SN/T 1753-2016 出口浓缩果汁中甲基硫菌灵、噻菌灵、多菌灵和2-氨基苯并咪唑残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法 SN/T1753-2016 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1753—2016
代替SV/T17532006
出口浓缩果汁中甲基硫菌灵、噻菌灵、多菌灵和2-氨基苯并咪唑残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of thiophanate-methyl,thiabendazole,carbendazim and2-aminobenzimidazole residues in concentrated juicesforexport-LC-MS/MSmethod
2016-06-28发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
婴自直信
2017-02-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。SN/T1753—2016
本标准代替SN/T1753一2Q06&进出口浓缩果汁中噻菌灵，多菌灵残留量测定方法谱法》。
本标准与SN/T1753—2006相比主要修改如下：修改了标准名称；
高效液相色
增加了甲基硫菌灵和2-氨基苯并咪唑残留量的同时测定，测定方法由液相色谱法改为液相色谱-质谱/质谱法。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广西出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国陕西出入境检验检疫局、广西大学。本标准主要起草人：刘晓松，郑玲、李、凌经昌、吕春秋、宁恩创、黄文雯、孔祥虹、方晓明。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T1753—2006。
1范围
出口浓缩果汁中甲基硫菌灵、噻菌灵多菌灵和2-氨基苯并咪唑残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
SN/T1753-—2016
本标准规定了出口浓缩果汁中甲基硫菌灵、噻菌灵、多菌灵和2氨基苯并咪唑残留量的液相色谱质谱/质谱测定方法。
本标准适用于浓缩果汁中甲基硫菌灵、噻菌灵、多菌灵和2-氨基苯并咪唑残留量的检测和确证，规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样以0.2mol/L磷酸氢二钠溶液稀释、氢氧化钠溶液调节pH至8.58.6后.用乙睛提取，经乙二胺基-N-丙基（PSA)柱净化，用液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水4.1
乙睛：色谱纯：
甲醇：色谱纯。
甲苯：色谱纯。
甲酸：色谱纯。
乙酸铵：色谱纯
磷酸氢二钠：NaHPO，·12HO。
氯化钠。
无水硫酸钠：用前在650℃灼烧4h，贮于干燥器中，冷却后备用。4.9
磷酸：含量≥85%。
甲基硫菌灵标准品：Cz2HNO.Sz，CAS号23564-05-8，纯度大于或等于98%：障菌灵标准品：ClH,N.S.CAS号148-79-8.纯度大于或等于98%：多菌灵标准品：CH2NO.CAS号10605-21-7.纯度大于或等于98%；2-氨基苯并咪唑标准品：CH.NCAS号934-32-7，纯度大于或等于98%。4.110.2mol/L磷酸氢二钠溶液：称取17.91g磷酸氢二钠.用水溶解.定容至250mL。4.122mol/L氢氧化钠溶液：称取8.0g氢氧化钠，用水溶解，定容至100ml。4.13，乙睛-甲荣（3+1）：量取300mL乙腈和100mL甲苯，混匀。1
SN/T1753—2016
10mmol/L乙酸铵（含0.1%甲酸）：称取0.77g乙酸铵，用水溶解，加入1mL甲酸，用水定容至4.141
4.15甲醇-10mmol/l乙酸铵（含0.1%甲酸）溶液：10mL甲醇加人90ml.10mmol/L乙酸铵（含01%甲酸）（4.14）.混勾
4.16标准储备溶液：分别准确称取10mg（精确到0.1mg）各标准品于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，分别配制成浓度为100μg/mL的标准储备液，于18℃避光保存。4.17混合标准中间液：准确吸取各标准储备液10ml.于100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配成浓度为10g/mL的混合标准中间溶液，于一18℃避光保存。4.18混合标准工作液：根据需要使用相应的空白样品基质配制适当浓度混合标准工作溶液。4.19PSA固相萃取柱：500mg/3mL，或相当者。使用前加1多无水硫流酸钠，用4mL乙睛甲苯溶液(4.13)淋洗、活化柱子。
4.20滤膜：0.22um，有机系。
仪器和设备
液相色谱-质谱/质谱联用仪：配电喷雾电离源（ESI）。5.1
电子天平：感量0.1mg0.001
pH计。
振荡器。
台式离心机：4000r/min
高速离心机：10000r/min。
旋转蒸发仪。
旋涡混合器。
固相萃取柱装置。
氮吹仪。
超纯水器。
6试样制备与保存
6.1试样制备
取有代表性样品约500g，装人洁净容器作为试样，密封并标明标记。6.2试样保存
试样于一18℃以下保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。7测定步骤
7.1提取
称取2g试样（精确到0.001g）于50mL螺旋盖案丙烯离心管中，加入10ml.0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（4.11）和3g氯化钠，混匀，用2mol/L氢氧化钠溶液（4.12）调pH至8.5~~8.6，加人10mL乙2
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，振荡提取15min，以8000r/min离心10min。取10mL上层清液到100ml鸡心瓶中，40℃减压浓缩至1.5ml2mL，待净化。
7.2净化
将7.1中提取液转移至PSA固相萃取柱（4.19）中，用2mL乙腈-甲苯（4.13）润洗鸡心瓶并转移至柱中，重复润洗3次，最后用15mL乙睛-甲苯（4.13）洗脱。在整个操作过程中应注意避免小柱干调，固相萃取过程流速不超过1mL/min。收集全部流出液于100ml鸡心瓶中，于40℃减压浓缩至1.5mL~2mL.后将其转移至15mL的离心管中，用3ml.乙晴-甲苯（4.13）分两次洗涤鸡心瓶.合并洗涤液到同一离心管中，于40℃水浴下氮吹至近干。残留物用1.0mL的甲醇-10mmol/L乙酸铵（含0.1%甲酸）溶液（4.15）溶解，并涡旋混合1mi五，过微孔滤膜后，供测定7.3测定
液相色谱参考条件
1色谱柱：C18柱，50mm×4.6mm（内径）.1.8mm，或相当者7.3.1.1
2流动相：甲醇和10mmol/L乙酸铵（含0.1%甲酸）溶液（4.14），梯度洗脱程序见表1。7.3.1.2
