GB 5009.253-2016
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标准号： GB 5009.253-2016
中文名称：食品安全国家标准动物源性食品中全氟辛烷磺酸（PFOS）和全氟辛酸（PFOA）的测定
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
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相关标签： 食品安全 国家标准 动物 食品 全氟 辛烷 磺酸 辛酸 测定
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标准简介
GB 5009.253-2016 食品安全国家标准动物源性食品中全氟辛烷磺酸（PFOS）和全氟辛酸（PFOA）的测定
GB5009.253-2016
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标准内容
中华人民共和国国家标准
GB5009.253—2016
食品安全国家标准
动物源性食品中全氟辛烷磺酸（PFOS）和全氟辛酸（PFOA)的测定
2016-08-31发布
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2017-03-01实施
1范围
食品安全国家标准
动物源性食品中全氟辛烷磺酸（PFOS）和全氟辛酸（PFOA）的测定bzxz.net
GB 5009.253—2016
本标准规定了动物源性食品中全氟辛烷磺酸（PFOS)和全氟辛酸（PFOA)含量的同位素稀释液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于动物源性食品中PFOS和PFOA含量的测定。2原理
试样中PFOS和PFOA经乙睛提取，通过分散固相萃取净化，用液相色谱-串联质谱仪测定，采用内标法定量。
3试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T.6682规定的一级水。3.1
甲醇（CHOH）：色谱纯
乙睛（CH,CN)：色谱纯。
盐酸（HCI)。
氯化钠(NaCI)。
Z酸铵（CH.COONH）：色谱纯。
3.6N-丙基乙二胺固相吸附剂（PSA）：40μm～60μm，ProElut填料，或相当者。Cis吸附剂：40μm～60μm，ProElut填料，或相当者。3.7（
石墨化碳黑吸附剂（GCB）：40um～60um，ProElut填料，或相当者3.9
乙酸铵溶液（5mmol/L）：准确称0.3855g（精确至0.0001g）乙酸铵.用水溶解定容至1000mL3.10全氟辛烷磺酸（PFOS)和全氟辛酸（PFOA）标准品溶液：准确称取PFOA［纯度≥98%，CAS335-67-1,CF：（CF），COOH和PFOS（纯度≥99%.CAS：1763-23-1.C.HFOS）各10.00mg（精确至0.0001g），用甲醇稀释至100mL，配置成浓度均为100μg/mL的PFOA和PFOS标准溶液。一4℃环境下保存，有效期为6个月。
3.11PFOA标准储备溶液：吸取PFOA标准品溶液，用甲醇稀释，配制成浓度为100.0ug/L的PFOA标准储备溶液；PFOS标准储备溶液：吸取PFOS标准溶液，用甲醇稀释，配制成浓度为100.0ug/L的PFOS标准储备溶液。均在一4℃环境下保存，有效期为4个月。注：全氟辛烷磺酸(PFOS)在溶液中以全氟辛烷磺酸离子状态存在.样品溶液以及标准溶液以全氟辛烷磺酸定量。3.12混合系列标准工作溶液：吸取标准储备溶液，用甲醇稀释，配制成PFOA浓度依次为0.05uμg/L、0.1μg/L0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、10.0μg/L.PFOS浓度依次为0.1μg/L、0.2μg/L、1.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、40.0ug/L的混合系列标准工作溶液。一4℃环境下保存，有效期为2个月。3.1313C-PFOA标准品溶液：通过甲醇稀释配制，稀释至浓度为50.0uμg/mL的标准品溶液；1
GB5009.253—2016
