GB 15193.13-2015
基本信息
标准号： GB 15193.13-2015
中文名称：食品安全国家标准 90天经口毒性试验
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
下载格式：.rar .pdf
下载大小：541KB
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
GB 15193.13-2015 食品安全国家标准 90天经口毒性试验
GB15193.13-2015
标准压缩包解压密码：www.bzxz.net
标准图片预览
标准内容
中华人民共和国国家标准
GB15193.13—2015
食品安全国家标准
90天经口毒性试验
2015-08-07发布
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2015-10-07实施
本标准代替GB15193.13—2003《30天和90天喂养试验》。本标准与GB15193.13—2003相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准90天经口毒性试验”；
修改了“范围”；
增加了“亚慢性毒性”、“最小观察到有害作用剂量”和“卫星组”的定义；修改了“原理”；
增加了“仪器与试剂”项目；
增加了“试验方法”项目；
增加了受试物处理要求；
修改了“实验动物”；
修改了“剂量与分组”；
修改了“操作步骤”；
修改了给予受试物的方式；
修改了观察指标；
GB 15193.13—2015
增加了体重和摄食及饮水消耗量、眼部检查、尿液检查、体温、心电图检查内容；修改了血液学检查、血生化检查、病理检查指标；修改了“数据处理”；
一增加了结果评价内容；
增加了“试验报告”项目；
增加了“结果解释”项目。
1范围
食品安全国家标准
90天经口毒性试验
本标准规定了实验动物90天经口毒性试验的基本试验方法和技术要求本标准适用于评价受试物的亚慢性毒性作用2术语和定义
亚慢性毒性
GB 15193.13—2015
实验动物在不超过其寿命期限10%的时间内（大鼠通常为90d)，重复经口接触受试物后引起的健康损害效应
2.2未观察到有害作用剂量
通过动物试验，以现有的技术手段和检测指标未观察到任何与受试物有关的毒性作用的最大剂量。2.3最小观察到有害作用剂量
在规定的条件下，受试物引起实验动物组织形态、功能、生长发育等有害效应的最小作用剂量。2.4靶器官
实验动物出现由受试物引起明显毒性作用的器官。2.5卫星组
在毒性研究设计和实施中外加的动物组，其处理和饲养条件与主要研究的动物相似，用于试验中期或试验结束恢复期观察和检测，也可用于不包括在主要研究内的其他指标及参数的观察和检测。3试验目的和原理
确定在90d内经口重复接触受试物引起的毒性效应了解受试物剂量-反应关系、毒作用靶器官和可逆性，得出90d经口最小观察到有害作用剂量（LOAEL)和未观察到有害作用剂量（NOAEL），初步确定受试物的经口安全性，并为慢性毒性试验剂量、观察指标、毒性终点的选择以及获得“暂定的人体健康指导值”提供依据。
4仪器和试剂
4.1仪器/器械
实验室常用解剖器械、电子天平、生物显微镜、检眼镜、血生化分析仪、血液分析仪、凝血分析仪、尿液分析仪、心电图扫描仪、离心机、病理切片机等。1
4.2试剂
GB 15193.13—2015
甲醛、二甲苯、乙醇、苏木素、伊红、石蜡、血球分析仪稀释剂、血生化分析试剂、凝血分析试剂、尿液分析试剂(或试纸)等。
5试验方法
5.1受试物
受试物应使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理。将受试物掺人饲料、饮用水或灌胃给予。5.2实验动物
5.2.1动物选择
