标准号：SN/T 5134-2019 标准名称：森林葱蜗牛检疫鉴定方法 英文名称：Detection and identification of Cepaea nemoralis (Linnaeus, 1758) 标准格式：PDF 发布时间：2019-09-03 实施时间：2020-03-01 标准大小：14342K 标准介绍：1范围 本标准规定了森林葱蜗牛 Cepaea nemoralis( Linn aeug,1758)的检疫鉴定方法 本标准适用于森林葱蜗牛的检疫鉴定 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 SN/T3067-2011软体动物常规检疫规范 3术语与定义 SN/T3067以及下列术语和定义适用于本文件 鞭状体 flagellum 鞭状体是蜗牛雄性生殖系统中的附器，一般由阴茎本体末端分枝形成鞭状体 3.2 系统中一个藏有1枚中空的钙质或壳质骨针的肌肉质的囊。一般用长径与短径之 比来描述矢 受精囊柄分枝形成盲管，盲管的有无、长度和形状常用于分类。缝合线 suture 蜗牛贝壳各螺层之间下陷的连接处。缝合线有深有浅，有简单的或锯齿形的 螺轴 蜗牛贝壳的旋转中轴即称螺 轴唇 columella Hip 贝壳壳口的边缘为口脬，按其在壳口中的位置不同可分为内唇、外唇、轴居、基唇、上唇和下唇，靠近 螺轴的口唇即称轴解，有些种类的轴唇常外折导致脐孔部分或完全被覆盖

ICS65.020.01
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T51342019
森林葱蜗牛检疫鉴定方法
Detectionand identification of Cepaea nemoralis (Linnaeus,1758)行业标准信息服务平台
2019-09-03发布
中华人民共和国海关总署
2020-03-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口SN/T5134—2019
本标准起草单位：中华人民共和国福州海关、中华人民共和国张家港海关、中华人民共和国杭州海关、福建省农业科学研究院。
本标准主要起草人：王沛、周卫川、陈雅菁、陆军、林阳武、吴志毅、吴宇芬行业标准信息服务平台
1范围
森林葱蜗牛检疫鉴定方法
SN/T5134—2019
本标准规定了森林葱蜗牛Cepaeanemoralis（Linnaeus，1758）的检疫鉴定方法。本标准适用于森林葱蜗牛的检疫鉴定。规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注目期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T3067—2011软体动物常规检疫规范3术语与定义
SN/T3067以及下列术语和定义适用于本文件。3.1
鞭状体flagellum
鞭状体是蜗牛雄性生殖系统中的附器，一般由阴茎本体末端分枝形成鞭状体。3.2
矢囊dartsack
失囊是蜗牛生殖系统中一个藏有1枚中空的钙质或壳质骨针的肌肉质的囊。一般用长径与短径之业标准
比来描述失囊的相对大小。
盲管diverticulum
受精囊柄分枝形成盲管，盲管的有无、长度和形状常用子分类。3.4
缝合线
suture
螺轴columella
蜗牛贝壳的旋转中轴即称螺轴。3.6
轴唇columellalip
贝壳壳口的边缘为口唇，按其在壳口中的位置不同可分为内唇、外唇、轴唇、基唇、上唇和下唇，靠近螺轴的口唇即称轴唇有些种类的轴唇常外折导致脐孔部分或完全被覆盖。森林葱蜗牛基本信息
学名：Cepaeanemoralis（Linnaeus，1758）1
SN/T5134—2019
异名：HelixnemoralisLinnaeus，1758英文名：Grovesnail，Brown-lippedsnai中文名：森林葱蜗牛
分类地位：软体动物门Mollusca，腹足纲Gastropoda，肺螺亚纲Pulmonata，柄眼目Stylommatopgora，大蜗牛科Helicidae，葱蜗牛属Cepaea。森林葱蜗牛的近似种主要有花园葱蜗牛C.hortensis（Muller，1774）和维也纳葱蜗牛C.vindobonensis（Pfeiffer，1821）。森林葱蜗牛的其他信息参见附录A。5原理
森林葱蜗牛的传播特点是不需要特定的寄主，凡接触过的物品都可传播。传播方式和生态习性是确定现场检疫方式的依据。贝壳形态，软体解剖和分子特征是实验室鉴定的主要依据。6器具和试剂
