GB/T 36204-2018 肥料中赤霉酸含量的测定 高效液相色谱-质谱联用仪法 GB/T36204-2018 标准压缩包解压密码：www.bzxz.net

ICS65.080
中华人民共和国国家标准
GB/T36204—2018
肥料中赤霉酸含量的测定
高效液相色谱-质谱联用仪法
Determination of gibberellic acid in fertilizer-High performance liquidchromatography-massspectrometrymethod2018-05-14发布
国家市场监督管理总局
中国国家标准化管理委员会
2018-12-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中国石油和化学工业联合会提出，本标准由全国肥料和土壤调理剂标准化技术委员会（SAC/TC105)归口。GB/T36204—2018
本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、上海化工研究院有限公司、云南省化工产品质量监督检验站、贵州省产品质量监督检验院、河南省化工研究所有限公司、黑龙江省质量监督检测研究院、临沂市产品质量监督检验所、山东农大肥业科技有限公司。本标准主要起草人：张娟、段路路、桂素萍、苏本玉、陈蕾、鞠福龙、钟宏波、窦兴霞、朱海荣、丁方军、陈萌、杜秀明、洪丽玲。
1范围
肥料中赤霉酸含量的测定
高效液相色谱-质谱联用仪法
GB/T36204—2018
本标准规定了用高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定肥料中赤霉酸的含量。本标准适用于水溶肥料、复混肥料（复合肥料）、掺混肥料等肥料中赤霉酸含量的测定本方法亦霉酸的检出限为0.1mg/kg，定量限为0.5mg/kg2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
样品用甲酸-甲醇溶液和甲酸溶液超声提取，以甲酸-甲醇溶液和甲酸溶液作为流动相，使用C18为填料的不锈钢色谱柱，用高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪进行测定，外标法定量。4试剂和材料
4.1一般规定：本标准中所用的试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂。本标准中所使用的水，在未说明规格时，应符合GB/T6682中的一级水规格。4.2甲醇：色谱纯。
4.3甲酸：色谱纯。
4.4甲酸-甲醇溶液：准确移取1.0mL甲酸（4.3），用甲醇（4.2)稀释至1L。4.5甲酸溶液：准确移取1.0mL甲酸（4.3），用水稀释至1L。4.6初始流动相：甲酸-甲醇溶液（4.4）和甲酸溶液（4.5)以1：9的比例混合均勾，现配现用。4.7赤霉酸标准品（Gibberellicacid，CAS号为77-06-5）：分子式：Ci，Hz2O。相对分子质量：346.38。纯度99.0%。
4.8赤霉酸标准储备溶液：准确称取赤霉酸标准品（4.7)0.1g（精确0.1mg），置于100mL容量瓶中，用甲醇（4.2）溶解并稀释至刻度，溶液浓度为1mg/mL，避光0℃～2℃冷藏避光保存，有效期3个月。4.9赤霉酸标准工作溶液：将赤霉酸标准储备溶液（4.8）用甲醇（4.2）稀释成1ug/mL的工作溶液，现配现用。
5仪器与设备
5.1高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。5.2涡旋混合器。
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超声波清洗器。
5.4高速离心机：转速高于8000r/min。5.5电子天平：感量0.1mg。
5.6有机相微孔滤膜：0.22um。
离心管：50mL，
实验室常用玻璃仪器。
测定步骤
平行试验
做两份试料的平行测寇
样品预处理
称取1g~
2g（精确至0.1mg）样品置于50mL离心管中，加入20mL初始流动相（4.6）用涡旋混合器均质1mi后，室温下超声30min，放置于转速为8000r/min的离心机内离心5min，转移全部上5L容量瓶井用初始流动相1.6定容，播匀后，取适量样品游液经0.22um有机相微孔滤层清液至25
膜过滤，待测
高效液相色谱-三重四级杆电联质谱仪参考条件液相色谱参考条件
包谱柱
Ca（2.1mm50
或相当
桂温：30
样品室温度：15℃
流动相：动相A
洗脱条件见表1
流速3mmin；
进样量0
时间/min
质谱参考条件：
用酸开浴液和流动柱B甲酸容液（4.5）高效液相色谱梯度表1高效液相色谱梯度洗脱条件
流动相A含量
离子源：电喷雾离子源（ESI)；扫描模式：负离子扫描；
检测方式：多反应监测模式（MRM)；离子源温度：550℃或相当；
流动相B含量/%
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雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气（纯度≥99.999%）：使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，其他参考条件参见附录A。6.4测定
6.4.1标准工作溶液的配制
准确移取0mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL赤霉酸标准工作溶液（4.9）分别置于10mL容量瓶中，用初始流动相（4.6）定容，配制的标准工作溶液的浓度依次为0ng/mL、10ng/mL20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL。测定前配制。6.4.2
定性测定
按6.3的仪器条件对标准工作溶液和试液进行分析，根据样品色谱峰的保留时间与标准品的保留时间相对照，样品与标准品保留时间的相对偏差不大于5%，样品特征离了子与标准品各特征离子相对
照，样品特征离子的相对丰度与标准品的相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判定样品中含有赤霉酸。
表2定性测定时相对离子丰度最大允许偏考相对离子丰度/%
允许的相对偏差
6.4.3定量测定
采用外标法定量测定。在仪养最准主作条件测示准工作落液，以峰面积为纵坐标对应的标准工作溶液的浓度为横坐标，会润标准工作画线本霍酸标生物质的提取离子质谱图参见附录B中的图B.1。
取样品待测液，按照6.3
和峰面租用标准工作曲线对
样品进行定量，样品溶液中待测物响应值均应在仪器测定的线性范围之内。6.5
空白试验
除不加试料外，均按上述操作步骤进行7结果计算
赤需酸的含量X，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1)计算：(C-C)XV.XD
式中：
由标准曲线得到样品中赤霉酸的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；由标准曲线得到空白试验中赤需酸的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；样品溶液（或稀释后）的总体积，单位为毫升（mL）：V
样品稀释倍数；
样品质量，单位为克（g)。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留三位有效数字。.（1www.bzxz.net
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方法回收率和精密度
回收率
本方法在线性范围内的添加浓度水平的回收率在80%～120%之间。精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应不大于表3中相应数值。
实验室内重复性要求
赤霉酸含量X./（mg/kg）
1050<≤500
实验室内精密度/%
实验室间精密度/%
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（资料性附录）
UPLC-MS/MS系统电喷雾离子源参考条件UPLC-MS/MS系统电喷雾离子源参考条件如下：a)
电喷雾电压（IS)：4500V；
雾化气压力：55psi(1psi=6894.757Pa)；气帘气压力：40psi；
辅助加热气压力：55psi；
碰撞气压力（CAD)：8psi
离子对、解吸电压、碰撞气能量见表A.1。表A.1
赤霉酸
母离子（M-H)
(m/2）
赤霉酸离子对、解吸电压、碰撞气能量子离子
(m/z）
定量离子对
(n/z）
345239
解吸电压/V
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碰撞气能量/eV
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（资料性附录）
赤霉酸标准物质的提取离子质谱图3.50
时间/min
赤霉酸标准物质的提取离子质谱图KAONKAca
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国家标准
肥料中赤霉酸含量的测定
高效液相色谱-质谱联用仪法
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开本880×12301/16
2018年5月第一版
印张0.75字数14千字
2018年5月第一次印刷
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