实验动物的选择应符合GB14922.1和GB14922.2的有关规定。选择已有资料证明对受试物敏感的动物物种和品系，一般啮齿类动物首选大鼠，非啮齿类动物首选犬（通常选用Beagle犬）。大鼠周龄推荐不超过6周，体重50g～100g。试验开始时每个性别动物体重差异不应超过平均体重的土20%，每组动物数不少于20只，雌雄各半；若计划试验中期观察或试验结束做恢复期的观察，应增加动物数（对照和高剂量增加卫星组，每组10只，雌雄各半）。犬通常选用4个月～6个月的幼犬，一般不超过9个月，试验开始时每个性别动物体重差异不应超过平均体重的土20%，每组动物数不少于8只，雌罐各半：若计划试验中间户检或试验结束做恢复期的观察，应增加动物数（对照和高剂量增加卫星组，每组4只，雌雄各半）。对照组动物性别和数量应与受试物组相同。5.2.2动物准备
试验前大鼠在实验动物房至少应进行3d～5d(犬7d～14d)环境适应和检疫观察5.2.3动物饲养
实验动物饲养条件应符合GB14925、饮用水应符合GB5749、饲料应符合GB14924的有关规定。试验期间动物自由饮水和摄食，动物推荐单笼饲养，大鼠也可按组分性别分笼群饲，每笼动物数（一般不超过3只)应满足实验动物最低需要的空间，以不影响动物自由活动和观察动物的体征为宜。试验期间每组动物非试验因素死亡率应小于10%，濒死动物应尽可能进行血液生化指标检测、大体解以及病理组织学检查，每组生物标本损失率应小于10%。5.3剂量
5.3.1分组
试验至少设3个受试物剂量组，1个阴性（溶媒）对照组，必要时增设未处理对照组。若试验中期需要观察血液生化指标、户检或试验结束做恢复期观察，对照和高剂量需增设卫星组。对照组除不给受试物外，其余处理均同受试物剂量组。5.3.2剂量设计
5.3.2.1原则上高剂量应使部分动物出现比较明显的毒性反应，但不引起死亡：低剂量不宜出现任何观紧到毒效应（相当于NOAEL），且高于人的实际接触水平；中剂量介于两者之间，可出现轻度的毒性效应，以得出NOAEL和（或)LOAEL。一般递减剂量的组间距以2倍～4倍为宜，如受试物剂量总跨度2
iiiKAoNiKAca
GB15193.13—2015
过大可加设剂量组。试验剂量的设计参考急性毒性LD5剂量、28天经口毒性试验剂量和人体推荐摄入量进行。
5.3.2.2能求出LDs的受试物，以28天经口毒性试验的NOAEL或LOAEL作为90天经口毒性试验的最高剂量组；或以LDso的5%～15%作为最高剂量组，此LDsa百分比的选择主要参考LDs剂量反应曲线的斜率。然后在此剂量下设几个剂量组，最低剂量组至少是人体推荐摄入量的3倍。5.3.2.3求不出LD的受试物，试验剂量应尽可能涵盖人体预期摄入量100倍的剂量，在不影响动物摄食及营养平衡前提下应尽量提高高剂量组的剂量，对于人体推荐摄人量较大的受试物，高剂量组亦可以按最大给予量设计。
5.4试验步骤和观察指标免费标准bzxz.net
5.4.1受试物给予
5.4.1.1根据受试物的特性或试验目的，选择受试物掺入饲料、饮水或灌胃方式给予。若受试物影响动物适口性，应灌胃给予。受试物应连续给予90d。5.4.1.2受试物灌胃给予，要将受试物溶解或悬浮于合适的溶媒中，首选溶媒为水、不溶于水的受试物可使用植物油（如橄榄油、玉来油等），不溶于水或油的受试物亦可使用羧甲基纤维素、淀粉等配成混液或糊状物等。受试物应新鲜配制，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外。为保证受试物在动物体内浓度的稳定性，每日同一时段灌胃1次（每周灌胃6d）。试验期间，前4周每周称体重2次，之后每周称体重1次按体重调整灌胃体积。灌胃体积一般不超过10mL/kg体重，如为水溶液时，最大灌胃体积大鼠可达20mL/kg体重，犬为15mL/kg体重；如为油性液体，灌胃体积应不超过4mL/kg体重；各组灌胃体积一致。
