GB 4789.2-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 GB4789.2-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB4789.2—2016
食品安全国家标准
食品微生物学检验
2016-12-23发布
菌落总数测定
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局
本标准代替GB4789.2—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验
GB4789.2—2016
菌落总数测定》。
1范围
食品安全国家标准
食品微生物学检验
菌落总数测定
本标准规定了食品中菌落总数（Aerobicplate count)的测定方法。本标准适用于食品中菌落总数的测定。2
术语和定义
菌落总数
aerobic plate count
GB4789.2—2016
食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36℃±1℃30℃±1℃。3.1
冰箱：2℃~5℃。
恒温水浴箱：46℃土1℃。
天平：感量为0.1g。
均质器。
振荡器。
无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶：容量250mL、500mL无菌培养Ⅲl：直径90mm。
pH计或pH比色管或精密pH试纸。放大镜或/和菌落计数器。
培养基和试剂
平板计数琼脂培养基：见A,1。
磷酸盐缓冲液：见A.2。
无菌生理盐水：见A.3。
检验程序
菌落总数的检验程序见图1。
操作步骤
6.1样品的稀释
25g（mL）样品+225mL矫释液，均质t
10倍系列稀释
选扑2个~3个适让稀释度的样品均液各取1m分别1入无菌培养血中
每入15~20
平板计数琼脂培养基，混句
计数各平板菌格数
印算菌葬总数
菌落总数的检验程序
GB4789.2—2016
6.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，或放人盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品匀液。6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。6.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。GB 4789.2—2016
6.1.4按6.1.3操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
6.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加人两个无菌平皿内作空白对照6.1.6及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃土1℃恒温水浴箱中保温)倾注平血，并转动平血使其混合均匀。6.2培养
6.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1培养48h士2h。水产品30℃±1℃培养72h士3h。6.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养6.3菌落计数
6.3.1可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示6.3.2选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，天于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.3.3其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
6.3.4当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。7结果与报告
7.1菌落总数的计算方法
7.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。7.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时.按式（1)计算：Ec
(n1+0.1n2)d
式中：
样品中菌落数；
ZC—平板（含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和；n
示例：
第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；第二稀释度（高稀释倍数)平板个数：稀释因子(第一稀释度)。
稀释度
菌落数(CFU)
1：100（第一稀释度）
....(1)
1：1000（第二稀释度）
232+244+33+35
（ni+0.1n2)d[2+(0.1×2)]×10-20.022上述数据按7.2.2数字修约后，表示为25000或2.5×104。-24727
GB4789.2—2016
7.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算7.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算7.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.2菌落总数的报告
7.2.1菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。7.2.2菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用\四舍五人”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五人”原则修约后，采用两位有效数字。7.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。7.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效7.2.5称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告4
附录A
培养基和试剂
平板计数琼脂（platecountagar，PCA）培养基A.1
胰蛋白陈
酵母浸膏
葡萄糖
蒸馏水
1000mL
GB4789.2—2016
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH至7.0土0.2。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。www.bzxz.net
磷酸盐缓冲液
磷酸二氢钾（KH,PO.）
蒸馏水
贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2.用蒸馏水稀释至1000mL后存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。
无菌生理盐水
氯化钠
蒸馏水
1000mL
称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min5
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