1.2.3，4-13C4-PFOS标准品溶液：通过甲醇稀释配制，稀释至浓度为50.0μg/mL的标准品溶液。均在一4℃环境下保存，有效期为6个月。3.14内标混合使用溶液I：吸取\C-PFOA和1,2.3,4-13Ct-PFOS标准品溶液，用甲醇稀释，配制成13C-PFOA和1，2.3，4-1C4-PFOS浓度分别为10.0μg/L和50.0ug/L的内标混合使用溶液。一4℃环境下保存，有效期为4个月3.15内标混合使用溶液Ⅱ：吸取3C-PFOA和1，2，3，4-C4-PFOS内标混合使用溶液1，用甲醇稀释，配制成13C-PFOA和1，2.3，4-13C-PFOS浓度分别为1.0ug/L和5.0μg/L的内标混合使用溶液。一4℃环境下保存，有效期为2个月。3.16含有碳13同位素内标的混合系列标准工作溶液：吸取标准储备溶液以及内标混合使用溶液I，用甲醇稀释，配制成PFOA浓度依次为0.05μg/L、0.1μg/L、0.5ug/L、1.0μg/L、2.0μg/L、10.0μg/L，PFOS浓度依次为0.1μg/L、0.2μg/L、1.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、40.0μg/L.以及13C.-PFOA和1.2.3，4-13Ct-PFOS浓度均分别为1.0ug/L和5.0μg/L的含有3C同位素内标的混合系列标准工作溶液。一4℃环境下保存，有效期为2个月。3.17滤膜：0.22um，有机相型。4仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。4.2
氮吹仪。
粉碎机。
离心机，转速≥5000r/min。
均质机，参考转速：3400r/min~24000r/min。4.5
分析天平：感量0.1mg和0.01g。5样品制备
鱼、虾、蟹、贝类、章鱼、鸡肉、猪肉、牛肉取其可食部分（去骨，去壳），切成小块，用粉碎机制成肉糜；蛋品去壳，制成匀浆；牛奶，混匀备用。将样品置于玻璃样品瓶中，密封，标识后置于一18℃保存。6分析步骤
6.1样品前处理
6.1.1提取
称取试样5g（准确至0.01g）（样品使用前解冻均质），置于50mL聚丙烯离心管中，加入内标混合使用溶液400uL，加水5mL，漩涡混合1min，加入10mL乙睛（3.2）和30uL盐酸（3.3），震荡10min。加人2g氯化钠（3.4），再次振摇10min，以5000r/min离心10min。移取上层乙睛溶液于另一试管中，在45℃水浴中氮气吹至约4mL待净化。6.1.2净化
将上述溶液转移至装有100mgPSA（3.6）、40mgCl（3.7)和20mgGCB(3.8）的15mL聚丙烯离心管中，振摇10min，以5000r/min离心10min，移取上清溶液于另一试管中，在45℃水浴中氮气吹至干.用1mL甲醇（3.1)溶解，吸人1mL注射器，经0.22μm有机滤膜过滤后，待测。2
6.2测定
6.2.1液相色谱参考条件
GB5009.2532016
为降低高效液相色谱管道中引人的PFOS和PFOA的污染，液相系统中加一预柱，并对部分特氟龙材质管路替换为PEEK管路或不锈钢管路6.2.1.2分析色谱柱：C18，150mmX2.1mm（内径），5um，或相当者。6.2.1.3
预吸附柱：Crs.50mm×4.6mm（内径），5μm，或相当者。流动相梯度洗脱程序见表1。
流速：200μL/min。
进样量：10μL。
表1流动相梯度洗脱程序
质谱参考条件
5mmol/L乙酸铵
6.2.2.1离子源：电喷雾离子源负离子模式（ESI）。6.2.2.2扫描方式：多反应监测模式（MRM)。6.2.2.3分辨率：单位分辨率。
其他质谱条件参见附录A。
6.2.3定性测定
按照6.2.1和6.2.2所述条件测定试样和标准工作溶液，试样的质量色谱峰保留时间应与标准物质一致，允许偏差小于土2.5%；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，定性离子参考附录A表A.1，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在相应的被测物。
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的最大偏差
>20~50
>10~20
6.2.4定量测定
GB5009.253—2016
