲲指环虫的分子检
7.2.1虫体DNA的提取
表1（续）
变动茫
3. 0~6. 0
SC/T 7218. 4—-2015
53. 1-- 44. 0
43. 5 ~-45. 5
21. 0~-29. 0
用吸臂吸取乙醇固定的虫体标本1个，充分干燥以除去多余的乙醇后，转移至0.2ml.离心管中用100μ工TE缓冲液（见A.2）浸洗2h3h，离心后弃上清，加入9L裂解液（见A.3），不经乙醇固定保存的虫体则直接加裂解液。65℃水浴30min后.95℃处理10min，该裂解产物不需要进一步纯化就可直接作为PCR的模板，也可用同等效用的试剂盒提取虫体DNA。7. 2. 2 PCR 扩增
反应在50μL体系中进行：10倍液缩缓冲液（见A.4）5ul.dNTPs2l.，引物（10mol/L）各2uL：DNA模极板2，Iag酶1，双蒸水36，反应程序为：94℃5min94℃30.54℃30s72℃1min1共25个循环；最后72℃10min。PCR反应应设置阴性对照利阳性对照。7.2.3PCR产物的电泳和测序
1×TAF电泳缓冲液（见A.5)配成1%脂糖凝胶游液，微波炉加热使琼脂糖完全溶解，待冷却至60℃:左右加入核酸染料GoldVicw(见A.6)至终浓度为3uL/lu0mL~-1μl/lcoml泥混匀后例人封固好的制胶板中.凝胶厚度在3mm~5mm，插入宽度适当的梳子。待凝胶完全凝固后，小心拔出梳子，拆去封条，将凝胶放入装有1×TAE电泳缓冲液的电泳精中，使电泳缓冲液刚好没过胶面（约1mm）然后取5uL.PCR产物与1l.的6倍上样缓冲液（见A7)混匀，用微量加样器将混合样品加训胶孔巾，以5V/cm的电压电泳，当漠酚监电泳至适当位置后，用紫外观察灯或凝胶成像仪观察并记录结果。PCR阳性产物会出现一条与坏鳃指环虫（989bp)ITS1基因扩增片段一致的目的条带，空H对照没有该用的条带。如存在目的条带,则联PCR扩增产物测序，8综合判定
8.1在显微镜下观察鲤、鲫、金鱼等鱼类的鳃丝·如果观察到出体，且符合7.1描述的坏鳃指环虫特征，则判断为坏鳃指环虫。如果形态鉴定不能完全确定指坏虫种类，可进·步川PCR方法扩增其ITS1序列，经测序后与坏鳃指坏虫的参考序列（参见附录C)逊行对比，序列相似性在99%以上者，测判断为怀鳃环虫，
8.2鲤、鲫、金鱼等鱼类感染坏鳃指环虫，日病鱼临床症状符合5.2的描述，则判定为坏鳃指坏虫病3
SC/T7218.4—2015
A. 1 APG 溶液
（规范性附录）
试剂及其配制
将饱和的苦味酸铵溶液和升油按照1：1的比例混合即成：A.2TE缓冲液 pH 9. 0
Tris - HGJ
A.3裂解液
50C mmol/L
200 mmol/.
10mmol/L
C. 45% NP 40,0. 45% Twecn -2c,100 mmo1/L EDIA 和 100 μg/ mL 蛋白酶 K.蛋而酶K用5 mmol/I TrisHCl (pH 8. 0)利 1. 5 mmol/I CaAc:配置A.410倍浓缩缓冲液（10×huffer)pH8.8Tris HCl
氯化钾(KCI）
氯化镁（MgCl）
100 mmol/L
600 mmol/L
15 mmol/1.