进样量：10L。
柱温：40℃
流速：0.4mL/min。
表1梯度洗脱程
时间/min
质谱/质谱参考条件
能动相
电离方式：电喷雾电离，正离子10m
流动相B
（1.乙酸铵（含0.1%甲酸）/%
质谱/质谱条件：采用多反应监测模式（MRM)检测.具体参数参见附录A。其他仪器条件：参见附录A
定性测定
按照上述条件测定试样和标准工作溶液，如果试样中的质量色谱峰保留时问与标准工作溶液一致（变化范围在土2.5%之内）：样品中目标化合物的定性子离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在待测物。3
SN/T1753--2016
相对离子丰度
允许的相对偏差
7.3.4定量测定
定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差50%
>20%~50%
10%~20%
根据样液中被测物的含量，选定浓度相近的标准工作溶液，对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。试样中被测物的响应值应在仪器检测的线性范围内，若其响应值超过线性范围，可调整定容体积使之满足测定要求。在7.3.2.2液相色谱-质谱/质谱条件下，2基苯并咪唑、多菌灵、睡菌灵、甲基硫菌灵的保留时间分别为4.0min.5.9min.6.5min、7.8min.标准品的液相色谱-质谱/质谱图参见附录B中图B.1。
空白试验
除不加试样外，均按7.1、7.2、7.3.1~7.3.4步骤进行8
结果计算和表述
试样中被测物的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得，计算结果需扣除空白值，并保留两位有效数字：
式中：
A,XcXVX1000
AXmx1000
试样中被测物的残留量，单位为微克每干克（μg/kg）；样液中被测物的峰面积：
标准工作液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml）)：样液最终定容体积，单位为毫升（mL)：标准工作液中被测物的峰面积：试样的质量，单位为克（g）；
稀释倍数。
测定低限、回收率
测定低限
.......)
本方法的测定低限：2-氨基苯并咪唑为2ug/kg，多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵均为1g/kg回收率
样品的添加浓度及回收率的数据参见附录C质谱参考条件：
毛细管电压：4000V：
雾化气温度：350℃；
雾化气流速：121/min
雾化气压力：0.276MPa（40psi)。d)
附录A
（资料性附录）
质谱参考条件！
多反应监测模式(MRM)条件见表A.1。表A.1
化合物
2-氨基苯并咪唑
多菌灵
噻菌灵
甲基硫菌灵
+定量离子对。
多反应监测模式（MRM）条件
离子对
134/65*
134/92
192/1608
192/132
202/175
202/131
343/151
343/311
数解电压
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避撞能量
1）非商业性声明：附录所列参考质谱条件是在Agilent641013型液质联用仪上完成的：此处列出试验型号仅为提供参考，并不涉及商业目的.鼓励标准使用者尝试使用不同厂家或型号的仪器，5
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附录B
（资料性附录）
色谱图
标准品的液相色谱-质谱/质谱图见图B.1X108
m/z134.1>6起
m/z134.1>92,1
2-氨基苯井咪唑
m/=202.0>131.1
m/=202.0>175.1
噻菌灵
2.1>132.1
m/=192.1160,1
多菌灵
m/=343.1>151.0
m/=343.1>311.0
甲基硫菌灵
标准品的液相色谱-质谱/质谱色谱图（MRM检测）min
SN/T1753—2016
SN/T1753—2016
Foreword
Thisstandard isdrafted allordingtoGB/T1.1-2009This standard replaced SN/T1753--2006Determinationofthiabendazoleand carbendazimresidues inconcentrated fruitjuices forimportand export-Highperformance liquidchromatographicmethodCompared with SN/T1753-2006,this standard has themain changeswhich areas follows:-Modifythe nameof the standard-Measuring method changedbyhigh performance liquid chromatography(HPLC)to the liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry (LC-Ms/MS),This standard increased thio-phanate-methyl and 2-aminobenzimidazole residues determination at the same time.Pleasepayattentionthat some ofthe contentofthisdocumentmayinvolvepatents,thepublisherofthis document does not assume the responsibility to identify these patents.This standard was proposed by and was under the charge of the Certification and Accreditation Ad-ministrationof thePeople'sRepublic ofChina.This standard was drafted by Guangxi Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Shanghai EntryExit Inspection and Quarantine Bureau, Shanxi Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of thePeople'sRepublicofChinaGuangxiUniversityThis standard was mainly drafted by Liu Xiaosong,Zhen Ling,Li Yon,Ling Jingchang,Lv Chungiu,NingEnchuang,HuangWenwen,KongXianghong.FangXiaoming.This standard replaces the previous version:—SN/T1753—2006.
