GB 5009.222-2016
基本信息
标准号： GB 5009.222-2016
中文名称：食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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标准简介
GB 5009.222-2016 食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定
GB5009.222-2016
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标准内容
中华人民共和国国家标准
GB5009.222—2016
食品安全国家标准
食品中桔青霉素的测定
2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局
GB 5009.222—2016
本标准代替GB/T5009.222—2008《红曲类产品中桔青霉素的测定》、SN/T2426—2010《进出口粮谷中桔霉素含量检测方法液相色谱法》和SN/T2916—2011《出口食品中桔霉素的测定方法免疫
亲和柱净化-高效液相色谱法》。本标准与GB/T5009.222—2008相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中桔青霉素的测定”；增加了净化步骤；
一增加了适用范围。
1范围
食品安全国家标准
食品中桔青霉素的测定
本标准规定了食品中秸青素的测定方法GB5009.222—2016
本标准第一法适用于大米、玉米、辣椒、红曲类产品中桔青霉素的测定，第二法适用于大米、大麦、燕麦、小麦中桔青霉素的测定。
第一法免疫亲和柱净化-高效液相色谱法2原理
试样中的桔青霉素用甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，用免疫亲和柱净化，采用液相色谱结合荧光检测器测定桔青霉素的含量，外标法定量。3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB6682规定的二级水3.1试剂
甲醇（CH.OH)：色谱纯。
乙睛（CHCN）：色谱纯
3.1.3磷酸（H,PO4）：色谱纯。3.1.4冰乙酸（CH,O，）：色谱纯氢氧化钠(NaOH)。
吐温20（CssH4O26）。
氯化钠(NaCI)。
磷酸氢二钠（NazHPO,）。
磷酸二氢钾（KH,PO）。
氯化钾（KC1)。
2试剂配制
3.2.1氢氧化钠溶液（2mol/L)：称取80.0g固体氢氧化钠，溶于1L水中。3.2.2磷酸溶液（10mmol/L，pH7.5）：准确移取1.376mL磷酸加水定容至2000mL用2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7.5。
3.2.3磷酸溶液（10mmol/L.pH2.5）：准确移取1.376mL磷酸加水定容至2000mL，用2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至2.5。
3.2.4PBS缓冲溶液：称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，用水溶解，1
调节pH至7.0.用水定容至1000mL。GB5009.222—2016
3.2.50.1%吐温20-PBS溶液：准确移取1mL吐温20以PBS缓冲溶液定容至1000mL。3.2.60.1%磷酸溶液：准确移取1mL磷酸加水定容至1000mL。3.2.7洗脱液I：甲醇-10mmol/L磷酸溶液（pH2.5)（70+30）。3.2.8洗脱液Ⅱ：甲醇-0.1%磷酸溶液（70+30）。3.3标准品
桔青霉素（CHO，，CAS号：518-75-2），纯度≥99.0%。或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液：准确称取一定量的桔青霉素标准品，以甲醇溶解并定容至10.0mL作为标准储备液.浓度为100ug/mL，于4℃下保存。3.4.2标准中间液：准确移取1.0mL桔青霉素标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为10μg/mL，于4℃下保存。
3.4.3基质标准工作液：根据需要，取适量的标准中间液，用空白样品提取液配成不同浓度的基质标准工作液，现用现配。
3.5材料
3.5.1桔青霉素免疫亲和柱：柱体积3mL,最大柱容量20ng，或等效柱。3.5.2玻璃纤维滤纸：直径11cm，孔径1.5μm。4仪器和设备
高效液相色谱仪，配荧光检测器。分析天平：感量0.0001g和0.01g。4.2