A55倍TAE电泳缓冲液（5×TAEhuffer）Tris
加双蒸水溶解到1 000. 0 mL.用5. 0 mol/1.的盐酸(HCl)调pH到8. 0.A.6核酸染料(Goidview)
川水配戎1C.0mg/ml.的浓缩缓冲液，用时每20.0ml.电泳液或琼脂中加1.5l-.A.76倍上样缓冲液（6×huffer）漠粉蓝100 mg-加双蒸小5mL，在空温下过夜:待溶解后由称取蔗糖25加双蒸水溶解后移人漠蓝溶薇中.摇定容垒5Cm.加人氢氧化钠（NOI藩液-滴·调节蓝色。4
-iiiKwcutKAca
附录B
(资料性附录）
指环虫的中央大钩,联结片、交接器的测量特征B.1指环虫几种几丁质结构及测量方法示意图见图 B.1。
-指环止中央大伤的几种常以形式;-发完伞的边缘小均；
维形的边缘小钩：
指环虫交接解H各部分：
中央人做会长：
“禁部长
外类长
内突长：
鹤大长：
腰带：
g—钩炎：
h钩柄；
图B.1指环虫几种几丁质结构及测量方法示意图B.2常见指环虫联结片形态及测量方法示意图见图B 2。
SC/T7218.4—2015
小钩民：
交按暂基座
安接管基部：
交接；
支持器。
SC/T7218.4—2015
说朗，
联结片的格；
联结片的起
图B.2常见指环虫联结片形态及测量方法示意图B.3坏鳃指环虫的后吸器、交接器形态特征见图B.3，
说明：
后吸幂：
交接得。
图B.3坏鳃指环虫的后吸器、交接器形态特征-iiiKwcutKAca
附录C
（资料性附录】
SC/T 7218.4—2015
坏鳃指环虫核糖体DNA内转录间隔区(ITS1)扩增产物的参考序列坏鳃指环虫核糖体LVA内转录间隔区(ITS1)扩增*物的参考序列（989bp），下划线为引物TTATGIGGAC CTCTGTCTTT GTGCCTCTGG TGCAGAGACG GAACCACAIA AGCAGGTGAAACTTCTTAGA GGAACTGGCG
CGCACGAGAAAGAGCAATAACAGOTCTGTGCCCGAAAAGG
ATGTCCGGGG
ATGCCCTAAG
AACTTGTCCG
GTAATTATCC
TACGTCCCTG
GACATTGKiAT
AICATTTAGA
ATTATCGAGT
CGGAACTGAA
CTCCAAGTTG
TACCGGCAGE
CGAATIGGTA
GGTTCGTTGC
TGGTTGCAGA
AAACGGTGCC
TACAACTGCA
CCGCACGCGT
AAAGGAITGG
TGAAACTGTT
AGGAATTCCT
CTCATGAACC
CCGTTTGTaG
ACACCGCCCG
GAGCCTTTG
GGAAGTAAAA
TCCAAATAAC
CCCIAGCCAA
GCCACCTATG
GGCTCGTGTC
ACGIGICGTG
AACCTTCTCC
TGGTTTGAAG
CTCGCCTGAA
CGGTTCACGC
GTCGTAACAA
AAACIGCGCA
CGATGCTACT GAGCATGATI
GCIACAATGA
CAATCATCGT
AGTAAGCACA
TCGCTACTAC
TGCTTTGGT
GGTTTCCGTA
GICIGCGGTG
ATTGAGGTTT
CGTGACTGGG
AGTCATAAGC
GGATTGAATG
TGAGAAGATG
GGTGAACCTG
CGGGTCAGAA
AGICGGCCTT
GGATCGTGIC
CACCTCGGGA
GTACAGAAATGTACGGTGCGGTCCTGTCAGGTTCATCC'GC
CAGICIGGGC
GATCGGCCGT
CGACCCACTG
GGICIGATGAAACCGTCA
TIGFGCTGAT
GTTTAGCAAG
TCCGAACTTG
CGGAAGGATC
TCTGGAGTTG
GGCTTACGCC
TAACAGTTCT
CTGGGCTGTG
GTTTGGTCT
CTTCGGGTGA GTCCTGTTTG
TGCTTTTCAT
TCATGTCCTI
GTGCTGGAAG
CGACC'CTGCT
AGTGGTGGAT CACTCGGCT
TAGCCACGT
TCTCTGGCCT
TGTTCACGCA
CGGCTGGTAA
GTCTTGGTGA
AGCTAAACAT
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中华人民共和国水产行业标准
SC/T7218.4—2015
