GB 31660.1-2019
基本信息
标准号： GB 31660.1-2019
中文名称：水产品中大环内酯类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
标准类别：国家标准(GB)
标准状态：现行
出版语种：简体中文
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相关标签： 水产品 大环内酯 类药物 残留量 测定 色谱 串联 质谱法
标准分类号
关联标准
出版信息
相关单位信息
标准简介
标准号：GB 31660.1-2019
标准名称：水产品中大环内酯类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
英文名称：Determination of macrolides residues in fishery products by liquid
chromatography-tandem mass spectrometric method
标准格式：PDF
发布时间：2019-09-06
实施时间：2020-04-01
标准大小：1.52M
标准介绍：本标准规定了水产品中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于水产品中鱼、虾、蟹、贝类等的可食组织中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件GBT6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中大环内酯类药物的残留经乙腈提取，正己烷除脂、中性氧化铝柱净化，液相色谱串联质谱法测定，外标法定量
4试剂与材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GBT6682规定的一级水。
4.1试剂
41.1乙腈(CH3CN)：色谱纯
41.2甲醇(CH3OH)：色谱纯
41.3正己烷(CHl4)：色谱
41.4甲酸( HCOOH)：色谱纯。
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标准内容
中华人民共和国国家标准
GB31660.1—2019
食品安全国家标准
水产品中大环内酯类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
National food safety standard-Determination of macrolides residues in fishery products by liquidchromatography-tandemmassspectrometricmethod2019-09-06发布
中华人民共和国农业农村部
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
2020-04-01实施
本标准系首次发布。
GB31660.1—2019
食品安全国家标准
GB31660.1—2019
水产品中大环内酯类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围
本标准规定了水产品中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素，螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于水产品中鱼、虾、蟹、贝类等的可食组织中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量的检测。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样中大环内酯类药物的残留经乙睛提取，正已烷除脂、中性氧化铝柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。4试剂与材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水4.1试剂
4.1.1乙腈（CHsCN）：色谱纯。4.1.2
甲醇（CHsOH）：色谱纯。
正已烷（CH14）：色谱纯。
4.1.4甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.5
乙酸铵（CH,COONH4）。
异丙醇（CH3）2CHOH。
4.2溶液配制
4.2.1乙睛饱和正已烷：取正已烷200mL于250mL分液漏斗中，加入适量乙睛后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙睛层即得。1
GB31660.1—2019
4.2.20.05mol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵0.77g，用水溶解并稀释至200mL。4.2.30.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至1000mL。4.2.4定容液：取乙20mL和乙酸铵溶液80mL，混合均匀。4.3标准品
竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素含量均≥92.0%，吉他霉素含量≥72.0%，具体见附件A。4.4标准溶液制备
4.4.1标准贮备液：取竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星和泰乐菌素标准品各适量（相当于各活性成分约10mg），精密称定，分别于100mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100ug/mL大环内酯类药物标准贮备液。红霉素、克拉霉素和泰乐菌素-20℃以下避光保存，竹桃霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星4℃以下避光保存，有效期3个月。4.4.2混合标准工作液：精密量取标准贮备液各1mL，于10mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL大环内酯类药物混合标准工作液。4℃以下避光保存，有效期1个月。
4.5材料
4.5.1中性氧化铝固相萃取柱：2g/6mL，或相当者。4.5.2尼龙微孔滤膜：0.22um。
5仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪：配电喷务离子源分析天平：感量0.00001g和0.01g5.2
氮吹仪。
旋涡混合器：3000r/min。
移液枪：200uL，1mL，5mL。
