GB 5009.265-2016 食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定 GB5009.265-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国国家标准
GB5009.265—2016
食品安全国家标准
食品中多环芳烃的测定
2016-12-23发布
2017-06-23实施
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局
1范围
食品安全国家标准
食品中多环芳烃的测定
GB5009.265—2016
本标准规定了食品中多环芳烃（茶、苞、苏、菲、葱、荧葱、芪、苯并[门葱、菌、苯并[荧葱、苯并[门荧葱、苯并[a］芪、节并[1.23-cd芪、二苯并[a，h］葱和苯并［g，h，门菲的液相色谱测定方法和食品中多环芳烃（萘、苞烯、苞、苏、菲、葱、荧葱、芘、苯并[］葱、菌、苯并[b荧葱、苯并[荧、苯并[α］芪、节并[1.2，3-c，d］芪、二苯并[a，h葱和苯并g，h，门的气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于食品中多环芳烃含量的测定。高效液相色谱法
第一法
2原理
试样中的多环芳烃用有机溶剂提取，提取液浓缩至近干，溶剂溶解，用PSA（N-丙基乙二胺）和Ci8固相萃取填料净化或用弗罗里硅土固相萃取柱净化。经浓缩定容后，通过高效液相色谱分离.测定各种多环芳烃在不同激发波长和发射波长处的荧光强度，外标法定量3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂
3.1.1乙腈(CH.CN)：色谱纯。
3.1.2正已烷（C,Hl）：色谱纯。二氯甲烷（CH,Cl）：色谱纯。
3.1.4硅藻土：色谱纯。
硫酸镁（MgSO）：优级纯
3.1.6N-丙基乙二胺（PSA）：粒径40um。3.1.7
封尾C1固相萃取填料：粒径40um～63μm。3.1.8弗罗里硅土固相萃取柱：500mg，3mL。有机相型微孔滤膜：0.22um。
试剂配制
正已烷-二氯甲烷混合溶液（1十1）：量取500mL正已烷，加人二氯甲烷500mL，混匀。3.2.2乙饱和的正已烷：量取800mL正已烷，加入200mL乙睛，振摇混勾后，静置分层，上层正已烷层即为乙腈饱和的正已烷。
3.3标准品
GB5009.265—2016
多环芳烃（萘、苞烯、苞、荔、菲、葱、荧葱、芘、苯并]葱、崩、苯并[b荧葱、苯并[荧葱、苯并[α花、并[1,2,3-c，d花、二苯并[a.h］蕙和苯并［g.h，］有证标准溶液（200μg/mL），于-18℃下保存。
警告一一多环芳烃是已知的致癌、致畸、致突变的物质，并且致癌性随着苯环数的增加而增加，测定时应特别注意安全防护。测定应在通风柜中进行并戴手套，尽量减少暴露。3.4标准溶液配制
3.4.1多环芳烃标准中间液（1000ng/mL）：吸取多环芳烃标准溶液0.5mL，用乙睛定容至100mL。在一18℃下保存。
3.4.2多环芳烃标准系列工作液：分别吸取多环芳烃标准中间液0.10mL、0.50mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL，用乙晴定容至100mL，得到质量浓度为1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL50ng/mL、100ng/mL的标准系列工作液4仪器和设备
高效液相色谱仪，带荧光检测器。4.1
电子天平：感量为0.01g
冷冻离心机：转速≥4500r/min。4.4
涡旋振荡器。
超声波振荡器
粉碎机。
均质器。
氮吹仪。
旋转蒸发仪，
5分析步骤
5.1试样制备
5.1.1于样：取样品约500g，经粉碎机粉碎、混勾，分装于洁净盛样袋中，密封标识后于一18℃冷冻保存。
5.1.2湿样：取样品约500g，将其可食部分先切碎，经均质器充分搅碎均匀，分装于洁净盛样袋中，密封标识后于-18℃冷冻保存。
5.2试样提取
5.2.1粮谷或水分少的食品
称取2g～5g（精确至0.01g）试样于50mL具塞玻璃离心管A中，按以下步骤处理：a）加人10mL正已烷，涡旋振荡30s后，放入40℃水浴超声30min；以4500r/min离心5min，吸取上清液于玻璃离心管B中：离心管A下层用10mL正已烷重复提取1次，提取液合并于离心管B中，氮吹（温度控制在35℃以下）除去溶剂.吹至近干。b）在离心管B中，加人4mL乙睛，涡旋混合30s，再加人900mg硫酸镁、100mgPSA和100mg2
GB5009.265—2016