以各混合系列标准工作溶液中的PFOA或PFOS浓度和PFOA或PFOS与其相对应的C同位素标记物的峰面积比绘制标准曲线，按照内标法进行定量计算。在6.2.1所述的色谱条件下，PFOA和PFOS的参考保留时间约为7.66min和8.78min，13C+-PFOA和1，2，34-3C-PFOS的参考保留时间约为7.66min和8.79min，标准溶液的多反应监测（MRM)图参见附录B。标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在标准曲线的线性响应范围内·如果含量超过范围，则重新取样分析，增加相应内标添加量，使内标浓度与待测液浓度相匹配，然后用甲醇稀释到适当浓度后分析。
6.3空白试验
除不加试样外，均按6.1及6.2所述操作步骤进行。7质量控制
7.1取样抽样
取样抽样均应采用不锈钢仪器，避免接触塑料。7.2
有机溶剂和试验器血
本标准中使用到的所有有机溶剂及试验器，在使用前，应进行空白试验。如本底值高于定量限，应对有机溶剂进行重蒸，或更换试验器血，直至本底值低于定量限、8分析结果的表述
试样中PFOA和PFOS的含量按式(1)计算：(A-A)XVXf
式中：
X—试样中PFOA或PFOS的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；A
试液中PFOA或PFOS色谱峰与相对应内标物色谱峰的峰面积比值，经标准曲线求得的对应的PFOA或PFOS浓度，单位为微克每升（μg/L)；A。一一空白溶液中PFOA或PFOS色谱峰与相对应内标物色谱峰的峰面积比值，经标准曲线求得的对应的PFOA或PFOS浓度，单位为微克每升（μg/L)；V—一试液最终定容体积，单位为毫升（mL）；试液稀释倍数；
试样的质量，单位为克（g）。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。4
精密度
GB5009.253—2016
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的30%。其他
本方法PFOA和PFOS的检出限分别为0.002μg/kg和0.02uμg/kg，定量限分别为0.01ug/kg和0.1μg/kg。
质谱参考条件：
喷嘴电压：—500V；
雾化气压力：45Pa：
鞘气温度：260℃；
鞘气流速：11L/min；
干燥气温度：300℃；
干燥气流速：6L/min；
毛细管电压：-3500V；
附录A
质谱参考条件
定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞电压、驻留时间见表A.1。h)
GB5009.253—2016
表A,1给出了PFOA、PFOS、1\C-PFOA和1,2,3,4-1\C-PFOS的定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞电压、驻留时间。
PFOA、PFOS.13C-PFOA和1.2.3.4-13C4-PFOS的表A.1
定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞电压、驻留时间化合物
C-PFOA
1.2.3.4-C-PFOS
母离子
定量离子（quantification ion）。子离子
碎裂电压
—200
碰撞电压
驻留时间
附录B
GB5009.253—2016
PFOA和PFOS及其内标的典型液相色谱-串联质谱多反应监测（MRM)图PFOA和PFOS及其内标的液相色谱-串联质谱多反应监测（MRM)图见图B.1。X10*ESI VRM Fra-85. 0 VCI(a12. 0(417. 1 >172. 1) urm0003. d2
X1041SIMRM1Tar 85.0 [email protected](417.1 3T2.0)mm0003. d2
Xto-FSIMkMFrag-80.0VC:11@16,U(113.0>169.U)mm0009.d2
X1031.I M,M1 ra 80. 0 V C:l13@12. 0 (413. 0 219. 0) mm000.3. dX10° FSI Mr2 MFrag=80. 0 Vt11494. 0(113. 0>368, 9)mrm0003. dX1 -FSI MR M Frag-200, 0 VC:11@390. 0(498. 9-80. 0) mm0003. dX103-HSI MRM Frg-200, 0 VC1 3@55. U(198, 9-99, 0)mm0003. d2.5
X103 1:5I MKMIT 200.0 VC13@50. 0(40A. 9 :≥130. 0)mr-0003. d1-1