高速均质器：≥12000r/min。
混匀器。
5分析步骤
5.1提取
5.1.1大米、玉米、辣椒
称取经充分粉碎均质试样10.0g（精确至0.1g）于150mL具塞锥形瓶中.加入50mL甲醇-水（70十30）提取液，以高速均质器高速均质提取2min，过滤提取液，移取1.0mL滤液，置于另一干净的容器中，加人49mL10mmol/L磷酸溶液（pH7.5)稀释、混匀；以玻璃纤滤纸过滤待免疫亲和柱净化。5.1.2红曲及其制品
称取经充分粉碎均质试样1.0g（精确至0.1g）于50mL具塞锥形瓶中，加人20mL甲醇-水（70十30）提取液，以高速均质器高速均质提取2min，过滤提取液，移取1.0mL滤液，置于另二干净的容器中，加入39mLPBS缓冲溶液稀释、混匀；以玻璃纤滤纸过滤待免疫亲和柱净化。2
5.2净化
5.2.1大米、玉米、辣椒
GB5009.222—2016
将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，准确移取10.0mL（相当于0.04g试样）上述澄清滤液过免疫亲和柱，以1滴/s～2滴/s的流速全部通过亲和柱；加入5mL10mmol/L磷酸（pH7.5）以1滴/s~2滴/s的流速淋洗柱子，直至空气进人到亲和柱中，弃去全部流出液。准确加人1.0mL洗脱液I进行洗脱，洗脱流速为1滴/s～2滴/s。收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。5.2.2红曲及其制品
将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，准确移取10.0mL上述澄清滤液过免疫亲和柱，以1滴/s~2滴/s的流速全部通过亲和柱；加入10mL0.1%吐温20-PBS溶液，以1滴/s～2滴/s的流速淋洗柱子，直至空气进人到亲和柱中，弃去全部流出液。准确加人1.0mL洗脱液Ⅱ（红曲及其制品）进行洗脱，洗脱流速为1滴/s～2滴/s。收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。5.3
3空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。5.4测定
液相色谱参考条件
大米、玉米、辣椒
液相色谱分析条件列出如下：
色谱柱：Clg柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm，或等效柱；a）8
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
进样量：50μL；
检测条件：激发波长350nm，发射波长500nm；流动相A液：乙，流动相B液：10mmol/L磷酸（pH2.5）。流动相及梯度洗脱条件见表1。
表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min
2红曲及其制品
液相色谱分析条件列出如下：
流动相A液/%
a）色谱柱：Ci：柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm，或等效柱；流动相B液/%
柱温：30℃；
流速：0.7mL/min；
进样量：50μL；
检测条件：激发波长350nm，发射波长500nm；流动相A液：乙，流动相B液：0.1%磷酸。流动相及梯度洗脱条件见表2、
流动相及梯度洗脱条件
时间/min
标准曲线的制作
流动相A液/%
GB5009.222—2016
流动相B液/%
配制0.0ng/mL1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL20.0ng/mL6个浓度的基质标准工作液。在仪器最佳工作条件下，用基质标准工作溶液分别进样，以相应的桔青霉素的色谱峰的峰面积为纵坐标，以基质标准工作溶液中桔青霉素的浓度为横坐标，绘制标准曲线。桔青霉素标准的色谱图参见图A.1和图A.2。5.4.3试样溶液的测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪，测定相应的峰面积。由标准曲线得到试样溶液中桔青霉素的浓度。
分析结果的表述
试样中桔青霉素含量按式(1)计算：式中：
x-exvxf
试样中桔青霉素的含量，单位为微克每千克（ug/kg）；样液中桔青霉素的浓度，单位为微克每升（ug/L)；一定容体积，单位为毫升（mL）；V
样液稀释倍数；
样液所代表的试样量，单位为克（g）。计算结果需扣除空白值。计算结果保留两位有效数字。精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。.（1)
8其他
GB5009.222—2016