Ci：填料，涡旋混合30s.以4500r/min离心3min，取上清液于10mL玻璃刻度离心管C中，离心管B下层再用2mL乙睛重复提取1遍，合并提取液于离心管C中，氮吹蒸发溶剂至近1mL，用乙睛定容至1mL，混勾后，过0.22um有机相型微孔滤膜，制得试样待测液。5.2.2水产品、肉类和蔬菜等食品称取2g~5g（精确至0.01g）试样于50mL具塞玻璃离心管A中，加1g~5g硅藻土用玻棒搅匀，以下按5.2.1中a）、b)步骤处理，制得试样待测液。5.2.3含油脂高的食品或动植物油脂称取1g～4g（精确至0.01g）试样于50mL具塞玻璃离心管A中，按以下步骤处理：a）加人20mL乙睛和10mL乙睛饱和的正已烷，涡旋振荡30s后，放人40℃水浴超声30min摇匀后，以4500r/min冷冻（一4℃）离心5min，吸取下层乙睛层于100mL鸡心瓶中，离心管A中溶液用20mL乙睛重复提取1次，提取液合并于鸡心瓶中，35℃减压旋转蒸发至近干。加人5mL正已烷，涡旋振荡30s溶解。b）依次用5mL二氯甲烷和10mL正已烷活化弗罗单硅士固相萃取柱，将a)获得的5mL提取样液全部移人弗罗里硅土固相萃取柱，再用5mL正已烷洗涤鸡心瓶并人柱中，用8mL正已烷二氯甲烷混合溶液洗脱收集所有流出物于20mL玻璃离心管B中。氮吹（温度控制在35℃以下）除去溶剂，吹至近干，加入0.5mL乙晴涡旋振荡10S，继续氮吹至除尽正已烷-二氯甲烷，用乙睛定容至1mL，混勾后.过0.22um有机相型微孔滤膜，制得试样待测液，5.3液相色谱参考条件
色谱柱：PAHCig反相键合固定相色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5um，或同等性能a）
的色谱柱。
b）检测器：荧光检测器。
流动相：乙睛和水；梯度洗脱程序见表1溶剂A为乙，溶剂B为水。表1反相Ct8柱梯度洗脱程序
色谱时间
d）流速：1.5mL/min
检测波长：激发和发射波长见表2。e
溶剂A
溶剂B
GB5009.2652016
多环芳烃的激发波长、发射波长及其切换色谱时间检测参数化合物名称
苯并[a]
苯并[们荧蒽
苯并［荧葱
苯并[a]花
二苯并[a，h葱
苯并g.h.门
节并[1,2,3-c+d]
柱温：30℃。
进样量：20μL。
5.4标准曲线的制作
激发波长
发射波长
将标准系列工作液分别注人液相色谱仪中，测得相应的峰面积，以标准工作液的质量浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液的液相色谱图参见图A1。5.5试样溶液的测定
将试样待测液注人液相色谱仪中，以保留时间定性，测得相应的峰面积，根据标准曲线得到试样待测液中多环芳烃的质量浓度。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围，可适当稀释后测定，
5.6空白试验
空白试验除不加试样外，采用与试样完全相同的分析步骤。6分析结果的表述
试样中多环芳烃的含量X，按式（1)计算：X,=P:×V×1 000
mX1000
式中：
试样中多环芳烃的含量，单位为微克每千克（ug/kg)；·（1)
GB5009.265—2016
依据标准曲线计算得到的试样待测液中多环芳烃；的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；试样待测液最终定容体积，单位为毫升（mL)；1000单位转换；
试样质量，单位为克（g）。
含量大于等于10μg/kg时，保留三位有效数字；含量小于10μg/kg时，保留两位有效数字。注：计算结果应扣除空白值。
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。8其他
当试样取4g，定容体积为1mL时，本方法的检出限和定量限见表3。表3液相色谱法的多环芳烃检出限和定量限蕙、苯并[a]葱、崽、节并[1,2.3-c,d]、苯并[]荧蒽、化合物
检出限
定量限
9原理
苯并[k］]荧蕙、苯并[a］芪、二苯并[a+h]葱、苯并Lg.h,门
第二法
气相色谱-质谱法
单位为微克每千克
苞、、芪
试样中的多环芳烃用有机溶剂提取，提取液浓缩至近干，用PSA（N-丙基乙二胺）和CI固相萃取填料净化或用弗罗里硅土固相萃取柱净化，经浓缩定容后，用气相色谱-质谱联用仪进行测定，外标法定量。
10试剂和材料
同第3章。
仪器和设备
气相色谱-质谱联用仪。
11.2其余同4.2~4.9
2分析步骤wwW.bzxz.Net
12.1试样制备
同5.1。
12.2试样提取
同5.2。
12.3空白试验
空白试验除不加试样外，采用与试验完全相同的分析步骤。12.4气相色谱-质谱参考条件