6.1仪器和用具
仪器：体视显微镜、微型离心机、恒温金属浴、PCR仪、凝胶照相系统用具：放大镜、手电筒、塑料自封袋、广口标本瓶、4mm孔径土壤筛、小铁铲、游标卡尺、糖瓷盘、培养皿、镊子、剪刀、小剪刀、显微镊子、显微剪刀、微针（直径0.15mm）、解剖蜡盘、标签、1.5mL离心管、0.2mLPCR反应管、移液枪。
6.2试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯。无水乙醇、硫酸镁、动物基用组DNA提取试剂盒、PCRMasterMix、ddH,O。现场检疫
对来自疫区（参见附录A）的运输工具和货物实施点查验。仔细检查运输工具、木质包装材料、未经加工的植物性材料等是否有蜗牛附着其上。森林葱蜗牛星供质出，尤其要注意阴暗处的检查，用手电筒仔细寻找蜗牛的行迹。森林葱蜗牛爬行过后，一般都会留下眼灰丝带状粘液痕迹，这是判定是否有蜗牛污染的重要依据。发现蜗牛标本，随时装入塑料自封袋或标本瓶带实验室做进一步的鉴定。8
实验室鉴定
8.1测量、观察和解剖
用游标卡尺测量蜗牛贝壳的壳高、壳宽和卵粒直径。用肉眼或放天镜或体视显微镜仔细观察卵和螺的形态特征。
将闷杀处理（参见10.1)后的标本，参照SN/T3067一2011中8.3.1进行软体解剖，分离出生殖系统。
8.2葱蜗牛属CepaeaHeld，1837鉴定特征贝壳无脐孔，圆球形或稍压扁，具有1条～5条色带或完全缺乏。有5个螺层，体螺层向下倾斜2
SN/T5134—2019
壳口倾斜，口缘宽天且内变厚，下缘直。颚片粗壮，具有4条一6条粗肋，齿舌的中央齿和侧齿无齿尖恋矢有时具有4条裂脊，黏液腺具有一显著长的分枝。受精囊柄很长，分枝形成盲管，阴茎具有长的鞭状体。
8.3森林葱蜗牛Cepaeanemoralis（Linnaeus，1758）鉴定特征8.3.1卵
白色，圆球形，直径约1.0mm。
8.3.2贝壳
8.3.2.1成螺
贝壳扁圆球形，缓慢膨胀，壳质从稍薄到极厚。螺层有4.5个～5.5个，胚螺层光滑，体螺层圆形，明显向下偏斜。贝壳颜色变化很大，有白色，灰色，黄色，栗色或红色，其上有微弱而不规则的生长和螺旋状的色带0条～5条。由于贝壳的颜色和色带变异很大，故不能作为鉴定依据。壳口宽，U形，向下倾斜。口唇黑褐色或红褐色，细长，外唇向外延伸反折，内唇贴覆于体螺层上。贝壳在幼螺时期有缝隙状脐孔，随着螺的生长脐孔逐渐被轴缘覆盖，至成螺时完全无脐孔。壳高12mm~22mm，壳宽18mm～25mm（参见附录B中图B.1、B.2、B.3）。本种贝壳与花园葱蜗牛（C.hortensis（Muller，1774)）极为相似，鉴定时应注意鉴别口唇颜色，贝壳厚度、壳面光滑度和螺旋部形状（参见附录C）。8.3.2.2幼螺
幼螺贝壳个体小，壳质较薄，易碎，有脐孔，外唇不向外延伸扩展，其他形态特征与成螺贝壳基本一致。
8.3.3螺体
螺体呈淡黄色，头部两侧至前触角间各有一条黑线，为触角收缩肌。动物常以黏液附着在植株上栖标准
息。（参见附录B中图B.3）
8.3.4生殖系统
受精囊柄长，近端部（靠近受精囊侧）分枝形成盲管。阴茎长，阴茎本体短小。鞭状体细长，长度大意服务平
于阴茎和阴茎本体之和。矢囊大，长圆柱形，顶部膨大，无副关囊。夜腺两枝，管状，分别长在阴道两侧（参见附录B中图B.4)。
9结果评定
以贝壳形态为基本鉴定依据，结合螺体和生殖系统解剖形态特征，并注意与近似种鉴别（参时录C)，对于贝壳特征典型的个体符合8.3.2鉴定为森林葱蜗牛C.nemoralis（Linnaeus，1758），对于贝壳特征有变异的个体，需同时符合8.3.2、8.3.3、8.3.4才能鉴定为森林葱蜗牛C.nemoralis（Linnaeus，1758）。单独查获的卵粒或幼螺，用COI基因进行序列鉴定（参见附录D），当检测样品的DNA序列与已知森林葱蜗牛的DNA序列同源性≥95%时，确定为森林葱蜗牛的疑似样品，需要通过孵化和饲养（参见SN/T3067一2011中8.4饲养鉴定）为成螺后，再做进一步的形态鉴定3
SN/T5134—2019
10标本处理和保存
10.1标本处理
将蜗牛置于盛满水的瓶中，盖上瓶盖，进行闷杀，蜗牛在慢慢室息的死亡过程中，逐渐伸展身体；或遂渐加人少量硫酸镁，进行麻醉问杀。将闷杀后伸展的蜗牛标本置于无水乙醇中浸泡1d2d，然后在75%的乙醇溶液中固定，每隔1d～2d换1次乙醇溶液，共换3次～4次，便可长期保存于75%的乙醇溶液中。解剖后的生殖系统可直接保存于75%的乙醇溶液中。