本方法中大米、玉米、辣椒粉样品的检出限和定量限分别为8g/kg和25ug/kg；红曲及其制品的检出限和定量限分别为25ug/kg和80ug/kg第二法C18固相萃取小柱净化-高效液相色谱法9原理
用乙睛-异丙醇-水的混合溶液提取试样中桔青霉素，C：固相萃取小柱净化，用配荧光检测器的液相色谱仪测定，外标法定量
试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB6682规定的二级水。10.1试剂
异丙醇(C,HO)：色谱纯
乙睛（CH,CN）：色谱纯。
磷酸（H,PO,）：优级纯。
甲醇(CH,OH)。
10.2试剂配制
提取溶剂：乙-异丙醇-水（35+10+55）.用磷酸调pH为1.5。10.2.2
磷酸溶液（0.08mol/L）：取5.6mL磷酸，以水定容至1L。流动相：乙腈-异丙醇-磷酸溶液（35十10十55）。10.3标准品
桔青霉素（ClH14O，，CAS号：518-75-2），纯度≥99%。或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
10.4标准溶液配制
10.4.1桔青霉素标准储备液：称取适量桔青霉素标准物质，用乙睛溶解并定容至1.0mg/mL，0℃~4℃保存
2桔青霉素标准工作液：根据需要用流动相将标准储备液稀释成25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、10.4.2
500ng/mL、1000ng/mL的标准工作溶液。10.5材料
10.5.1Cis固相萃取柱：填料500mg，柱体积3mL，或等效柱玻璃纤维滤纸：直径11cm，孔径1.5um。10.5.2
仪器和设备
11.1高效液相色谱仪：配有荧光检测器。11.2振荡器。
11.3离心机：≥6500r/min。wwW.bzxz.Net
11.4真空固相萃取装置。
氮吹仪
分析天平：感量0.0001g和0.01g。分析步骤
12.1提取
GB5009.222—2016
取样品500g，用粉碎机粉碎并通过830um圆孔筛，混匀，分成2份，装人洁净容器内，密封保存。称取试样约5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加10mL提取溶剂（10.2.1），在振荡器上振荡提取30min。以3500r/min离心4min，上清液转人另一离心管中。在残渣中再加入5mL提取溶剂（10.2.1），重复上述操作，合并上清液。在提取液中加水至40mL，并用磷酸调pH为1.5.过玻璃纤维滤纸，待净化。
12.2净化
将上述溶液过预淋洗好的C1固相萃取柱，用5mL水淋洗柱子。待淋洗液全部流出柱子后，减压抽干3min。用10mL甲醇以1.0mL/min的速度洗脱，收集全部洗脱液，在40℃下，N，吹干，再以1.0mL流动相溶解，过0.22um的有机相微孔滤膜，供液相色谱测定。12.3空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行12.4测定
液相色谱参考条件
色谱柱：C柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或等效者；b)
流动相：乙腈-异丙醇-磷酸溶液（35+10十55）；流速：1.0mL/min；
进样量：50μL；
柱温：28℃；
检测波长：激发波长331nm，发射波长500nm。色谱测定
根据样液中被测桔青霉素含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作液和样液中桔青霉素响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，桔青霉素保留时间约为9.1min，标准物质色谱图见图A.3。13
分析结果的表述
试样中秸青霉素含量按式（2）计算：6
式中：
X——试样中桔青霉素含量，单位为微克每千克（μg/kg）；A--样液中桔青霉素的峰面积；
标准工作液中桔青霉素的浓度，单位为微克每升（ug/L)；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；A
标准工作液中桔青霉素的峰面积；m
最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。GB5009.222—2016
.（2)
计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。14精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。5其他
方法检出限为3μg/kg，定量限为10μg/kg。附录A
桔青霉素标准的液相色谱图
桔青霉素标准的液相色谱图见图A.1～图A.3。LC
GB 5009.222—2016