GB5009.265—2016
色谱柱：DB-5MS柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25um，或同等性能的色谱柱。a）
柱温度程序：初始温度90℃，以20℃/min升温至220℃，再以5℃/min升温至320℃，保持2min;
进样口温度：250℃；
色谱-质谱接口温度：280℃；
离子源温度：230℃；
载气：氢气，纯度≥99.999%，1.0mL/min；电离方式：EI；
电离能量：70eV；
质量扫描范围：50amu450amu；
测定方式：选择离子监测方式；进样方式：不分流进样，2.0min后开阀；进样量：1.0μL；
溶剂延迟：3min。
12.5标准曲线的制作
将标准系列工作液分别注人气相色谱-质谱仪中，测得相应的峰面积，以标准工作液的质量浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线12.6试样溶液的测定
将试样待测液注人气相色谱-质谱仪中，测得相应的峰面积，根据标准曲线得到试样待测液中多环芳烃的质量浓度。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围，可适当稀释后测定。12.7定性
如果试样待测液中检出的色谱峰保留时间与标准工作溶液相一致，且选择离子的相对丰度与标准工作溶液的相对丰度两者之差不大于允许相对偏差（相对丰度≥50%，允许土10%偏差；50%>相对丰度>20%，允许±15%偏差；10%<相对丰度<20%.允许±20%偏差；相对丰度≤10%，允许±50%偏差），则可判断试样中存在对应的被测物。在上述色谱条件下，总离子流图参见图B.1。参考保留时间和特征离子见表4。
化合物名称
苯并[a]葱
苯并[b]荧葱
苯并[]荧蕙
苯并[a]花
节苯[1.2.3-c+d芪
二苯并[a，h]葱
苯并g，h
分析结果的表述
多环芳烃的参考保留时间和特征离子保留时间
试样中多环芳烃的含量X，按式（2)计算：定量离子
p.xVx1000
mx1000
式中：
试样中多环芳烃的含量，单位为微克每千克（ug/kg）；p
选择离子
定性离子
89,152
101,200
101,200
114,226
114,226
126,250
138,277
GB5009.265—2016
丰度比
100:6:8
100+5:17
100:94:20
100:92:9
100:10:7
100:13:22
10016:24
100：
100+1516
100+1620
100:16:22
100:19:22
100:12:30
100:24:23
...（2)
依据标准曲线计算得到的试样待测液中多环芳烃i的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）：试样待测液最终定容体积，单位为毫升（mL）；单位转换；
试样质量，单位为克（g）。
含量大于等于10μg/kg时，保留三位有效数字；含量小于10ug/kg时，保留两位有效数字。注：计算结果应扣除空白值。
精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%7
当试样取4g定容体积为1mL时，本方法的检出限和定量限见表5。气相色谱-质谱法的多环芳烃检出限和定量限表5
化合物名称
检出限
定量限
苞、苞烯、蕙、荧葱、总、
苯并[荧蕙、苯并[们荧蕙
苯并[a]蕙、
苯并[a]芪、苯并[g，h，］
菲、芘
GB5009.265—2016
单位为微克每千克
苏、节并[1.2.3-cd]
芪、二苯并La.h]葱
附录A
多环芳烃标准溶液的液相色谱图多环芳烃标准溶液的液相色谱图见图A.1。80
说明：
5——；
9起：
苯并[a]芘；
荧蕙；
10——苯并[们荧葱；
15——节并[1,23-c,d］；16
二苯并[a，h葱；
波长改变。
3荔：
11——苯并[门荧葱;
14苯并g.h.门；
多环芳烃标准溶液的液相色谱图GB5009.265—2016
4——菲：
8——苯并[a]葱；
附录B
多环芳烃标准溶液的气相色谱-质谱总离子流图多环芳烃标准溶液的气相色谱-质谱总离子流图见图B.1。丰度
10 000
25 000
20 000
15 000
10 000
说明：
苯并[α]蕙；
苯并［a芪：
苞烯：
节并[1.2.3-c,d芘：
一苞：
荧葱：
苯并[6]荧蒽；
二苯并[a，h门葱：
多环芳烃标准溶液的气相色谱-质谱总离子流图GB5009.265—2016
一花；
苯并[门荧意；
苯并g.h.门
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