5.4.1.3受试物掺人饲料或饮水给予，要将受试物与饲料（或饮水)充分混匀并保证该受试物配制的稳定性和均一性，以不影响动物摄食、营养平衡和饮水量为原则，受试物掺入饲料比例一般小于质量分数5%，若超过5%时（最大不应超过10%），可调整对照组饲料营养素水平（若受试物无热量或营养成分且添加比例大于5%时，对照组饲料应填充甲基纤维素等，掺人量等同高剂量），使其与剂量组饲料营养素水平保持一致，同时增设未处理对照组；亦可视受试物热量或营养成分的状况调整剂量组饲料营养素水平，使其与对照组饲料营养素水平保持一致。受试物剂量单位是每千克体重所摄入受试物的毫克（或克）数.即mg/kg体重（或g/kg体重），当受试物掺人饲料其剂量单位亦可表示为mg/kg（或g/kg）饲料，掺人饮水则表示为mg/mL水。受试物掺人饲料时，需将受试物剂量（mg/kg体重）按动物每100g体重的摄食量折算为受试物饲料浓度（mg/kg饲料），一般90天经口毒性试验大鼠每日摄食量按体重8%折算。
5.4.2一般临床观察
观察期限为90d，若设恢复期观察，动物应停止给予受试物后继续观察28d，以观察受试物毒性的可逆性、持续性和迟发效应。试验期间至少每天观察一次动物的一般临床表现，并记录动物出现中毒的体征、程度和持续时间及死亡情况。观察内容包括被毛、皮肤、眼、黏膜、分泌物、排泄物、呼吸系统、神经系统、自主活动（如：流泪、竖毛反应、瞳孔大小、异常呼吸）及行为表现（如：步态、姿势、对处理的反应、有无强直性或阵挛性活动、刻板反应、反常行为等）。对体质弱的动物应隔离，濒死和死亡动物应及时解剖。
5.4.3体重和摄食及饮水消耗量
每周记录体重、摄食量，计算食物利用率；试验结束时，计算动物体重增长量、总摄食量、总食物利用率。受试物经饮水给予，应每日记录饮水量。如受试物经掺人饲料或饮水给予，应计算和报告受试物各剂量组实际摄人剂量。
5.4.4眼部检查
GB15193.13—2015
在试验前和试验结束时，至少对高剂量组和对照组大鼠进行眼部检查（角膜、晶状体、球结膜、虹膜），犬用荧光素钠进行检查，若发现高剂量组动物有眼部变化，则应对所有动物进行检查。5.4.5血液学检查
大鼠试验中期（卫星组）、试验结束、恢复期结束（卫星组）进行血液学指标测定；犬试验前、试验期间（45d）、试验结束、恢复期结束（卫星组）进行血液学指标测定。推荐指标为白细胞计数及分类（至少三分类）、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞压积、血小板计数、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT)等。如果对血液系统有影响，应加测网织红细胞、骨髓涂片细胞学检查。5.4.6血生化学检查
大鼠试验中期（卫星组）、试验结束、恢复期结束（卫星组）进行血液生化指标测定；犬试验前、试验期间（45d）、试验结束、恢复期结束（卫星组）进行血液生化指标测定，应空腹采血。测定指标应包括电解质平衡、糖、脂和蛋白质代谢、肝（细胞、胆管）肾功能等方面。至少包含内氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酰转肽酶（GGT）、尿素（Urea）、肌酐（Cr）、血糖（Glu）、总蛋白（TP）、白蛋白（AIb）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、氯、钾、钠指标。必要时可检测钙、磷、尿酸（UA）、总胆汁酸（TBA）、胆碱酯酶、山梨醇脱氢酶、高铁血红蛋白、激素等指标。应根据受试物的毒作用特点或构效关系增加检测内容。5.4.7尿液检查
鼠在试验中期（卫星组）、试验结束、恢复期结束（卫星组）时进行尿液常规检查，大犬试验前、试验期间（45d）、试验结束、恢复期结束（卫星组）进行尿液常规检查。包括外观、尿蛋白、密度、pH、葡萄糖和潜血等。若预期有毒反应指征，应增加尿液检查的有关项目如尿沉渣镜检、细胞分析等。5.4.8体温、心电图检查
犬试验前、试验期间（45d）、试验结束、恢复期结束（卫星组）应进行体温、心电图检查。5.4.9病理检查
5.4.9.1大体解剖