指环虫病诊断规程
第4部分：坏鳃指环虫病
Protocols for diagnosis of Dactylogyriasis-Part 4 : Infection with Dactylogyrus vastator2015-02-09发布
2015-05-01实施
中华人民共和国农业部
SC/T7218《指环虫病诊断规程》为系列标准：第1部分：小鞘指环虫病；
一第2部分：页形指坏出病；
一第3部分;舖指环虫病；
一第1部分：坏懿指环虫病；
本部分是《指环出病诊断规程》的第4部分。本部分按照GB/T1.12009给出的规则起。SC/T 7218. 4—2015
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承扭识别这些专利的贵任，本部分中农业部渔业渔政管理局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SA(/T156)归口。本部分起草单位：河北省水产养殖病害防治蓝测总站。本部分主婴起草人：曹杰英、张志华、刘文青、李全振、李凤超、康现江、赵宝华、申红旗、侯金良.T
1范围
指环虫病诊断规程
第4部分：坏鳃指环虫病
SC/T 7218. 4—2015
本部分规定了坏鳃指环虫病的流行情况与临床症状，以及坏鳃指环出（Dactytogyrusvastator)采集与固定、形态学鉴定和分了检测的方法。本部分适用于鲤、鲫、金鱼等淡水鱼类患坏鳃指环虫病的流行病学调查，诊断.监测和检疫，2规范性引用文件
下列义件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仪注日期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用十本义件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范3试剂和材料
3.1水：配置试剂用水应符合GB/T6682中一级的规定，3.2乙醇：分析纯，
3.3Tag酶：-20℃保存，不得反复冻融或温度剧烈变化。3.4dNTP:含dATP.dTTP、dGTP、dCIP各10mmol/L的混合物。3. 5上游I物 F:5′ TTATGTGGATCTGT-3'。3. 6下游引物 R:5'- AGCCGAGTGATCCACCA - 3'.3.7 DNA Marker:2 000 bp.1 000 bp.750 bp.500 bp.250 bp,100 bp.3. 8其他试剂见附录 A。
4仪器和设备
4.1体视显微镜和生物显微镜。
4.2合微尺、日微尺、显微摄影设备。4.3PCR扩增仪，免费标准下载网bzxz
4.4、紫外透射仪或凝胶成像仪。4.5电泳仪，
4.6普通冰箱和超低温冰箱。
4.7离心机和离心管。
4.8电子大平。
4.9恒温水浴箱和微波炉。
4.10微量移液器及吸头，
4.11解部盘、剪刀、镊子、解剖针。4.12载玻片、盖玻片、橡皮泥、培养皿和吸管。1
SC/T7218.4—2015
5流行情况与临床症状
5.1流行情况
坏鳃指坏虫能感染鲤（Cyprinuscurpio）、鲫（Curussusauratus）、金鱼（Carassiusaurutus）等。全国各地均Ⅲ发牛，发病高峰水温为20℃~-25℃。5.2临床症状
坏鳃指环虫主要寄升鱼的鳃部，病鱼鳃组织损伤，鳃丝肿服贫血，有斑点状淤血，鳃上有大量黏液。重度感染耐.鳃丝显著肿胀，鳃盖张开，病鱼极度不安、窜动、征游.或游动缓慢、呼吸困炸、上浮水面葡死
6指环虫采集与固定
6.1病鱼采集
捞取具有典型症状的鱼。如果现场无病原分离条件，将采集的病鱼瓜80%乙醇固定。样品封存和运输应符合SC/T7103的规定。
6.2指环虫样品的采集
针刺鱼呐，将鱼杀死。完整的取下全鳃，用小剪刀将鳃片分离，取：片鳃置于培养血中，洒水少许。川解剖针将虫体从鳃丝上剥离，用吸管吸出，放在载玻片上。在盖玻片的四角涂少量像皮泥避免盖坡片将虫体直接压碎，镊”轻压盖玻升：显微镜下观察：6.3指环虫样品的固定与保存
加滴消水到载玻片上，用吸管吸取，个虫体置丁水滴中，轻轻地盖上盖玻片·用-张滤纸在盖玻片边缘缓慢吸水.直到水基本吸干为止，加I：滴APG溶液（见A.1)到盖片边缘，直到浸满盖玻片与载玻片之问的空隙。用十形态学鉴定的虫体样品用70%乙醇保存.用于分了检测的虫体样品用95外乙醇保存。
7坏鳃指环虫的鉴定