图A.1桔青霉素标准溶液（100ng/mL）液相色谱图（玉米基质标准工作液）1.6
图A.2桔青霉素标准溶液（100ng/mL）液相色谱图（红曲基质标准工作液）min
桔青霉素标准溶液（100ng/mL）的液相色谱图图A.3
GB5009.222—2016
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食品安全国家标准
食品中桔青霉素的测定
2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局
GB 5009.222—2016
本标准代替GB/T5009.222—2008《红曲类产品中桔青霉素的测定》、SN/T2426—2010《进出口粮谷中桔霉素含量检测方法液相色谱法》和SN/T2916—2011《出口食品中桔霉素的测定方法免疫
亲和柱净化-高效液相色谱法》。本标准与GB/T5009.222—2008相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中桔青霉素的测定”；增加了净化步骤；
一增加了适用范围。
1范围
食品安全国家标准
食品中桔青霉素的测定
本标准规定了食品中秸青素的测定方法GB5009.222—2016
本标准第一法适用于大米、玉米、辣椒、红曲类产品中桔青霉素的测定，第二法适用于大米、大麦、燕麦、小麦中桔青霉素的测定。
第一法免疫亲和柱净化-高效液相色谱法2原理
试样中的桔青霉素用甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，用免疫亲和柱净化，采用液相色谱结合荧光检测器测定桔青霉素的含量，外标法定量。3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB6682规定的二级水3.1试剂
甲醇（CH.OH)：色谱纯。
乙睛（CHCN）：色谱纯
3.1.3磷酸（H,PO4）：色谱纯。3.1.4冰乙酸（CH,O，）：色谱纯氢氧化钠(NaOH)。
吐温20（CssH4O26）。
氯化钠(NaCI)。
磷酸氢二钠（NazHPO,）。
磷酸二氢钾（KH,PO）。
氯化钾（KC1)。
2试剂配制
3.2.1氢氧化钠溶液（2mol/L)：称取80.0g固体氢氧化钠，溶于1L水中。3.2.2磷酸溶液（10mmol/L，pH7.5）：准确移取1.376mL磷酸加水定容至2000mL用2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7.5。
3.2.3磷酸溶液（10mmol/L.pH2.5）：准确移取1.376mL磷酸加水定容至2000mL，用2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至2.5。
3.2.4PBS缓冲溶液：称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，用水溶解，1
调节pH至7.0.用水定容至1000mL。GB5009.222—2016
3.2.50.1%吐温20-PBS溶液：准确移取1mL吐温20以PBS缓冲溶液定容至1000mL。3.2.60.1%磷酸溶液：准确移取1mL磷酸加水定容至1000mL。3.2.7洗脱液I：甲醇-10mmol/L磷酸溶液（pH2.5)（70+30）。3.2.8洗脱液Ⅱ：甲醇-0.1%磷酸溶液（70+30）。3.3标准品
桔青霉素（CHO，，CAS号：518-75-2），纯度≥99.0%。或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液：准确称取一定量的桔青霉素标准品，以甲醇溶解并定容至10.0mL作为标准储备液.浓度为100ug/mL，于4℃下保存。3.4.2标准中间液：准确移取1.0mL桔青霉素标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为10μg/mL，于4℃下保存。
3.4.3基质标准工作液：根据需要，取适量的标准中间液，用空白样品提取液配成不同浓度的基质标准工作液，现用现配。
3.5材料
3.5.1桔青霉素免疫亲和柱：柱体积3mL,最大柱容量20ng，或等效柱。3.5.2玻璃纤维滤纸：直径11cm，孔径1.5μm。4仪器和设备
高效液相色谱仪，配荧光检测器。分析天平：感量0.0001g和0.01g。4.2
高速均质器：≥12000r/min。
混匀器。
5分析步骤
5.1提取
5.1.1大米、玉米、辣椒
称取经充分粉碎均质试样10.0g（精确至0.1g）于150mL具塞锥形瓶中.加入50mL甲醇-水（70十30）提取液，以高速均质器高速均质提取2min，过滤提取液，移取1.0mL滤液，置于另一干净的容器中，加人49mL10mmol/L磷酸溶液（pH7.5)稀释、混匀；以玻璃纤滤纸过滤待免疫亲和柱净化。5.1.2红曲及其制品