试验结束、恢复期结束（卫星组）时必须对所有动物进行大体检查，包括体表、颅、胸、腹腔及其脏器：并称脑、心脏、胸腺、肾上腺、肝、肾、脾、睾丸、附睾、子宫、卵巢的绝对重量，计算相对重量脏/体比值和（或）脏/脑比值]。
5.4.9.2组织病理学检查
可以先对最高剂量组和对照组动物进行以下脏器组织病理学检查，发现病变后再对较低剂量组相应器官及组织进行检查。检测脏器应包括脑、垂体、甲状腺、胸腺、肺、心脏、肝、脾、肾、肾上腺、胃、干三指肠、空肠、回肠、结肠、直肠、胰、肠系膜淋巴结、卵巢、子宫、罩丸、附罩、前列腺、膀胱等。必要时可加测脊髓（颈、胸、腰）、食道、唾液腺、颈淋巴结、气管、动脉、精囊腺和凝固腺、子宫颈、阴道、乳腺、骨和骨髓、坐骨神经和肌肉、皮肤和眼球等组织器官。对肉眼可见的病变或可疑病变组织进行病理组织学检查。应有组织病理学检查报告，病变组织给出病理组织学照片。4
iiiKAoNhiKAca
5.4.10其他指标
GB15193.13—2015
必要时，根据受试物的性质及所观察的毒性反应，增加其他指标（如：神经毒性、免疫毒性、内分泌毒性指标)。
6数据处理和结果评价
6.1数据处理
应将所有的数据和结果以表格形式进行总结，列出各组试验前的动物数、试验期间动物死亡数及死亡时间、出现毒性反应的动物数，列出所见的毒性反应，包括出现毒效应的时间、持续时间及程度。对计量资料给出均数、标准差和动物数。对动物体重、摄食量、饮水量（受试物经饮水给予）、食物利用率、血液学检查、血生化检查、尿液检查、心电图、脏器重量、脏/体比值和（或）脏/脑比值、病理检查等结果应以适当的方法进行统计学分析。一般情况，计量资料采用方差分析，进行多个试验组与对照组之间均数比较.分类资料采用Fisher精确分布检验、卡方检验、秩和检验，等级资料采用Ridit分析、秩和检验等。6.2结果评价
应将临床观察、生长发育情况、血液学检查、尿液检查、血生化检查、心电图、大体解剖、脏器重量和脏/体比值和（或)脏/脑比值、病理组织学检查等各项结果，结合统计结果进行综合分析，判断受试物毒作用特点、程度、靶器官，剂量-效应、剂量-反应关系，如设有恢复期卫组，还可判断受试物毒作用的可逆性。在综合分析的基础上得出90天经口毒性的LOAEL和（或）NOAEL，为慢性毒性试验的剂量、观察指标的选择提供依据。
7试验报告
试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号。7.2
试验委托单位名称和联系方式样品受理日期7.31
试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期。7.4
试验摘要
7.5受试物：名称、批号、剂型、状态（包括感官、性状、包装完整性、标识）、数量、前处理方法、溶媒实验动物：物种、品系、级别、数量、体重、性别、来源（供应商名称、实验动物生产许可证号），动物7.6
检疫、适应情况，饲养环境（温度、相对湿度、实验动物设施使用许可证号），饲料来源（供应商名称、实验动物饲料生产许可证号）。
7.7试验方法：试验分组、每组动物数、剂量选择依据、受试物给予途径及期限、观察指标、统计学方法7.8试验结果：动物生长活动情况、毒性反应特征（包括出现的时间和转归）、体重增长、摄食量、食物利用率、眼部检查、血液学检查、血生化检查、尿液检查、心电图、大体解部、脏器重量、脏/体比值和（或）脏/脑比值、病理组织学检查结果。如受试物经掺人饲料或掺入饮水给予，报告各剂量组实际摄人剂量。7.9试验结论：受试物90天经口毒作用的特点、剂量-反应关系、靶器官和可逆性，并得出90天经口毒性NOAEL和（或）LOAEL结论等。8试验的解释
应根据现代的毒理学和生物学知识，对试验所得阳性结果是否与受试物有关作出肯定和否定的意见；对出现矛盾的结果应做出合理解释，评价结果的生物学意义和毒理学意义。从剂量-效应和剂量-反应2
GB15193.132015