7.1坏鳃指环虫样品的形态学鉴定显镜下指环虫前端有2对头器、2对黑色眼点，呈方形排列·此为判断指坏虫的简易特征。微调焦距即可观察到指环虫后吸器的中央大钩、联结片和边缘小钩，指坏必靠近头部端可观察到交接器，后吸器与交接器是指环虫鉴定的重要特征，根据需要用镊子轻压盖玻片以凸显几」质结构进行拍照，坏鳃指环血虫体中型，体长0.41mm-~0.86mm,宽0.1lmm~~0.18mm，中类大钩的内突外突均极发达，后吸器只有一联结片，联结片早直绒型，边缘小钩叫显区分出柄、柄轴及钩尖基突一部分。支持器部与管本部相连，丁+部分山一叉·均抱于交接管，另-叉则间前略超过普端部。40C倍显微镜下对坏鳃指环虫进行形态学鉴定，其中央人钩、联结片，交接器的形态特征参见图B.1.图B.2、图13.3环鳃指环虫的形态学测量特征指标见表1。表1坏鳃指环虫形态学指标
单位为微米
测年的特征
中共大钧全长
中大大钩本部长
中决大钩外突长
中央人钩内窦长
中决大钠尖长
边缘小钩仓长
-iiiK wcutKAca
变动范围
32.2--35. 5
27, 2-~29. 0
-2. 0 ~-13. 0
16.0~·15.0
22.0-~26.0
测的特征
联结片长
联结片宽
交接管长
支持器长
7.2坏鲲指环虫的分子检
7.2.1虫体DNA的提取
表1（续）
变动茫
3. 0~6. 0
SC/T 7218. 4—-2015
53. 1-- 44. 0
43. 5 ~-45. 5
21. 0~-29. 0
用吸臂吸取乙醇固定的虫体标本1个，充分干燥以除去多余的乙醇后，转移至0.2ml.离心管中用100μ工TE缓冲液（见A.2）浸洗2h3h，离心后弃上清，加入9L裂解液（见A.3），不经乙醇固定保存的虫体则直接加裂解液。65℃水浴30min后.95℃处理10min，该裂解产物不需要进一步纯化就可直接作为PCR的模板，也可用同等效用的试剂盒提取虫体DNA。7. 2. 2 PCR 扩增
反应在50μL体系中进行：10倍液缩缓冲液（见A.4）5ul.dNTPs2l.，引物（10mol/L）各2uL：DNA模极板2，Iag酶1，双蒸水36，反应程序为：94℃5min94℃30.54℃30s72℃1min1共25个循环；最后72℃10min。PCR反应应设置阴性对照利阳性对照。7.2.3PCR产物的电泳和测序
1×TAF电泳缓冲液（见A.5)配成1%脂糖凝胶游液，微波炉加热使琼脂糖完全溶解，待冷却至60℃:左右加入核酸染料GoldVicw(见A.6)至终浓度为3uL/lu0mL~-1μl/lcoml泥混匀后例人封固好的制胶板中.凝胶厚度在3mm~5mm，插入宽度适当的梳子。待凝胶完全凝固后，小心拔出梳子，拆去封条，将凝胶放入装有1×TAE电泳缓冲液的电泳精中，使电泳缓冲液刚好没过胶面（约1mm）然后取5uL.PCR产物与1l.的6倍上样缓冲液（见A7)混匀，用微量加样器将混合样品加训胶孔巾，以5V/cm的电压电泳，当漠酚监电泳至适当位置后，用紫外观察灯或凝胶成像仪观察并记录结果。PCR阳性产物会出现一条与坏鳃指环虫（989bp)ITS1基因扩增片段一致的目的条带，空H对照没有该用的条带。如存在目的条带,则联PCR扩增产物测序，8综合判定
8.1在显微镜下观察鲤、鲫、金鱼等鱼类的鳃丝·如果观察到出体，且符合7.1描述的坏鳃指环虫特征，则判断为坏鳃指环虫。如果形态鉴定不能完全确定指坏虫种类，可进·步川PCR方法扩增其ITS1序列，经测序后与坏鳃指坏虫的参考序列（参见附录C)逊行对比，序列相似性在99%以上者，测判断为怀鳃环虫，
8.2鲤、鲫、金鱼等鱼类感染坏鳃指环虫，日病鱼临床症状符合5.2的描述，则判定为坏鳃指坏虫病3
SC/T7218.4—2015
A. 1 APG 溶液
（规范性附录）
试剂及其配制
将饱和的苦味酸铵溶液和升油按照1：1的比例混合即成：A.2TE缓冲液 pH 9. 0
Tris - HGJ
A.3裂解液
50C mmol/L
200 mmol/.
10mmol/L
C. 45% NP 40,0. 45% Twecn -2c,100 mmo1/L EDIA 和 100 μg/ mL 蛋白酶 K.蛋而酶K用5 mmol/I TrisHCl (pH 8. 0)利 1. 5 mmol/I CaAc:配置A.410倍浓缩缓冲液（10×huffer)pH8.8Tris HCl
氯化钾(KCI）
氯化镁（MgCl）
100 mmol/L
600 mmol/L
15 mmol/1.
