标准号：SN/T 5132-2019 标准名称：肉苁蓉鉴定方法 英文名称：Identification of Cistanche deserticola Ma 标准格式：PDF 发布时间：2019-09-03 实施时间：2020-03-01 标准大小：9671K 标准介绍：中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 本标准规定了肉苁蓉鉴定方法。 本标准适用于肉苁蓉植株和种子的鉴定。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 花萼 calvx 植物花冠外面的绿色被片，是花的组成部分之一，由若干萼片组成，包在花瓣外面。它在花朵尚未开放时，起着保护花密的作用，花开后，则退化至花的下方 花序 inflorescence 花序轴及其着生在上面的花的通称，也可特指花在花轴上不同形式的序列 花冠peal 一朵花中所有花瓣的总称，位于花粤的上方或内方，排列成一轮或多轮，多具有鲜亮的色彩，花开放以前保护花的内部结构 3肉苁蓉基本信息 两双 中文名 deserticola ma 科 Orobanchaceae,肉苁蓉属 Cistanche。我国共有6种分3个组，分别为蒙古肉苁分类地蓉 stanch mongolica Beck,中国肉苁蓉组包括沙款蓉 Cistanche sinersis beck、兰州肉苁蓉 Cistancheta nzhouensis Z.Y. Zhang,肉苁蓉组包括肉蓉 Cistanche deserticola Ms,管花肉或蓉 Cistanchetubulosa (Schenk, Wight盐生肉苁蓉 Cistanche salsa (C. A Me)Beck.苁可能以植株、部分植株、种子等形式进出境。 4方法原理 肉苁蓉花、种子、叶等形态特征是鉴定该种的主要依据，基于标准INA条形码鉴定的分子生物学方法作为形态学鉴定的轴助手段

ICS65.020.01
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5132—2019
肉蓉鉴定方法
Identification of Cistanche deserticola Ma行业标准信息服务平台
2019-09-03发布
中华人民共和国海关总署
2020-03-01实施
本标准依据GB/T1.1—2009规则起草前言
本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。SN/T5132—2019
本标准起草单位：中华人民共和国乌鲁木齐海关、中华人民共和国呼和浩特海关、中华人民共和国重庆海关。
本标准主要起草人：李亚伟，张小菊，王独，张祥林，张永宏，伊力亚·拜合提亚尔，张伟，孔德英行业标准信息服务平台
1范围
本标准规定了肉从容鉴定方法。肉双容鉴定方法
本标准适用于肉蓉植株和种子的鉴定。2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。2.1
花萼calyx
SN/T5132—2019
植物花冠外面的绿色被片，是花的组成部分之一，由若干萼片组成，包在花瓣外面。它在花朵尚未开放时，起着保护花蕾的作用，花开后，则退化至花的下方。2.2
花序inflorescence
花序轴及其着生在上面的花的通称，也可特指花在花轴上不同形式的序列。2.3
花冠petal
一朵花中所有花瓣的总称，位于花萼的上方或内方，排列成一轮或多轮，多具有鲜亮的色彩，花开放以前保护花的内部结构。
肉从蓉基本信息
中文名：肉蓉。
行业标准
学名：Cistanche deserticola Ma。分类地位：列当科Orobanchaceae，肉蓉属Cistashe费国共有6种分3个组，分别为蒙古肉蓉CistanchemongolicaBeck，中国肉蓉组包括沙蓉CistachensisBeck，兰州肉蓉CistanchelanzhouensisZ.Y.Zhang，肉蓉组包括肉蓉Cistanchedeseruicola，管花肉蓉Cistanchetubulosa（Schenk）Wight、盐生肉灰蓉Cistanchesalsa（C.A.Mey.）Beck从蓉能以植株、部分植株、种子等形式进出境。
4方法原理
肉蓉花、种子、叶等形态特征是鉴定该种的主要依据，基于标准DNA条形码鉴定的分子生物学方法作为形态学鉴定的辅助手段。仪器设备和主要试剂
5.1仪器设备
体视显微镜、显微镜、电子天平、放大镜、解部刀、解剖针、镊子、指形管、培养皿、白瓷盘、棉花、样品1