离心机：4000r/min
梨形瓶：100mL。
超声波振荡器。
旋转蒸发器。
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。2
取均质后的供试样品，作为供试试料。取均质后的空白样品，作为空白试料。GB31660.12019
取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2试料的保存
-18℃以下保存，3个月内进行分析检测。7测定步骤
7.1提取
取试料5g（准确至土20mg），于50mL塑料离心管，加入乙睛20mL，于旋涡混合器上以2000r/min旋涡1min，超声5min，以3500r/min离心6min，取上清液转移至另一离心管中，残渣再加乙睛15mL，重复提取一次，合并上清液，备用。7.2净化
中性氧化铝固相萃取柱预先用乙睛5mL活化，取备用液过柱，用乙睛5mL洗脱，收集洗脱液于梨形瓶中，加入异丙醇4mL，40℃旋转蒸发至干。精密加入定容液2mL溶解残余物，加乙睛饱和正已烷2mL，转至10mL离心管中，旋涡10s，以3000r/min离心8min，取下层清液过0.22um滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。7.3基质匹配标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液适量，用空白样品提取液溶解稀释，配制成大环内酯类药物浓度为1ng/mL、5ng/mL、20ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL和1000ng/mL的系列基质标准工作溶液；现配现用。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。7.4测定
7.4.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Ci色谱柱（150mm×2.0mm，5μm）或相当者：b）流动相：A：0.1%的甲酸水溶液，B：乙睛，梯度洗脱程序见表1：c）流速：0.2mL/min；
d）柱温：30℃；
e）进样量：10μL。
表1流动相梯度洗脱条件
时间，min
质谱参考条件
0.1%甲酸水溶液，%
乙，%
a）离子源：电喷雾（ESI）离子源；b）扫描方式：正离子扫描：
c）检测方式：多反应监测；
d）喷雾电压：4000V：
e）离子传输毛细管温度：350℃；f）雾化气压力：248KPa；
g）辅助气压力：48KPa；
h）定性离子对、定量离子对和碰撞能量见表2、表2
化合物名称
竹桃霉素（OLD）
红霉素（ERM）
克拉霉素（CLA）
阿奇霉素（AZI）
吉他霉素（KIT）
交沙霉素（JOS）
螺旋霉素（SPI）
替米考星（TIL）
泰乐菌素（TYL）
测定法
a）定性测定
定性离子对、定量子离子和碰撞能量定性离子对及碰撞能量，eV
688.4/158.1(28)
688.4/544.3（16)
734.4/158.2(28)
734.4/576.2(18)
748.5/158.1(28)
748.5/590.4（18)
749.5/158.0（36)
749.5/591.4(27)
772.4/109.4(33)
772.4/174.3(30)bzxZ.net
828.3/109.4(35)
828.3/174.1(32)
843.4/174.2 (36)
843.4/142.1(40)
869.5/137.7 (41)
869.5/696.3(36)
916.4/174.2(36)
916.4/772.2（29）
GB31660.1—2019
定量离子对及碰撞能量，eV
688.4/544.3(16)
734.4/576.2（18)
748.5/158.1（28)
749.5/158.0(36)
772.4/174.3(30)
828.3/174.1(32)
843.4/174.2(36)
869.5/696.3(36)
916.4/174.2(36)
在同样测试条件下，试样溶液中大环内酯类药物的保留时间与标准工作液中大环内酯类药物的保留时间之比，偏差在±5%以内，且检测到的离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符合表3要求。表3定性确证时相对离子丰度的允许偏差相对离子丰度，%
b）定量测定
允许偏差，%
GB31660.1—2019
按7.4.1和7.4.2设定仪器条件，以基质标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，作单点或多点校准，按外标法计算试样中药物的残留量，定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片。标准溶液特征离子质量色谱图参见附录B。7.5
空白试验
除不加试料外，均按上述测定步骤进行。结果计算和表述
试样中待测药物的残留量按式（1）计算：X=C,×A×V
式中：
X一试样中被测组分的残留量，单位为微克每千克（ug/kg）：1
C一标准工作液测得的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）：A一试样溶液中被测组分峰面积；A，标准工作液被测组分峰面积；V一试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m一试料质量，单位为克（g）。计算结果需扣除空白值。测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9方法灵敏度、准确度和精密度
9.1灵敏度
本方法的检测限为1.0μg/kg：红霉素、替米考星定量限为2.0μg/kg，竹桃霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰乐菌素定量限为4.0ug/kg2准确度
红霉素、替米考星在2.0～40μg/kg添加浓度的回收率为70%～120%；竹桃霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰乐菌素在4.0～40ug/kg添加浓度的回收率为70%~120%。
9.3精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%5
中文通用名称
竹桃霉素
红霉素
克拉霉素
阿奇霉素
吉他霉素
交沙霉素
螺旋霉素
替米考星
泰乐菌素
附录A
（资料性附录）
药物中英文通用名称、化学分子式和CAS号GB31660.12019
9种大环内酯类药物中英文通用名称、化学分子式和CAS号英文通用名称
Oleandomycin
Erythromycin
Clarithromycin
Azithromycin
Kitasamycin
Josamycin