A55倍TAE电泳缓冲液（5×TAEhuffer）Tris
加双蒸水溶解到1 000. 0 mL.用5. 0 mol/1.的盐酸(HCl)调pH到8. 0.A.6核酸染料(Goidview)
川水配戎1C.0mg/ml.的浓缩缓冲液，用时每20.0ml.电泳液或琼脂中加1.5l-.A.76倍上样缓冲液（6×huffer）漠粉蓝100 mg-加双蒸小5mL，在空温下过夜:待溶解后由称取蔗糖25加双蒸水溶解后移人漠蓝溶薇中.摇定容垒5Cm.加人氢氧化钠（NOI藩液-滴·调节蓝色。4
-iiiKwcutKAca
附录B
(资料性附录）
指环虫的中央大钩,联结片、交接器的测量特征B.1指环虫几种几丁质结构及测量方法示意图见图 B.1。
-指环止中央大伤的几种常以形式;-发完伞的边缘小均；
维形的边缘小钩：
指环虫交接解H各部分：
中央人做会长：
“禁部长
外类长
内突长：
鹤大长：
腰带：
g—钩炎：
h钩柄；
图B.1指环虫几种几丁质结构及测量方法示意图B.2常见指环虫联结片形态及测量方法示意图见图B 2。
SC/T7218.4—2015
小钩民：
交按暂基座
安接管基部：
交接；
支持器。
SC/T7218.4—2015
说朗，
联结片的格；
联结片的起
图B.2常见指环虫联结片形态及测量方法示意图B.3坏鳃指环虫的后吸器、交接器形态特征见图B.3，
说明：
后吸幂：
交接得。
图B.3坏鳃指环虫的后吸器、交接器形态特征-iiiKwcutKAca
附录C
（资料性附录】
SC/T 7218.4—2015
坏鳃指环虫核糖体DNA内转录间隔区(ITS1)扩增产物的参考序列坏鳃指环虫核糖体LVA内转录间隔区(ITS1)扩增*物的参考序列（989bp），下划线为引物TTATGIGGAC CTCTGTCTTT GTGCCTCTGG TGCAGAGACG GAACCACAIA AGCAGGTGAAACTTCTTAGA GGAACTGGCG
CGCACGAGAAAGAGCAATAACAGOTCTGTGCCCGAAAAGG
ATGTCCGGGG
ATGCCCTAAG
AACTTGTCCG
GTAATTATCC
TACGTCCCTG
GACATTGKiAT
AICATTTAGA
ATTATCGAGT
CGGAACTGAA
CTCCAAGTTG
TACCGGCAGE
CGAATIGGTA
GGTTCGTTGC
TGGTTGCAGA
AAACGGTGCC
TACAACTGCA
CCGCACGCGT
AAAGGAITGG
TGAAACTGTT
AGGAATTCCT
CTCATGAACC
CCGTTTGTaG
ACACCGCCCG
GAGCCTTTG
GGAAGTAAAA
TCCAAATAAC
CCCIAGCCAA
GCCACCTATG
GGCTCGTGTC
ACGIGICGTG
AACCTTCTCC
TGGTTTGAAG
CTCGCCTGAA
CGGTTCACGC
GTCGTAACAA
AAACIGCGCA
CGATGCTACT GAGCATGATI
GCIACAATGA
CAATCATCGT
AGTAAGCACA
TCGCTACTAC
TGCTTTGGT
GGTTTCCGTA
GICIGCGGTG
ATTGAGGTTT
CGTGACTGGG
AGTCATAAGC
GGATTGAATG
TGAGAAGATG
GGTGAACCTG
CGGGTCAGAA
AGICGGCCTT
GGATCGTGIC
CACCTCGGGA
GTACAGAAATGTACGGTGCGGTCCTGTCAGGTTCATCC'GC
CAGICIGGGC
GATCGGCCGT
CGACCCACTG
GGICIGATGAAACCGTCA
TIGFGCTGAT
GTTTAGCAAG
TCCGAACTTG
CGGAAGGATC
TCTGGAGTTG
GGCTTACGCC
TAACAGTTCT
CTGGGCTGTG
GTTTGGTCT
CTTCGGGTGA GTCCTGTTTG
TGCTTTTCAT
TCATGTCCTI
GTGCTGGAAG
CGACC'CTGCT
AGTGGTGGAT CACTCGGCT
TAGCCACGT
TCTCTGGCCT
TGTTCACGCA
CGGCTGGTAA
GTCTTGGTGA
AGCTAAACAT
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