X10TSI MRMFtg-170. [email protected](503. / >80. 1)m:in0003.dX10nSIMRM I'rw.g-170.0 vC1(250. 0(503.1 09.1)mrm03.d2. 5-
*7,676
+7,663
PFOA和PFOS及其内标的液相色谱-串联质谱多反应监测（MRM)图9.5
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食品安全国家标准
动物源性食品中全氟辛烷磺酸（PFOS）和全氟辛酸（PFOA)的测定
2016-08-31发布
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2017-03-01实施
1范围
食品安全国家标准
动物源性食品中全氟辛烷磺酸（PFOS）和全氟辛酸（PFOA）的测定bzxz.net
GB 5009.253—2016
本标准规定了动物源性食品中全氟辛烷磺酸（PFOS)和全氟辛酸（PFOA)含量的同位素稀释液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于动物源性食品中PFOS和PFOA含量的测定。2原理
试样中PFOS和PFOA经乙睛提取，通过分散固相萃取净化，用液相色谱-串联质谱仪测定，采用内标法定量。
3试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T.6682规定的一级水。3.1
甲醇（CHOH）：色谱纯
乙睛（CH,CN)：色谱纯。
盐酸（HCI)。
氯化钠(NaCI)。
Z酸铵（CH.COONH）：色谱纯。
3.6N-丙基乙二胺固相吸附剂（PSA）：40μm～60μm，ProElut填料，或相当者。Cis吸附剂：40μm～60μm，ProElut填料，或相当者。3.7（
石墨化碳黑吸附剂（GCB）：40um～60um，ProElut填料，或相当者3.9
乙酸铵溶液（5mmol/L）：准确称0.3855g（精确至0.0001g）乙酸铵.用水溶解定容至1000mL3.10全氟辛烷磺酸（PFOS)和全氟辛酸（PFOA）标准品溶液：准确称取PFOA［纯度≥98%，CAS335-67-1,CF：（CF），COOH和PFOS（纯度≥99%.CAS：1763-23-1.C.HFOS）各10.00mg（精确至0.0001g），用甲醇稀释至100mL，配置成浓度均为100μg/mL的PFOA和PFOS标准溶液。一4℃环境下保存，有效期为6个月。
3.11PFOA标准储备溶液：吸取PFOA标准品溶液，用甲醇稀释，配制成浓度为100.0ug/L的PFOA标准储备溶液；PFOS标准储备溶液：吸取PFOS标准溶液，用甲醇稀释，配制成浓度为100.0ug/L的PFOS标准储备溶液。均在一4℃环境下保存，有效期为4个月。注：全氟辛烷磺酸(PFOS)在溶液中以全氟辛烷磺酸离子状态存在.样品溶液以及标准溶液以全氟辛烷磺酸定量。3.12混合系列标准工作溶液：吸取标准储备溶液，用甲醇稀释，配制成PFOA浓度依次为0.05uμg/L、0.1μg/L0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、10.0μg/L.PFOS浓度依次为0.1μg/L、0.2μg/L、1.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、40.0ug/L的混合系列标准工作溶液。一4℃环境下保存，有效期为2个月。3.1313C-PFOA标准品溶液：通过甲醇稀释配制，稀释至浓度为50.0uμg/mL的标准品溶液；1
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1.2.3，4-13C4-PFOS标准品溶液：通过甲醇稀释配制，稀释至浓度为50.0μg/mL的标准品溶液。均在一4℃环境下保存，有效期为6个月。3.14内标混合使用溶液I：吸取\C-PFOA和1,2.3,4-13Ct-PFOS标准品溶液，用甲醇稀释，配制成13C-PFOA和1，2.3，4-1C4-PFOS浓度分别为10.0μg/L和50.0ug/L的内标混合使用溶液。一4℃环境下保存，有效期为4个月3.15内标混合使用溶液Ⅱ：吸取3C-PFOA和1，2，3，4-C4-PFOS内标混合使用溶液1，用甲醇稀释，配制成13C-PFOA和1，2.3，4-13C-PFOS浓度分别为1.0ug/L和5.0μg/L的内标混合使用溶液。