Spiramycin
Tilmicosin
Tylosin
化学分子式
C35H6iNO12
C38H69NOi3
C38H72N2012
C42H69NOis
C43H74N2O14
C46HsoN,O13
C46HNO7
CAS号
2751-09-9
110-07-8
81103-11-9
83905-01-5
69-23-8
16846-24-5
8025-81-8
108050-54-0
1401-69-0
RT:0.01 -16.00
RT:0.01-16.00
附录B
（资料性附录）
标准溶液特征离子质量色谱图
Time (min)
RIS72E
Time(min)
图B.1混合标准溶液的特征离子质量色谱图12
GB31660.1—2019
（1.竹桃霉素Ing/mL2.红霉素1ng/mL3.克拉霉素1ng/mL4.阿奇霉素1ng/mL5.吉他霉素1ng/mL6.交沙霉素1ng/mL7.螺旋霉素1ng/mL8.替米考星1ng/mL9.泰乐菌素Ing/mL）7
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GB31660.1—2019
食品安全国家标准
水产品中大环内酯类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
National food safety standard-Determination of macrolides residues in fishery products by liquidchromatography-tandemmassspectrometricmethod2019-09-06发布
中华人民共和国农业农村部
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
2020-04-01实施
本标准系首次发布。
GB31660.1—2019
食品安全国家标准
GB31660.1—2019
水产品中大环内酯类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围
本标准规定了水产品中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素，螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于水产品中鱼、虾、蟹、贝类等的可食组织中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量的检测。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样中大环内酯类药物的残留经乙睛提取，正已烷除脂、中性氧化铝柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。4试剂与材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水4.1试剂
4.1.1乙腈（CHsCN）：色谱纯。4.1.2
甲醇（CHsOH）：色谱纯。
正已烷（CH14）：色谱纯。
4.1.4甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.5
乙酸铵（CH,COONH4）。
异丙醇（CH3）2CHOH。
4.2溶液配制
4.2.1乙睛饱和正已烷：取正已烷200mL于250mL分液漏斗中，加入适量乙睛后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙睛层即得。1
GB31660.1—2019
4.2.20.05mol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵0.77g，用水溶解并稀释至200mL。4.2.30.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至1000mL。4.2.4定容液：取乙20mL和乙酸铵溶液80mL，混合均匀。4.3标准品
竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素含量均≥92.0%，吉他霉素含量≥72.0%，具体见附件A。4.4标准溶液制备
4.4.1标准贮备液：取竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星和泰乐菌素标准品各适量（相当于各活性成分约10mg），精密称定，分别于100mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100ug/mL大环内酯类药物标准贮备液。红霉素、克拉霉素和泰乐菌素-20℃以下避光保存，竹桃霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星4℃以下避光保存，有效期3个月。4.4.2混合标准工作液：精密量取标准贮备液各1mL，于10mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL大环内酯类药物混合标准工作液。4℃以下避光保存，有效期1个月。
4.5材料
4.5.1中性氧化铝固相萃取柱：2g/6mL，或相当者。4.5.2尼龙微孔滤膜：0.22um。
5仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪：配电喷务离子源分析天平：感量0.00001g和0.01g5.2
氮吹仪。
旋涡混合器：3000r/min。
移液枪：200uL，1mL，5mL。
离心机：4000r/min
梨形瓶：100mL。
超声波振荡器。
旋转蒸发器。
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。2
取均质后的供试样品，作为供试试料。取均质后的空白样品，作为空白试料。GB31660.12019
取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2试料的保存
-18℃以下保存，3个月内进行分析检测。7测定步骤
7.1提取
取试料5g（准确至土20mg），于50mL塑料离心管，加入乙睛20mL，于旋涡混合器上以2000r/min旋涡1min，超声5min，以3500r/min离心6min，取上清液转移至另一离心管中，残渣再加乙睛15mL，重复提取一次，合并上清液，备用。7.2净化
