标准号：SN/T 5137-2019 标准名称：华僧螺检疫鉴定方法 英文名称：Detection and identification of Monacha cartusiana Muller 1774) 标准格式：PDF 发布时间：2019-09-03 实施时间：2020-03-01 标准大小：7575K 标准介绍：中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 本标准规定了华僧螺的检疫鉴定方法 本标准适用于华僧螺的检疫鉴定 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 SN/T3067-2011软体动物常规检疫规范 3术语与定义 SN/T3067-2011界定的以及下列术语和定义适用于本文件。鞭状体 flagellum 鞭状体是蜗牛雄性生殖系统中的附器，一般由阴茎本体末端分枝形成鞭状受精囊 bursa copulatrix 蜗牛的受精器官，其中受囊的大小及受精囊柄的形态和有无分支常用于分类鉴矢囊 dart sack 矢囊是蜗牛生殖系统中一个藏有1枚中空的钙质或壳质骨针的肌肉质的囊。一般用长径与短径之 比来描述矢囊的相对长度。 阴茎系统一般由阴茎、阴茎本体、阴茎牵引肌和鞭状体组成，其中后三耆常因种类不同而缺失。

ICS65.020.01
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T51372019
华僧螺检疫鉴定方法
Detection and identification of Monachacartusiana(Miller,1774行业标准信息服务平台
2019-09-03发布
中华人民共和国海关总署
2020-03-01实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。SN/T5137—2019
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建海关、中国湿地博物馆、中华人民共和国杭州海关、中华人民共和国张家港海关。
本标准主要起草人：王沛、杨海芳、王武军、周卫川、吴志毅、陆军、林阳武行业标准信息服务平台
1范围
华僧螺检疫鉴定方法
本标准规定了华僧螺的检疫鉴定方法。本标准适用于华僧螺的检疫鉴定规范性引用文件
SN/T5137—2019
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T3067—2011软体动物常规检疫规范3术语与定义
SN/T30672011界定的以及下列术语和定义适用于本文件3.1
鞭状体flagellum
鞭状体是蜗牛雄性生殖系统中的附器，一般由阴茎本体末端分枝形成鞭状体。3.2
受精囊bursacopulatrix
蜗牛的受精器官，其中受精袭的大小及受精囊柄的形态和有无分支常用于分类鉴定。3.3
矢囊dartsack
失囊是蜗牛生殖系统中一个藏有1枚中空的钙质或壳质骨针的肌肉质的囊。一般用长径与短径之准信息
比来描述失囊的相对长度。
阴茎penis
阴茎系统一般由阴茎、阴茎本体、阴茎牵引肌和鞭状体组成，其后三音因种类不同而缺失。3.5
aperture
贝壳开口部位，是蜗牛头和腹足的出口，一般无齿、片、褶等结构。壳口的边缘为口接其在壳口中的位置不同可分为内唇、外唇、轴唇、基唇、上唇和下唇等，内唇常贴覆于体螺层上形成肼抵部。3.6
轴唇columellalip
贝壳壳口的边缘为口唇，按其在壳口中的位置不同可分为内唇、外唇、轴唇、基唇、上和下唇，靠近螺轴的口唇即称轴唇，有些种类的轴唇常外折导致脐孔部分或完全被覆盖。4基本信息
学名：Monachacartusiana（Muller，1774）1
SN/T5137—2019
异名：HelixcartusianaMuller,1774英文名：Carthusiansnail.Chartreusesnail中文名：华僧螺。
分类地位：软体动物门Mollusca，腹足纲Gastropoda，柄眼目Stylommatophora，湿螺科Hygromiidae，僧螺属Monacha。
僧螺属有3亚属，记录种49个，华僧螺同亚属的近似种有紫僧螺M.cantiana（Montagu，1803）和叙利亚僧螺M.syriaca（Ehrenberg，1831）。华僧螺的其他信息参见附录A。5方法原理