10.2保存时间
经处理后的标本，至少要善保存6个月，并注明时间、产地、寄主、采集人等信息。行业标准信息服务平台
A.1寄主
附录A
（资料性附录）
森林葱蜗牛的寄主、地理分布及其他信息SN/T5134—2019
杂食性，幼螺以腐植质和植物的幼苗和嫩芽为食，成螺取食各种绿色植物的茎和叶。A.2地理分布www.bzxz.net
森林葱蜗牛主要分布在欧洲中部、北部地区：包括安道尔、奥地利、比利时、波黑、克罗地亚、捷克、丹麦、爱沙尼亚、芬兰、法国、德国、英国、荷兰、匈牙利、爱尔兰、意大利、列支敦士登、立陶宛、卢森堡、挪威、波兰、斯洛文尼亚、西班牙、瑞典、瑞士和乌克兰等国家和地区。A.3生物学与危害性
森林葱蜗牛C.nemoralis（Linnaeus，1758）是国际植物检疫中倍受关注的危险性有害生物，日本、澳大利亚、加拿大等许多国家和地区对其实施检疫。该螺昼伏夜出，常藏匿于阴暗处，可以休眠方式随货物和木质包装材料远距离传播。其不但可直接危害各种蔬菜、瓜果、花卉和农作物，为农业生产上的重要有害生物，而且也是许多人畜共患寄生虫的中间宿主，影响人畜健康。森林葱蜗牛与其近似种花园葱蜗牛常常相伴发生危害，如在西欧的黑醋栗收获期间，这种蜗牛平时歇息在灌木丛中，这时会爬到果盆、果箱中取食和歇息，不但给间生产造成直接危害，而且经常在运输过程中严重污染果品，导致工厂业标准信息服务平台
拒绝收货，造成重大经济损失。5
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附录B
（资料性附录）
森林葱蜗牛形态特征
行业标
图B.1成螺贝壳形态特征（上侧离观左下：背面观：右下：腹面观）信息服务平台
森林葱蜗牛贝壳色泽和色带的变化图B.3森林葱蜗牛生态图
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SN/T5134—2019
森林药蜗牛生殖系统形态
P：阴茎；E：阴茎本体；F：鞭状体；PR明茎牵机：VD：输精管；S矢囊；MG：黏液腺；信息服务平台
PBC：受精囊柄；BC:受精囊；DSt：直HF两性管：AG：蛋白腺8
螺旋部
壳高×壳宽
黏液腺分支
典型贝壳
照片对比
附录C
（资料性附录）
森林葱蜗牛与近似种的鉴别方法表C.1
森林葱蜗牛与近似种鉴别特征的比较花园葱蜗牛
C. hortensis (Muller)
约5~51/2
白色，偶有褐色
贝壳细薄，螺层偏圆
螺旋部相对较低
10~15mmx14~20mm
每枝有大于或等于4个分支
横切面是带二分叉的刀片状
十字交叉
森林葱蜗牛
C, nemoralis (Linnaeus)
约41/2~51/2
贝壳稍厚，螺层偏扁
螺旋部相对较低
17~23mm×22~28mm
每枝最多3个分支
横切面是简单的刀片状十字交叉SN/T5134—2019
维也纳葱蜗牛
C.vindobonensis (pfeiffer)
约51/2~6
淡褐色
贝壳厚实，螺层偏圆
螺旋部相对较高
17~20mmX20~26mm
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D.1DNA提取
附录D
（资料性附录）
森林葱蜗牛COI基因辅助鉴定方法取腹足肌肉约3Omg，用SDS方法或DNA提取试剂盒方法获取基因组DNA。D.2COI基因引物
LCO1490：5-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3HCO2198:5-TAAAOTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3D.3反应体系
反应体系为20μl：其中DNA模板2μl(100ng/μl），LCO1490（10μM）0.5μl.HCO2198（10μM0.5μl,2XMasterMix10μl,ddH,07μl。D.4PCR扩增条件
94℃5min；94℃50s.45℃30s、72℃50s，30个循环；72℃10min、4℃终止。D.5测序
D.6比对鉴定
将双向测序获得的600 bp700 bp长度DNA序列，经软件抑和人年对后，与Genbank 登录号为KU297286已知森林葱蜗牛的标准COI基因序列进行比对，相似度9)%的待鉴样品确定为森林务平
葱蜗牛的疑似样品。
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