中性氧化铝固相萃取柱预先用乙睛5mL活化，取备用液过柱，用乙睛5mL洗脱，收集洗脱液于梨形瓶中，加入异丙醇4mL，40℃旋转蒸发至干。精密加入定容液2mL溶解残余物，加乙睛饱和正已烷2mL，转至10mL离心管中，旋涡10s，以3000r/min离心8min，取下层清液过0.22um滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。7.3基质匹配标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液适量，用空白样品提取液溶解稀释，配制成大环内酯类药物浓度为1ng/mL、5ng/mL、20ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL和1000ng/mL的系列基质标准工作溶液；现配现用。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。7.4测定
7.4.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Ci色谱柱（150mm×2.0mm，5μm）或相当者：b）流动相：A：0.1%的甲酸水溶液，B：乙睛，梯度洗脱程序见表1：c）流速：0.2mL/min；
d）柱温：30℃；
e）进样量：10μL。
表1流动相梯度洗脱条件
时间，min
质谱参考条件
0.1%甲酸水溶液，%
乙，%
a）离子源：电喷雾（ESI）离子源；b）扫描方式：正离子扫描：
c）检测方式：多反应监测；
d）喷雾电压：4000V：
e）离子传输毛细管温度：350℃；f）雾化气压力：248KPa；
g）辅助气压力：48KPa；
h）定性离子对、定量离子对和碰撞能量见表2、表2
化合物名称
竹桃霉素（OLD）
红霉素（ERM）
克拉霉素（CLA）
阿奇霉素（AZI）
吉他霉素（KIT）
交沙霉素（JOS）
螺旋霉素（SPI）
替米考星（TIL）
泰乐菌素（TYL）
测定法
a）定性测定
定性离子对、定量子离子和碰撞能量定性离子对及碰撞能量，eV
688.4/158.1(28)
688.4/544.3（16)
734.4/158.2(28)
734.4/576.2(18)
748.5/158.1(28)
748.5/590.4（18)
749.5/158.0（36)
749.5/591.4(27)
772.4/109.4(33)
772.4/174.3(30)bzxZ.net
828.3/109.4(35)
828.3/174.1(32)
843.4/174.2 (36)
843.4/142.1(40)
869.5/137.7 (41)
869.5/696.3(36)
916.4/174.2(36)
916.4/772.2（29）
GB31660.1—2019
定量离子对及碰撞能量，eV
688.4/544.3(16)
734.4/576.2（18)
748.5/158.1（28)
749.5/158.0(36)
772.4/174.3(30)
828.3/174.1(32)
843.4/174.2(36)
869.5/696.3(36)
916.4/174.2(36)
在同样测试条件下，试样溶液中大环内酯类药物的保留时间与标准工作液中大环内酯类药物的保留时间之比，偏差在±5%以内，且检测到的离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符合表3要求。表3定性确证时相对离子丰度的允许偏差相对离子丰度，%
b）定量测定
允许偏差，%
GB31660.1—2019
按7.4.1和7.4.2设定仪器条件，以基质标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，作单点或多点校准，按外标法计算试样中药物的残留量，定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片。标准溶液特征离子质量色谱图参见附录B。7.5
空白试验
除不加试料外，均按上述测定步骤进行。结果计算和表述
试样中待测药物的残留量按式（1）计算：X=C,×A×V
式中：
X一试样中被测组分的残留量，单位为微克每千克（ug/kg）：1
C一标准工作液测得的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）：A一试样溶液中被测组分峰面积；A，标准工作液被测组分峰面积；V一试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m一试料质量，单位为克（g）。计算结果需扣除空白值。测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9方法灵敏度、准确度和精密度
9.1灵敏度
本方法的检测限为1.0μg/kg：红霉素、替米考星定量限为2.0μg/kg，竹桃霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰乐菌素定量限为4.0ug/kg2准确度
红霉素、替米考星在2.0～40μg/kg添加浓度的回收率为70%～120%；竹桃霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰乐菌素在4.0～40ug/kg添加浓度的回收率为70%~120%。
9.3精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%5
中文通用名称
竹桃霉素
红霉素
克拉霉素
阿奇霉素
吉他霉素
交沙霉素
螺旋霉素
替米考星
泰乐菌素
附录A
（资料性附录）
药物中英文通用名称、化学分子式和CAS号GB31660.12019
9种大环内酯类药物中英文通用名称、化学分子式和CAS号英文通用名称
Oleandomycin
Erythromycin
Clarithromycin
Azithromycin
Kitasamycin
Josamycin
Spiramycin
Tilmicosin
Tylosin
化学分子式
C35H6iNO12
C38H69NOi3
C38H72N2012
C42H69NOis
C43H74N2O14
C46HsoN,O13
C46HNO7
CAS号
2751-09-9
110-07-8
81103-11-9
83905-01-5
69-23-8
16846-24-5
8025-81-8
108050-54-0
1401-69-0
RT:0.01 -16.00
RT:0.01-16.00
附录B
（资料性附录）
标准溶液特征离子质量色谱图
Time (min)
RIS72E
Time(min)
图B.1混合标准溶液的特征离子质量色谱图12
GB31660.1—2019
（1.竹桃霉素Ing/mL2.红霉素1ng/mL3.克拉霉素1ng/mL4.阿奇霉素1ng/mL5.吉他霉素1ng/mL6.交沙霉素1ng/mL7.螺旋霉素1ng/mL8.替米考星1ng/mL9.泰乐菌素Ing/mL）7
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