SN/T1753—2016
Determinationof thiophanate-methyl,thiabendazole，carbendazimand2-aminobenzimidazole residues in concentrated juicesforexport-Lc-MS/MSmethod
This standard specifies the determination of thiophanate-methyl.thiabendazole,carbendazim and 2-aminobenzimidazoleresidues in concentrated juicesforimportandexport-LC-MS/MSmethodThis standard is applicable to the determination and confirmation of thiophanate-methylthiaben-dazole,carbendazim and 2-aminobenzimidazole residues in concentrated juices.2NormativereferencedocumentsThe following documents for the application of this document is indispensable. For documents whichnote date,onlynote date version applicable to this standard.For those which doesn't note date.thelatestversion(includingall themodified single)applicabletothisdocument.GB/T6682WaterforAnalysis laboratoryuse-Specificationsand testmethods3
Principle
Dilute the test sample with O.2mol/L disodium hydrogen phosphate solution, and adjust pH to8.5~8.6with sodium hydroxide solution.Extract with acetonitrile.and clean up with an ethylenediamine base-N-propyl (PSA) column, HPLC-MS/Ms is used to determine using external standardmethod forquantity
Reagents and materials
Unless specified,all the reagents used should be analytical grade,and\water\ is the top levelinGB/T6682
4.1 Acetonitrile;HPLC grade.9
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4.2Methanol;HPLCgrade.
Toluene:HPLCgrade.
Formic acid:HPLC grade
Ammoniumacetate:HPLCgrade
sDisodiumhydrogenphosphate:Na,HPOa·12H,O.4.6
Sodiumchloride.
4.8 Anhydrous sodium sulfate:Burn at 650 C for 4 hours before using.store in the dryer, andreserve after cooling
4.9Phosphoric acid:Content≥85%4.10Thiophanate-methyl standard:CrHiaN.O.S,.CAsNo.23564-05-8.purity≥98%;thiabendazolestandard.ChH,NS,CAsNo.148-79-8,purity98%carbendazimstandard.CisHi2NO,CASNo.10605-21-7.purity98%；2-aminobenzimidazolestandard:C,H,N..CASNo.934-32-7.purity≥98%4.110.2mol/Ldisodiumhydrogenphosphate
esolution:take17.91gdisodiumhydrogenphosphateand dilute withwaterto250mL
4.122mol/Lsodiumhydroxidesolution:take8.0gsodium hydroxideand dilutewithwaterto100mL.
Acetonitrile-toluene(3+1),blend 300mLacetonitrilewithn00mLtoluene.4.1410 mmol/L ammonium acetate solutionCincluding0.1%
formicacid):takeo.77gammoniumacetateand dilute with water,then add 1 mL formic acid, and dilute with water to 1L.Methanol-10 mmol/Lammonium acetate solution containing 0.1% formic acid:Add 10 mL4.15
methanol into 90 mL 10 mmol/L ammonium acetate solution containing 0.1% formic acid (4.14),andmix well.
Standard stock solutions:Accurately weigh 10 mg(accurate to 0.1 mg)of the standard to a100 mL brown volumetric flask and dissolve with methanol to the volume,obtaining 100 μg/mL ofthe standard stock solution,respectively.The solutions are stored at-18 C,and avoid light.4.17Mixed standard intermediate solution:Accuratelypipette10mLof eachstandard stock solutionto a 100 mL brown volumetric flask,and dissolve with methanol to the volume,obtaining 10 μg/mLof the mixed standard intermediate solution.The solution is stored at -18 Cand avoid light.10
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