关系的资料，得出LOAEL和（或)NOAEL。同时对是否需要进行慢性毒性试验，以及对慢性毒性试验的剂量、观察指标等提出建议。由于动物和人存在物种差异，试验结果外推到人有一定的局限性，但也能为初步确定人群的允许接触水平提供有价值的信息6
iiiKAoNhiKAca
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。
GB15193.13—2015
食品安全国家标准
90天经口毒性试验
2015-08-07发布
中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
2015-10-07实施
本标准代替GB15193.13—2003《30天和90天喂养试验》。本标准与GB15193.13—2003相比，主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准90天经口毒性试验”；
修改了“范围”；
增加了“亚慢性毒性”、“最小观察到有害作用剂量”和“卫星组”的定义；修改了“原理”；
增加了“仪器与试剂”项目；
增加了“试验方法”项目；
增加了受试物处理要求；
修改了“实验动物”；
修改了“剂量与分组”；
修改了“操作步骤”；
修改了给予受试物的方式；
修改了观察指标；
GB 15193.13—2015
增加了体重和摄食及饮水消耗量、眼部检查、尿液检查、体温、心电图检查内容；修改了血液学检查、血生化检查、病理检查指标；修改了“数据处理”；
一增加了结果评价内容；
增加了“试验报告”项目；
增加了“结果解释”项目。
1范围
食品安全国家标准
90天经口毒性试验
本标准规定了实验动物90天经口毒性试验的基本试验方法和技术要求本标准适用于评价受试物的亚慢性毒性作用2术语和定义
亚慢性毒性
GB 15193.13—2015
实验动物在不超过其寿命期限10%的时间内（大鼠通常为90d)，重复经口接触受试物后引起的健康损害效应
2.2未观察到有害作用剂量
通过动物试验，以现有的技术手段和检测指标未观察到任何与受试物有关的毒性作用的最大剂量。2.3最小观察到有害作用剂量
在规定的条件下，受试物引起实验动物组织形态、功能、生长发育等有害效应的最小作用剂量。2.4靶器官
实验动物出现由受试物引起明显毒性作用的器官。2.5卫星组
在毒性研究设计和实施中外加的动物组，其处理和饲养条件与主要研究的动物相似，用于试验中期或试验结束恢复期观察和检测，也可用于不包括在主要研究内的其他指标及参数的观察和检测。3试验目的和原理
确定在90d内经口重复接触受试物引起的毒性效应了解受试物剂量-反应关系、毒作用靶器官和可逆性，得出90d经口最小观察到有害作用剂量（LOAEL)和未观察到有害作用剂量（NOAEL），初步确定受试物的经口安全性，并为慢性毒性试验剂量、观察指标、毒性终点的选择以及获得“暂定的人体健康指导值”提供依据。
4仪器和试剂
4.1仪器/器械
实验室常用解剖器械、电子天平、生物显微镜、检眼镜、血生化分析仪、血液分析仪、凝血分析仪、尿液分析仪、心电图扫描仪、离心机、病理切片机等。1
4.2试剂
GB 15193.13—2015
甲醛、二甲苯、乙醇、苏木素、伊红、石蜡、血球分析仪稀释剂、血生化分析试剂、凝血分析试剂、尿液分析试剂(或试纸)等。
5试验方法
5.1受试物
受试物应使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理。将受试物掺人饲料、饮用水或灌胃给予。5.2实验动物
5.2.1动物选择
实验动物的选择应符合GB14922.1和GB14922.2的有关规定。选择已有资料证明对受试物敏感的动物物种和品系，一般啮齿类动物首选大鼠，非啮齿类动物首选犬（通常选用Beagle犬）。大鼠周龄推荐不超过6周，体重50g～100g。试验开始时每个性别动物体重差异不应超过平均体重的土20%，每组动物数不少于20只，雌雄各半；若计划试验中期观察或试验结束做恢复期的观察，应增加动物数（对照和高剂量增加卫星组，每组10只，雌雄各半）。犬通常选用4个月～6个月的幼犬，一般不超过9个月，试验开始时每个性别动物体重差异不应超过平均体重的土20%，每组动物数不少于8只，雌罐各半：若计划试验中间户检或试验结束做恢复期的观察，应增加动物数（对照和高剂量增加卫星组，每组4只，雌雄各半）。对照组动物性别和数量应与受试物组相同。5.2.2动物准备