称取经充分粉碎均质试样1.0g（精确至0.1g）于50mL具塞锥形瓶中，加人20mL甲醇-水（70十30）提取液，以高速均质器高速均质提取2min，过滤提取液，移取1.0mL滤液，置于另二干净的容器中，加入39mLPBS缓冲溶液稀释、混匀；以玻璃纤滤纸过滤待免疫亲和柱净化。2
5.2净化
5.2.1大米、玉米、辣椒
GB5009.222—2016
将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，准确移取10.0mL（相当于0.04g试样）上述澄清滤液过免疫亲和柱，以1滴/s～2滴/s的流速全部通过亲和柱；加入5mL10mmol/L磷酸（pH7.5）以1滴/s~2滴/s的流速淋洗柱子，直至空气进人到亲和柱中，弃去全部流出液。准确加人1.0mL洗脱液I进行洗脱，洗脱流速为1滴/s～2滴/s。收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。5.2.2红曲及其制品
将免疫亲和柱连接于10mL玻璃针筒下，准确移取10.0mL上述澄清滤液过免疫亲和柱，以1滴/s~2滴/s的流速全部通过亲和柱；加入10mL0.1%吐温20-PBS溶液，以1滴/s～2滴/s的流速淋洗柱子，直至空气进人到亲和柱中，弃去全部流出液。准确加人1.0mL洗脱液Ⅱ（红曲及其制品）进行洗脱，洗脱流速为1滴/s～2滴/s。收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。5.3
3空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。5.4测定
液相色谱参考条件
大米、玉米、辣椒
液相色谱分析条件列出如下：
色谱柱：Clg柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm，或等效柱；a）8
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
进样量：50μL；
检测条件：激发波长350nm，发射波长500nm；流动相A液：乙，流动相B液：10mmol/L磷酸（pH2.5）。流动相及梯度洗脱条件见表1。
表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min
2红曲及其制品
液相色谱分析条件列出如下：
流动相A液/%
a）色谱柱：Ci：柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm，或等效柱；流动相B液/%
柱温：30℃；
流速：0.7mL/min；
进样量：50μL；
检测条件：激发波长350nm，发射波长500nm；流动相A液：乙，流动相B液：0.1%磷酸。流动相及梯度洗脱条件见表2、
流动相及梯度洗脱条件
时间/min
标准曲线的制作
流动相A液/%
GB5009.222—2016
流动相B液/%
配制0.0ng/mL1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL20.0ng/mL6个浓度的基质标准工作液。在仪器最佳工作条件下，用基质标准工作溶液分别进样，以相应的桔青霉素的色谱峰的峰面积为纵坐标，以基质标准工作溶液中桔青霉素的浓度为横坐标，绘制标准曲线。桔青霉素标准的色谱图参见图A.1和图A.2。5.4.3试样溶液的测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪，测定相应的峰面积。由标准曲线得到试样溶液中桔青霉素的浓度。
分析结果的表述
试样中桔青霉素含量按式(1)计算：式中：
x-exvxf
试样中桔青霉素的含量，单位为微克每千克（ug/kg）；样液中桔青霉素的浓度，单位为微克每升（ug/L)；一定容体积，单位为毫升（mL）；V
样液稀释倍数；
样液所代表的试样量，单位为克（g）。计算结果需扣除空白值。计算结果保留两位有效数字。精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。.（1)
8其他
GB5009.222—2016
本方法中大米、玉米、辣椒粉样品的检出限和定量限分别为8g/kg和25ug/kg；红曲及其制品的检出限和定量限分别为25ug/kg和80ug/kg第二法C18固相萃取小柱净化-高效液相色谱法9原理
用乙睛-异丙醇-水的混合溶液提取试样中桔青霉素，C：固相萃取小柱净化，用配荧光检测器的液相色谱仪测定，外标法定量
试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB6682规定的二级水。10.1试剂