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袋、标本夹、标签、记录纸、标本瓶、标本盒、常规PCR仪、微量分光光度仪、电泳仪、凝胶成像系统、高速冷冻离心机、生物安全柜、烘箱、高压灭菌锅、研钵、摇床、水浴锅、制冰机、纯水仪、旋涡震荡器、冰箱、冷冻混合研磨仪纯水器、离心管（1.5mL，2.0mL）PCR反应管（0.2mL，0.5mL）、可调微量移液器（2L10L.20L.100L.200L.1000)。
5.2主要试剂
植物组织DNA提取试剂盒、PCRPremix、超纯水、DNAmarker、琼脂糖、核酸凝胶染料、液氮、脱氧核糖核昔三磷酸（dNTPs）、Taq聚合酶、10XPCR缓冲液。6形态特征
6.1列当科形态特征
多年生、二年生或一年生寄生草本。不含或几乎不含叶绿素。茎常不分枝或少数种有分枝。叶鳞片状，螺旋状排列，或在茎的基部排列密集成近覆瓦状。花多数，沿茎上部排列成总状或穗状花序，或簇生于茎端成近头状花序，极少花单生茎端：苞片1枚，常与叶同形，在苞片上方有2枚小苞片或无小苞片，小苞片贴生于花萼基部或生于花梗上；花近无梗或有长或短梗。花萼筒状、杯状或钟状，顶端4-5浅裂或深裂，偶见6齿裂，或花鲁2深裂至基部或近基部，而萼裂片全缘或顶端又2齿裂，或花萼佛焰苞状而一侧裂至近基部，或萼片离生，3枚，或花萼不存在。花冠左右对称，常弯曲，二唇形，上唇龙骨状、全缘或拱形，顶端微凹或2浅裂，下唇顶端3裂，或花冠筒状钟形或漏斗状.顶端5裂而裂片近等大。6.2肉众蓉属形态特征
多年生寄生草本。茎肉质，圆柱状，常不分枝，少有自基部分（2-3）枝。叶鳞片状，在茎上螺旋状排列。穗状花序顶生茎端，具多数花；苞片1枚；小苞片2枚，稀无。花萼筒状或钟状，顶端5浅裂，少有斗深裂或5深裂，裂片常等大，稀不等大。花冠筒状钟形或漏斗状，顶端5裂，裂片几等大。雄蕊4枚2强，着生于花冠筒上，花药2室均发育，等大，常被柔毛。子房上位，1室，侧膜胎座4（稀6或2），花柱细长，柱头近球形，稀稍2浅裂。葫果卵或形求近球形，2瓣裂，少有3瓣裂，常具宿存柱头。种子多数极细小，近球形，表面网状。
6.3肉欢蓉形态特征
6.3.1全株及茎
向上渐变细，直径（2-5)cm，参见附录A，6.3.2叶
叶宽卵形或三角状卵形，长（0.5-1.5）cm，宽（1-2）cm，生于茎下部的较密，上部的较稀疏并变狭，披针形或狭披针形，长（2-4）cm.宽（0.5-1）cm.两面无毛。6.3.3花
花序穗状，长（15-50）cm，直径（4-7）cm；花序下半部或全部苞片较长，与花冠等长或稍长，卵状披针形、披针形或线状披针形，连同小苞片和花冠裂片外面及边缘疏被柔毛或近无毛；小苞片2枚，卵状披针形或披针形，与花萼等长或稍长。花萼钟状，长（1-1.5）cm，顶端5浅裂，裂片近圆形，长（2.5-4）mm，宽（3-5）mm。花冠筒状钟形，长（3-4）cm，顶端5裂，裂片近半圆形，长（4-6）mm，宽（0.6-1）cm，边缘常稍2
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外卷，颜色有变异，淡黄白色或淡紫色，干后常变棕褐色。雄蕊4枚，花丝着生于距筒基部（5-6）mm处长（1.5-2.5）cm，基部被皱曲长柔毛，花药长卵形，长（3.5-4.5）mm，密被长柔毛，基部有骤尖头。子房椭圆形，长约1cm，基部有蜜腺，花柱比雄蕊稍长，无毛，柱头近球形。6.3.4果
朔果卵球形，长（1.5-2.7）cm，直径（1.3-1.4）cm，项端常具宿存的花柱，2瓣开裂。6.3.5种子
种子椭圆形或近卵形，长约（0.6-1)mm，外面网状，有光泽。鉴定方法
7.1形态学鉴定
自测鉴定
依据肉欢蓉花、叶、果、种子等特征，用肉眼或借助扩大镜对疑似样品种类进行鉴定。7.1.2镜检鉴定
依据肉蓉花序、花萼、花冠筒等特征用体式显微镜对疑似样品种类进行鉴定（参见附录B）。7.2分子鉴定
7.2.1DNA制备及PCR扩增
DNA制备方法及PCR扩增月的片段，具体步骤见附录C。7.2.2测序与序列比对
扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电冰离，硅认为单一目的条带后完成测序，测序结果利用序列拼接软件进行拼接编辑，比对峰图，判断序列方向，去除测序引物序列，两段测序质量Q值<20的序列去除，分析获得ITS2序列片段，利用BOLD在线数据库比对于检品的ITS2基因序列（http：//wwW.bold信息服务
systems.org/).