传播方式和生态习性是确定现场检疫方式的依据。贝壳形态和软体解剖是实验室鉴定的主要依据，分子特征作为不具备形态学鉴定样品的鉴定依据。6器具和试剂
6.1仪器和用具
仪器：体视显微镜、微型离心机、恒温金属浴、PCR仪、凝胶照相系统用具：放大镜、手电筒、塑料自封袋、广口标本瓶、4mm孔径土壤筛、小铁铲、游标卡尺、塘瓷盘、培养Ⅲ、镊子、剪刀、小剪刀、显微镊子、显微剪刀、微针（直径0.15mm）、解部蜡盘、标签、1.5mL离心管、0.2mLPCR反应管、移液枪
6.2试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯。乙醇、硫酸镁、动物基因组DNA提取试剂盒、PCRMasterMix、ddH,O。7现场检疫
对来自疫区（参见附录A）的运输工具和货物实施点查验仔细检查运输工具、废塑料、木质包装箱、苗木、水果、蔬菜、花卉、未经加工的植物性材料等是否有幅牛附着共上，尤其要注意阴暗蔽光处的检查，用手电筒仔细寻找蜗牛的行迹。华僧螺爬行过后，一般都会留量灰色的丝带状粘液痕迹，这是判定是否有蜗牛污染的重要依据。发现蜗牛，随时装人塑料自封袋或标本瓶同实验室做进一步的检验鉴定。发现盆景等携带土壤或其它细碎衬垫材料时，需过筛检查是否有卵蚁动螺，实验室鉴定
8.1测量、观察、解剖和饲养
用游标卡尺测量蜗牛贝壳的壳高和壳宽、卵粒的直径或长和宽。用肉眼或放大镜或体视显微镜仔细观察卵、贝壳和螺体的形态特征。将问杀处理（参见10.1)后的标本，按照SN/T3067一2011中8.3.1进行软体解，分离出生殖系统。单独查获的卵粒，按照SN/T3067一2011中8.4方法，将其孵化和饲养为成螺后，再做鉴定。2
8.2僧螺属MonachaFitzinger，1833鉴定特征SN/T5137—2019
贝壳小至中型，扁球形，壳质薄，壳面乳白色至黄色。胚螺层光滑或分布短小的硬毛。壳口近圆形，口唇微红色或白色。脐孔窄，有时被完全覆盖，有时被半覆盖。螺层5个～7个。该属下有三个亚属，分别为MonachaparathebaHesse.1914，Monachamonacha（Fitzinger，1833）和MonachametathebaHesse，1914。三个亚属区别如下：MonachaparathebaHesse，1914有阴道附属物和阴茎牵引肌；Monachamonacha（Fitzinger，1833）有阴道附属物，但无阴茎牵引肌；MonachametathebaHesse，1914无阴道附属物，但有阴茎牵引肌。8.3华僧螺鉴定特征
球形，直径1.5mm2.2mm。
8.3.2贝壳
8.3.2.1成螺bZxz.net
贝壳中等大小，扁球形，壳质薄却硬，半透明。有5个～6个螺层。壳顶尖，褐色。缝合线浅。体螺层上布满大量微弱凹螺纹和细小模糊的不规则生长线，靠近缝合线处生长线变粗。壳口卵形，成螺有较厚的内环肋，内环肋白色至棕色。内唇白色，壳口边缘常呈为微红色或褐色。脐孔微小，几乎完全被反折的轴唇所覆盖。在同一种群的个体间，壳面颜色差异很大，基色为乳白色至黄色。壳高6mm~10mm，壳宽9mm~18mm。（参见附录B中图B.1）8.3.2.2幼螺
幼螺贝壳在外部形态上与成螺类似，表面常常覆盖细小的毛。个体小，壳质更薄，口唇无内环肋。8.3.3螺体
螺体呈浅灰色，头部两侧至前触角间各有一杀黑线，为触角收缩肌。动物常以黏液附着在植株上栖准信息
息。（参见附录B中图B.2）
8.3.4生殖系统
生殖腔短。输精管相当长，从端部斜插人阴茎本体。阴茎肿服.膨大形，其宽度是阴茎本体3倍以上，阴茎内部有一特殊的“V”形结构，端部圆钝。阴茎本体较长。鞭本短，端部渐细。无阴茎牵引肌。阴道附属物基部膨大，端部细长。粘液腺分多枝，中等长度，不卷曲。受精掌柄短受精囊特大（参见附录B中图B.3)
8.3.5c01基因序列鉴定
参照附录C方法提取DNA、PCR扩增和双向测序，将所测序列与Genbank登录号为KM247389已知华僧螺的标准CO1基因序列进行比对，相似度95%的待鉴样品确认为华僧螺的疑似样品。：（参见附录C）
8.3.6近似种鉴别特征比较
华僧螺与近似种M.cantiana（Montagu，1803）和M.syriaca（Ehrenberg，1831）的主要鉴别特征参见附录D。
SN/T5137—2019
9结果评定
以贝壳形态为基本鉴定依据，结合螺体形态和生殖系统解部形态特征，对手于贝壳特征典型的个体符合8.3.2鉴定为华僧螺，对于贝壳特征有变异的个体，需同时符合8.3.2、8.3.3和8.3.4才能鉴定为华僧螺。不具备形态特征的卵粒、幼螺等样品，用COI基因进行序列鉴定（参见附录C），当待测样品的DNA序列与已知标准样品的DNA序列同源性95%时，确定为华僧螺的疑似样品。幼螺需通过孵化和伺养（参见SN/T3067一2011中8.4伺养鉴定）为成螺后，再做进一步的形态鉴定。10标本处理和保存