异丙醇(C,HO)：色谱纯
乙睛（CH,CN）：色谱纯。
磷酸（H,PO,）：优级纯。
甲醇(CH,OH)。
10.2试剂配制
提取溶剂：乙-异丙醇-水（35+10+55）.用磷酸调pH为1.5。10.2.2
磷酸溶液（0.08mol/L）：取5.6mL磷酸，以水定容至1L。流动相：乙腈-异丙醇-磷酸溶液（35十10十55）。10.3标准品
桔青霉素（ClH14O，，CAS号：518-75-2），纯度≥99%。或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
10.4标准溶液配制
10.4.1桔青霉素标准储备液：称取适量桔青霉素标准物质，用乙睛溶解并定容至1.0mg/mL，0℃~4℃保存
2桔青霉素标准工作液：根据需要用流动相将标准储备液稀释成25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、10.4.2
500ng/mL、1000ng/mL的标准工作溶液。10.5材料
10.5.1Cis固相萃取柱：填料500mg，柱体积3mL，或等效柱玻璃纤维滤纸：直径11cm，孔径1.5um。10.5.2
仪器和设备
11.1高效液相色谱仪：配有荧光检测器。11.2振荡器。
11.3离心机：≥6500r/min。wwW.bzxz.Net
11.4真空固相萃取装置。
氮吹仪
分析天平：感量0.0001g和0.01g。分析步骤
12.1提取
GB5009.222—2016
取样品500g，用粉碎机粉碎并通过830um圆孔筛，混匀，分成2份，装人洁净容器内，密封保存。称取试样约5g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加10mL提取溶剂（10.2.1），在振荡器上振荡提取30min。以3500r/min离心4min，上清液转人另一离心管中。在残渣中再加入5mL提取溶剂（10.2.1），重复上述操作，合并上清液。在提取液中加水至40mL，并用磷酸调pH为1.5.过玻璃纤维滤纸，待净化。
12.2净化
将上述溶液过预淋洗好的C1固相萃取柱，用5mL水淋洗柱子。待淋洗液全部流出柱子后，减压抽干3min。用10mL甲醇以1.0mL/min的速度洗脱，收集全部洗脱液，在40℃下，N，吹干，再以1.0mL流动相溶解，过0.22um的有机相微孔滤膜，供液相色谱测定。12.3空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行12.4测定
液相色谱参考条件
色谱柱：C柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或等效者；b)
流动相：乙腈-异丙醇-磷酸溶液（35+10十55）；流速：1.0mL/min；
进样量：50μL；
柱温：28℃；
检测波长：激发波长331nm，发射波长500nm。色谱测定
根据样液中被测桔青霉素含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作液和样液中桔青霉素响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，桔青霉素保留时间约为9.1min，标准物质色谱图见图A.3。13
分析结果的表述
试样中秸青霉素含量按式（2）计算：6
式中：
X——试样中桔青霉素含量，单位为微克每千克（μg/kg）；A--样液中桔青霉素的峰面积；
标准工作液中桔青霉素的浓度，单位为微克每升（ug/L)；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；A
标准工作液中桔青霉素的峰面积；m
最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。GB5009.222—2016
.（2)
计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。14精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。5其他
方法检出限为3μg/kg，定量限为10μg/kg。附录A
桔青霉素标准的液相色谱图
桔青霉素标准的液相色谱图见图A.1～图A.3。LC
GB 5009.222—2016
图A.1桔青霉素标准溶液（100ng/mL）液相色谱图（玉米基质标准工作液）1.6
图A.2桔青霉素标准溶液（100ng/mL）液相色谱图（红曲基质标准工作液）min
桔青霉素标准溶液（100ng/mL）的液相色谱图图A.3
GB5009.222—2016
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