一4℃环境下保存，有效期为2个月。3.16含有碳13同位素内标的混合系列标准工作溶液：吸取标准储备溶液以及内标混合使用溶液I，用甲醇稀释，配制成PFOA浓度依次为0.05μg/L、0.1μg/L、0.5ug/L、1.0μg/L、2.0μg/L、10.0μg/L，PFOS浓度依次为0.1μg/L、0.2μg/L、1.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、40.0μg/L.以及13C.-PFOA和1.2.3，4-13Ct-PFOS浓度均分别为1.0ug/L和5.0μg/L的含有3C同位素内标的混合系列标准工作溶液。一4℃环境下保存，有效期为2个月。3.17滤膜：0.22um，有机相型。4仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。4.2
氮吹仪。
粉碎机。
离心机，转速≥5000r/min。
均质机，参考转速：3400r/min~24000r/min。4.5
分析天平：感量0.1mg和0.01g。5样品制备
鱼、虾、蟹、贝类、章鱼、鸡肉、猪肉、牛肉取其可食部分（去骨，去壳），切成小块，用粉碎机制成肉糜；蛋品去壳，制成匀浆；牛奶，混匀备用。将样品置于玻璃样品瓶中，密封，标识后置于一18℃保存。6分析步骤
6.1样品前处理
6.1.1提取
称取试样5g（准确至0.01g）（样品使用前解冻均质），置于50mL聚丙烯离心管中，加入内标混合使用溶液400uL，加水5mL，漩涡混合1min，加入10mL乙睛（3.2）和30uL盐酸（3.3），震荡10min。加人2g氯化钠（3.4），再次振摇10min，以5000r/min离心10min。移取上层乙睛溶液于另一试管中，在45℃水浴中氮气吹至约4mL待净化。6.1.2净化
将上述溶液转移至装有100mgPSA（3.6）、40mgCl（3.7)和20mgGCB(3.8）的15mL聚丙烯离心管中，振摇10min，以5000r/min离心10min，移取上清溶液于另一试管中，在45℃水浴中氮气吹至干.用1mL甲醇（3.1)溶解，吸人1mL注射器，经0.22μm有机滤膜过滤后，待测。2
6.2测定
6.2.1液相色谱参考条件
GB5009.2532016
为降低高效液相色谱管道中引人的PFOS和PFOA的污染，液相系统中加一预柱，并对部分特氟龙材质管路替换为PEEK管路或不锈钢管路6.2.1.2分析色谱柱：C18，150mmX2.1mm（内径），5um，或相当者。6.2.1.3
预吸附柱：Crs.50mm×4.6mm（内径），5μm，或相当者。流动相梯度洗脱程序见表1。
流速：200μL/min。
进样量：10μL。
表1流动相梯度洗脱程序
质谱参考条件
5mmol/L乙酸铵
6.2.2.1离子源：电喷雾离子源负离子模式（ESI）。6.2.2.2扫描方式：多反应监测模式（MRM)。6.2.2.3分辨率：单位分辨率。
其他质谱条件参见附录A。
6.2.3定性测定
按照6.2.1和6.2.2所述条件测定试样和标准工作溶液，试样的质量色谱峰保留时间应与标准物质一致，允许偏差小于土2.5%；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，定性离子参考附录A表A.1，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在相应的被测物。
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的最大偏差
>20~50
>10~20
6.2.4定量测定
GB5009.253—2016
以各混合系列标准工作溶液中的PFOA或PFOS浓度和PFOA或PFOS与其相对应的C同位素标记物的峰面积比绘制标准曲线，按照内标法进行定量计算。在6.2.1所述的色谱条件下，PFOA和PFOS的参考保留时间约为7.66min和8.78min，13C+-PFOA和1，2，34-3C-PFOS的参考保留时间约为7.66min和8.79min，标准溶液的多反应监测（MRM)图参见附录B。标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在标准曲线的线性响应范围内·如果含量超过范围，则重新取样分析，增加相应内标添加量，使内标浓度与待测液浓度相匹配，然后用甲醇稀释到适当浓度后分析。
6.3空白试验