10.1标本处理
将蜗牛置于盛满水的瓶中，盖上瓶盖，进行闷杀，蜗牛在慢慢室息的死亡过程中，逐渐伸展身体；或逐渐加人少量硫酸镁，快速进行麻醉购杀。将闷杀后的蜗牛标本置于无水乙醇中浸泡1d～2d.然后在75%的乙醇溶液中固定，每隔1d～2d换1次乙醇溶液，共换3次～4次，使可长期保存于75%的乙醇溶液中。解剖后的生殖系统可直接保存于75%的乙醇溶液中
10.2保存时间
经鉴定处理后的华僧螺标本应永久保存，并注明时间、产地、寄主、采集人等信息。行业标准信息服务平台
A.1寄主
附录A
（资料性附录）
华僧螺的寄主、地理分布及其他信息SN/T5137—2019
杂食性，幼螺以腐植质和植物的幼苗和嫩芽为食，成螺以各种农作物和园艺作物为食。A.2地理分布
华僧螺主要分布在地中海盆地和欧洲东南部，包括英国、法国、比利时、荷兰、德国、乌克兰、捷克、葡萄牙、西班牙、意大利、希腊、瑞士、奥地利、匈牙利等国。传人地区：澳大利亚，美国的芝加哥、威尔明顿州和密歇根州。A.3生物学与危害性
华僧螺是近年来国际运输工具检疫中常被截获的一种危险性有害生物。该种蜗牛起源于地中海盆地，在欧洲广泛分布，现已传人美国，被学者认为是对农业、自然生态系统、人类健康和贸易具有重大潜在威胁的外来人侵物种。成螺寿命可达2年，每年可产卵40粒～80粒。该螺可大量聚集在植物顶部食，造成农作物产量和品质下降。此外，华僧螺也是人畜共患寄生虫病的中间寄主，严重危及人类和家畜的健康。
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SN/T5137—2019
附录B
（资料性附录）
华僧螺形态特征
图B.1成螺贝壳形态特征
（上：侧面观；左下：背面观；右下：腹面观）准
图B.2螺体形态特征
图B.3生殖系统形态特征（仿Schileyko.2006）SN/T5137—2019
(P：阴茎：E：阴茎本体：F：鞭状体：VD：输精管：VaP：阴道附属物；MG：黏液腺；行业标准信息服务平台
PBC：受精囊柄：BC：受精囊：V：边缘：Va：阴道）SN/T5137—2019
C.1DNA提取
附录C
（资料性附录）
华僧螺CO1基因鉴定方法
取腹足肌肉约3Omg，用SDS方法或动物基因组DNA提取试剂盒方法提取基因组DNA。C.2co1基因引物
LCO1490：5-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3HCO2198：5-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3C.3反应体系
反应体系为20ul：其中DNA模板2ul（100ng/ul）LCO1490（10uM)0.5ul.HCO2198（10uM）0.5ul,2xMaster Mix10 ul,ddH,O7ul,C.4PCR扩增条件
94℃5min；94℃50s45℃30s、72℃50s，30个循环：72℃10min、4℃终止C.5测序
C.6比对鉴定
将双向测序获得的 600bp~700 bp长度DNA序列，经软件抗接和年秘对后，与 Genbank登录号为KM247389已知华僧螺的标准COI基因序列进行比对，相似度≥95待鉴科品确定为华僧螺的疑似样品。
鉴别特征
壳高壳宽
典型贝壳
照片对比
附录D
（资料性附录）
华僧螺与近似种的鉴别
表D.1华僧螺与同亚属近似种鉴别特征的比较华僧螺
M.cartusiana (Muller.1774)
约5个～6个
扁球形，壳面基色为乳白色
至微黄色
6mm~10mmX9mm~18mm
内唇白色，唇缘微红色
小，几乎被覆盖
紫僧螺
M.cantiana(Montagu.1803)
约5个～6个
稍扁，壳面基色为乳白色
至黄色
SN/T5137—2019
叙利亚僧螺
M.syriaca(Ehrenberg.1831)
约4.5个~5.5个
更扁，贴近缝合线处有色带，
呈白色
11mm~14mmX16mm~20mm6mm~9mmX8mm~12mm内唇微红色或白色.唇缘与壳面颜色一致
大，未被覆盖
内唇白色，唇缘淡红色或褐色
无，完全被覆盖
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