结果判定
待检样品ITS2序列与BOLD数据库比对结果给出最大近似种为肉蓉且相似度大于93.5%，花种子、叶符合形态学特征，则判定为肉蓉。9样品保存与处理
保存样品按编号、中文名称、学名、进出境日期分别存放，并由经手人标识确认和样品管理员登记后，妥善保存，保存时间至少6个月。3
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附录A
（资料性附录）
肉蓉形态特征
全株形态图
图A.2全株形态图
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花冠形态图
苞片形态图
花萼及小苞片形态图
图A.6种子形态图
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附录B
（资料性附录）
肉从蓉属检索表
1花萼钟状，4-5深裂，裂片线形或长圆状披针形，先端渐尖；花冠筒近基部雄蕊着生处有一圈长柔毛。
中国肉蓉组Sect.SubcistancheG.Beck1花萼筒状或钟状，顶端5浅裂，裂片卵形、半圆形或近圆形，顶端钝，极稀渐尖；花冠筒内近基部无一圈长柔毛，仅花丝基部被长柔毛。肉灰蓉组Sect.Cistanche
2花萼4深裂，裂片近等大：花冠裂片干后常变墨蓝色。....沙灰蓉CistanchesinensisG.Beck2花萼5深裂，裂片不等大，后面的中间1枚裂片最小，两侧的裂片最大，裂片上部有时又再2齿裂或2浅裂；花冠裂片干后常变浅褐黄色。.兰州肉欢蓉Cistanche lanzhouensisZ.Y.Zhang3药室基部钝圆，不具小尖头，花药卵形或长圆形，长4-5毫米；花冠筒部常黄白色，裂片带紫色；常寄生于柳属TamarixL.植物根上。·3药室基部具小尖头。
..管花肉茨蓉Cistanchetubulosa（Schenk）Wight4花序下半部或全部苞片较长，线状披针形或披针形，与花等长或稍长：花萼长度约为花的二分之一；花冠筒淡黄白色，裂片颜色有变异，淡黄白色，淡紫色或边缘紫色，干后常变棕褐色；常寄生在梭梭属HaloxylonBunge植物根部。
.肉从蓉CistanchedeserticolaMa4花序全部苞片较短，卵状披针形，长度约等于花的二分之一；花萼长度约为花的三分之一；花冠筒淡黄白色，裂片紫色或淡紫色，干后常保持原色不变；寄主有盐爪爪属KalidiumMoq.植物等。...….盐生肉从蓉Cistanchesalsa（C.A.Mey.）G.Beck行业标准信息服务平台
C.1核酸制备
附录C
（规范性附录）
DNA制备及PCR扩增程序
核酸制备也可采用植物DNA提取试剂盒法或CTAB法等。引物序列
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正向引物：5-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3，反向引物：5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3C.3PCR反应体系及参数
PCR反应体系
PCR反应体系见表C.1。
表C.1PCR反应体系
试剂名称
10XPCR反应缓冲液（含Mg+）
dNTPs混合物（各1ommol/mL）
储备液浓度
2.5mmol/L
加样体积（μL）
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正向引物
20pmol/L
反向引物
20mol/L
TaqDNA聚合酶
DNA模板
补至50μL
阳性对照和空白对照的设置
阳性对照：以肉蓉DNA核酸作为模板：C.3.2.1
C.3.2.2空白对照：以ddH,O作为模板c.3.3
PCR反应程序
94℃预变性3min；94℃变性30S.56℃退火30S.72℃延伸45S.35个循环；72℃延伸10min琼脂糖凝胶电泳
每个样品取（3-5）μL的PCR产物与1uL的6×上样缓冲液混合均匀.并加到含有核酸染料的1.0%琼脂糖凝胶的点样孔中，在120V下进行电泳。电泳结束后在凝胶成像系统中观察、拍照，并保存照片。
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参考文献
[1Li Y P,Huang FR,DongJ,et al.[Rapid Identification of Cistanche viaFluorescenceSpectrum ImagingTechnology Combined with Principal Components Analysis and FisherDistinction].[J].Guangpuxueyuguangpufenxi=Guangpu,2015,35(3):689.[2]JWang T,Zhang X,Xie W.Cistanche deserticola Y.C.Ma,\Desert ginseng\:a reviewJ]AmericanJournalof ChineseMedicine,2012,40(6):1123.[3JHanJP,SongJY,LiuC,etal.Identificationof Cistanchespecies(Orobanchaceae)basedon sequences of the plastid psbA-trnH intergenic region[J. Yao xue xue bao = Acta pharmaceuticaSinica，2010，45(1)：126bzxz.net
［4]中国科学院中国植物志编辑委员会《中国植物志》第69卷86页，科学出版社1990行业标准信息服务平台
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