除不加试样外，均按6.1及6.2所述操作步骤进行。7质量控制
7.1取样抽样
取样抽样均应采用不锈钢仪器，避免接触塑料。7.2
有机溶剂和试验器血
本标准中使用到的所有有机溶剂及试验器，在使用前，应进行空白试验。如本底值高于定量限，应对有机溶剂进行重蒸，或更换试验器血，直至本底值低于定量限、8分析结果的表述
试样中PFOA和PFOS的含量按式(1)计算：(A-A)XVXf
式中：
X—试样中PFOA或PFOS的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；A
试液中PFOA或PFOS色谱峰与相对应内标物色谱峰的峰面积比值，经标准曲线求得的对应的PFOA或PFOS浓度，单位为微克每升（μg/L)；A。一一空白溶液中PFOA或PFOS色谱峰与相对应内标物色谱峰的峰面积比值，经标准曲线求得的对应的PFOA或PFOS浓度，单位为微克每升（μg/L)；V—一试液最终定容体积，单位为毫升（mL）；试液稀释倍数；
试样的质量，单位为克（g）。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。4
精密度
GB5009.253—2016
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的30%。其他
本方法PFOA和PFOS的检出限分别为0.002μg/kg和0.02uμg/kg，定量限分别为0.01ug/kg和0.1μg/kg。
质谱参考条件：
喷嘴电压：—500V；
雾化气压力：45Pa：
鞘气温度：260℃；
鞘气流速：11L/min；
干燥气温度：300℃；
干燥气流速：6L/min；
毛细管电压：-3500V；
附录A
质谱参考条件
定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞电压、驻留时间见表A.1。h)
GB5009.253—2016
表A,1给出了PFOA、PFOS、1\C-PFOA和1,2,3,4-1\C-PFOS的定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞电压、驻留时间。
PFOA、PFOS.13C-PFOA和1.2.3.4-13C4-PFOS的表A.1
定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞电压、驻留时间化合物
C-PFOA
1.2.3.4-C-PFOS
母离子
定量离子（quantification ion）。子离子
碎裂电压
—200
碰撞电压
驻留时间
附录B
GB5009.253—2016
PFOA和PFOS及其内标的典型液相色谱-串联质谱多反应监测（MRM)图PFOA和PFOS及其内标的液相色谱-串联质谱多反应监测（MRM)图见图B.1。X10*ESI VRM Fra-85. 0 VCI(a12. 0(417. 1 >172. 1) urm0003. d2
X1041SIMRM1Tar 85.0 [email protected](417.1 3T2.0)mm0003. d2
Xto-FSIMkMFrag-80.0VC:11@16,U(113.0>169.U)mm0009.d2
X1031.I M,M1 ra 80. 0 V C:l13@12. 0 (413. 0 219. 0) mm000.3. dX10° FSI Mr2 MFrag=80. 0 Vt11494. 0(113. 0>368, 9)mrm0003. dX1 -FSI MR M Frag-200, 0 VC:11@390. 0(498. 9-80. 0) mm0003. dX103-HSI MRM Frg-200, 0 VC1 3@55. U(198, 9-99, 0)mm0003. d2.5
X103 1:5I MKMIT 200.0 VC13@50. 0(40A. 9 :≥130. 0)mr-0003. d1-1
X10TSI MRMFtg-170. [email protected](503. / >80. 1)m:in0003.dX10nSIMRM I'rw.g-170.0 vC1(250. 0(503.1 09.1)mrm03.d2. 5-
*7,676
+7,663
PFOA和PFOS及其内标的液相色谱-串联质谱多反应监测（MRM)图9.5
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