试验前大鼠在实验动物房至少应进行3d～5d(犬7d～14d)环境适应和检疫观察5.2.3动物饲养
实验动物饲养条件应符合GB14925、饮用水应符合GB5749、饲料应符合GB14924的有关规定。试验期间动物自由饮水和摄食，动物推荐单笼饲养，大鼠也可按组分性别分笼群饲，每笼动物数（一般不超过3只)应满足实验动物最低需要的空间，以不影响动物自由活动和观察动物的体征为宜。试验期间每组动物非试验因素死亡率应小于10%，濒死动物应尽可能进行血液生化指标检测、大体解以及病理组织学检查，每组生物标本损失率应小于10%。5.3剂量
5.3.1分组
试验至少设3个受试物剂量组，1个阴性（溶媒）对照组，必要时增设未处理对照组。若试验中期需要观察血液生化指标、户检或试验结束做恢复期观察，对照和高剂量需增设卫星组。对照组除不给受试物外，其余处理均同受试物剂量组。5.3.2剂量设计
5.3.2.1原则上高剂量应使部分动物出现比较明显的毒性反应，但不引起死亡：低剂量不宜出现任何观紧到毒效应（相当于NOAEL），且高于人的实际接触水平；中剂量介于两者之间，可出现轻度的毒性效应，以得出NOAEL和（或)LOAEL。一般递减剂量的组间距以2倍～4倍为宜，如受试物剂量总跨度2
iiiKAoNiKAca
GB15193.13—2015
过大可加设剂量组。试验剂量的设计参考急性毒性LD5剂量、28天经口毒性试验剂量和人体推荐摄入量进行。
5.3.2.2能求出LDs的受试物，以28天经口毒性试验的NOAEL或LOAEL作为90天经口毒性试验的最高剂量组；或以LDso的5%～15%作为最高剂量组，此LDsa百分比的选择主要参考LDs剂量反应曲线的斜率。然后在此剂量下设几个剂量组，最低剂量组至少是人体推荐摄入量的3倍。5.3.2.3求不出LD的受试物，试验剂量应尽可能涵盖人体预期摄入量100倍的剂量，在不影响动物摄食及营养平衡前提下应尽量提高高剂量组的剂量，对于人体推荐摄人量较大的受试物，高剂量组亦可以按最大给予量设计。
5.4试验步骤和观察指标免费标准bzxz.net
5.4.1受试物给予
5.4.1.1根据受试物的特性或试验目的，选择受试物掺入饲料、饮水或灌胃方式给予。若受试物影响动物适口性，应灌胃给予。受试物应连续给予90d。5.4.1.2受试物灌胃给予，要将受试物溶解或悬浮于合适的溶媒中，首选溶媒为水、不溶于水的受试物可使用植物油（如橄榄油、玉来油等），不溶于水或油的受试物亦可使用羧甲基纤维素、淀粉等配成混液或糊状物等。受试物应新鲜配制，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外。为保证受试物在动物体内浓度的稳定性，每日同一时段灌胃1次（每周灌胃6d）。试验期间，前4周每周称体重2次，之后每周称体重1次按体重调整灌胃体积。灌胃体积一般不超过10mL/kg体重，如为水溶液时，最大灌胃体积大鼠可达20mL/kg体重，犬为15mL/kg体重；如为油性液体，灌胃体积应不超过4mL/kg体重；各组灌胃体积一致。
5.4.1.3受试物掺人饲料或饮水给予，要将受试物与饲料（或饮水)充分混匀并保证该受试物配制的稳定性和均一性，以不影响动物摄食、营养平衡和饮水量为原则，受试物掺入饲料比例一般小于质量分数5%，若超过5%时（最大不应超过10%），可调整对照组饲料营养素水平（若受试物无热量或营养成分且添加比例大于5%时，对照组饲料应填充甲基纤维素等，掺人量等同高剂量），使其与剂量组饲料营养素水平保持一致，同时增设未处理对照组；亦可视受试物热量或营养成分的状况调整剂量组饲料营养素水平，使其与对照组饲料营养素水平保持一致。受试物剂量单位是每千克体重所摄入受试物的毫克（或克）数.即mg/kg体重（或g/kg体重），当受试物掺人饲料其剂量单位亦可表示为mg/kg（或g/kg）饲料，掺人饮水则表示为mg/mL水。受试物掺人饲料时，需将受试物剂量（mg/kg体重）按动物每100g体重的摄食量折算为受试物饲料浓度（mg/kg饲料），一般90天经口毒性试验大鼠每日摄食量按体重8%折算。
5.4.2一般临床观察
观察期限为90d，若设恢复期观察，动物应停止给予受试物后继续观察28d，以观察受试物毒性的可逆性、持续性和迟发效应。试验期间至少每天观察一次动物的一般临床表现，并记录动物出现中毒的体征、程度和持续时间及死亡情况。观察内容包括被毛、皮肤、眼、黏膜、分泌物、排泄物、呼吸系统、神经系统、自主活动（如：流泪、竖毛反应、瞳孔大小、异常呼吸）及行为表现（如：步态、姿势、对处理的反应、有无强直性或阵挛性活动、刻板反应、反常行为等）。对体质弱的动物应隔离，濒死和死亡动物应及时解剖。
5.4.3体重和摄食及饮水消耗量
每周记录体重、摄食量，计算食物利用率；试验结束时，计算动物体重增长量、总摄食量、总食物利用率。受试物经饮水给予，应每日记录饮水量。如受试物经掺人饲料或饮水给予，应计算和报告受试物各剂量组实际摄人剂量。
5.4.4眼部检查
GB15193.13—2015
在试验前和试验结束时，至少对高剂量组和对照组大鼠进行眼部检查（角膜、晶状体、球结膜、虹膜），犬用荧光素钠进行检查，若发现高剂量组动物有眼部变化，则应对所有动物进行检查。5.4.5血液学检查
大鼠试验中期（卫星组）、试验结束、恢复期结束（卫星组）进行血液学指标测定；犬试验前、试验期间（45d）、试验结束、恢复期结束（卫星组）进行血液学指标测定。推荐指标为白细胞计数及分类（至少三分类）、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞压积、血小板计数、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT)等。如果对血液系统有影响，应加测网织红细胞、骨髓涂片细胞学检查。5.4.6血生化学检查
大鼠试验中期（卫星组）、试验结束、恢复期结束（卫星组）进行血液生化指标测定；犬试验前、试验期间（45d）、试验结束、恢复期结束（卫星组）进行血液生化指标测定，应空腹采血。测定指标应包括电解质平衡、糖、脂和蛋白质代谢、肝（细胞、胆管）肾功能等方面。至少包含内氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酰转肽酶（GGT）、尿素（Urea）、肌酐（Cr）、血糖（Glu）、总蛋白（TP）、白蛋白（AIb）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、氯、钾、钠指标。必要时可检测钙、磷、尿酸（UA）、总胆汁酸（TBA）、胆碱酯酶、山梨醇脱氢酶、高铁血红蛋白、激素等指标。应根据受试物的毒作用特点或构效关系增加检测内容。5.4.7尿液检查
鼠在试验中期（卫星组）、试验结束、恢复期结束（卫星组）时进行尿液常规检查，大犬试验前、试验期间（45d）、试验结束、恢复期结束（卫星组）进行尿液常规检查。包括外观、尿蛋白、密度、pH、葡萄糖和潜血等。若预期有毒反应指征，应增加尿液检查的有关项目如尿沉渣镜检、细胞分析等。5.4.8体温、心电图检查
犬试验前、试验期间（45d）、试验结束、恢复期结束（卫星组）应进行体温、心电图检查。5.4.9病理检查
5.4.9.1大体解剖
试验结束、恢复期结束（卫星组）时必须对所有动物进行大体检查，包括体表、颅、胸、腹腔及其脏器：并称脑、心脏、胸腺、肾上腺、肝、肾、脾、睾丸、附睾、子宫、卵巢的绝对重量，计算相对重量脏/体比值和（或）脏/脑比值]。
5.4.9.2组织病理学检查
可以先对最高剂量组和对照组动物进行以下脏器组织病理学检查，发现病变后再对较低剂量组相应器官及组织进行检查。检测脏器应包括脑、垂体、甲状腺、胸腺、肺、心脏、肝、脾、肾、肾上腺、胃、干三指肠、空肠、回肠、结肠、直肠、胰、肠系膜淋巴结、卵巢、子宫、罩丸、附罩、前列腺、膀胱等。必要时可加测脊髓（颈、胸、腰）、食道、唾液腺、颈淋巴结、气管、动脉、精囊腺和凝固腺、子宫颈、阴道、乳腺、骨和骨髓、坐骨神经和肌肉、皮肤和眼球等组织器官。对肉眼可见的病变或可疑病变组织进行病理组织学检查。应有组织病理学检查报告，病变组织给出病理组织学照片。4
iiiKAoNhiKAca
5.4.10其他指标
GB15193.13—2015
必要时，根据受试物的性质及所观察的毒性反应，增加其他指标（如：神经毒性、免疫毒性、内分泌毒性指标)。
6数据处理和结果评价
6.1数据处理
应将所有的数据和结果以表格形式进行总结，列出各组试验前的动物数、试验期间动物死亡数及死亡时间、出现毒性反应的动物数，列出所见的毒性反应，包括出现毒效应的时间、持续时间及程度。对计量资料给出均数、标准差和动物数。对动物体重、摄食量、饮水量（受试物经饮水给予）、食物利用率、血液学检查、血生化检查、尿液检查、心电图、脏器重量、脏/体比值和（或）脏/脑比值、病理检查等结果应以适当的方法进行统计学分析。一般情况，计量资料采用方差分析，进行多个试验组与对照组之间均数比较.分类资料采用Fisher精确分布检验、卡方检验、秩和检验，等级资料采用Ridit分析、秩和检验等。6.2结果评价
应将临床观察、生长发育情况、血液学检查、尿液检查、血生化检查、心电图、大体解剖、脏器重量和脏/体比值和（或)脏/脑比值、病理组织学检查等各项结果，结合统计结果进行综合分析，判断受试物毒作用特点、程度、靶器官，剂量-效应、剂量-反应关系，如设有恢复期卫组，还可判断受试物毒作用的可逆性。在综合分析的基础上得出90天经口毒性的LOAEL和（或）NOAEL，为慢性毒性试验的剂量、观察指标的选择提供依据。
7试验报告
试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号。7.2
试验委托单位名称和联系方式样品受理日期7.31
试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期。7.4
试验摘要
7.5受试物：名称、批号、剂型、状态（包括感官、性状、包装完整性、标识）、数量、前处理方法、溶媒实验动物：物种、品系、级别、数量、体重、性别、来源（供应商名称、实验动物生产许可证号），动物7.6
检疫、适应情况，饲养环境（温度、相对湿度、实验动物设施使用许可证号），饲料来源（供应商名称、实验动物饲料生产许可证号）。
7.7试验方法：试验分组、每组动物数、剂量选择依据、受试物给予途径及期限、观察指标、统计学方法7.8试验结果：动物生长活动情况、毒性反应特征（包括出现的时间和转归）、体重增长、摄食量、食物利用率、眼部检查、血液学检查、血生化检查、尿液检查、心电图、大体解部、脏器重量、脏/体比值和（或）脏/脑比值、病理组织学检查结果。如受试物经掺人饲料或掺入饮水给予，报告各剂量组实际摄人剂量。7.9试验结论：受试物90天经口毒作用的特点、剂量-反应关系、靶器官和可逆性，并得出90天经口毒性NOAEL和（或）LOAEL结论等。8试验的解释
应根据现代的毒理学和生物学知识，对试验所得阳性结果是否与受试物有关作出肯定和否定的意见；对出现矛盾的结果应做出合理解释，评价结果的生物学意义和毒理学意义。从剂量-效应和剂量-反应2
GB15193.132015
关系的资料，得出LOAEL和（或)NOAEL。同时对是否需要进行慢性毒性试验，以及对慢性毒性试验的剂量、观察指标等提出建议。由于动物和人存在物种差异，试验结果外推到人有一定的局限性，但也能为初步确定人群的允许接触水平提供有价值的信息6
iiiKAoNhiKAca
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。