GB/T 40152-2021.Determination of saccharase activity in honey-Spectrophotometric method.
1范围
GB/T 40152规定了蜂蜜中蔗糖转化酶的分光光度测定方法。
GB/T 40152适用于蜂蜜中蔗糖转化酶的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4方法原理
蜂蜜中所含有的蔗糖转化酶能将底物对俏基苯-a-D-毗哺葡萄糖普定量转化为对硝基苯酚,通过测定特定波长下吸光度值确定对硝基苯酚含量来测定蜂蜜中蔗糖转化酶。将蜂离溶液加人到底物溶液中,混合均匀,在40℃条件下反应20min后,添加终止溶液终止反应,于400nm波长下,测定吸光度，吸光度值与蔗糖转化酶值成正比。同时做空白对照。
6仪器和设备
6.1紫外可见分光光度计。
6.2分析天平:感量0.1 mg,0.01 g。
6.3涡旋混匀器。
6.4pH计:精度士0.02。
6.5恒温水浴锅:温度控制精度士0.1℃。
6.6容量瓶:25 mL(A级)。
6.7移液管1 mL.5 mL。
6.8定时器:精确度5 s。
6.9试管:10 mL。

ICS67.180.10
CCS X31
中华人民共和国国家标准
GB/T40152—2021
蜂蜜中蔗糖转化酶的测定
分光光度法
Determination of saccharase activity in honey-Spectrophotometric method
2021-05-21发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-12-01实施
GB/T40152—2021
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请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任本文件由中华全国供销合作总社提出。本文件由全国蜂产品标准化工作组（SAC/SWG2)归口。本文件起草单位：江苏中谱检测有限公司。本文件主要起草人：徐锦忠、羊细群、鲁惠玲、工英俊、陈梅、王燕，王敏、姚超。工
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1范围
蜂蜜中蔗糖转化酶的测定
分光光度法
本文件规定了蜂蜜中蕊糖转化酶的分光光度测定方法本文件适用于蜂蜜中蔗糖转化酶的测定。2规范性引用文件
GB/T40152—2021
下列文件中的内容通量文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其注日期的引用文
件，仅该日期对广的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T682
3术语和定义
分析实验室用水规格和试验方法本文作没有需要界定的术语和定义。4方法原理
蜂蜜中所含有的蔗糖转化酶能将底物对磺基萃D毗瞻能萄精苷定量转化为对硝基苯酚，通过测定特定波长下吸光度值确定对硝基苯酚含量来测定蜂蜜中薰糖转化酶。将蜂窄容液加人到底物溶液中，混合均勾，在4C条件下反应20min后，添加终止溶液终止反应，于400am波长下，测定吸光度，吸光度值与蔗糖转化每值成正比。同时做空白对照。5试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/16682规定的三级水。5.1
磷酸一氢钾（KH.PO）。
二水合磷酸氧二钠（Na2HPO,2H.O)。3对硝基苯-α-D-吡响葡萄糖苷（CASNO:3767-28-0）。5.3
三羟甲基氨基甲烷Tris。
5.50.1mol/L的磷酸盐缓冲液（pH为6.0）。称取11.66g磷酸二氢钾和2.56g二水合磷酸氢二钠（Na.HPO,·2H,O），加水溶解，稀释至1L。5.6
0.02mal/L底物溶液（pH为6.0）。称取6.025g对硝基苯-α-D-吡葡萄糖苷，加入磷酸盐缓冲液（5.5）约900mL溶解，必要时加热至60℃助溶，并冷却至室温，稀释至1L，4C避光保存，有效期7d。5.73mol/L终止溶液。
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GB/T40152—2021
称取363.4g三羟甲基氨基甲烷，加人900mL水溶解后，用3mo1/LHCI调节pH至9.5，用水释至1L
6仪器和设备
紫外可见分光光度计。
6.2分析天平：感量0.1mg，0.01g。6.3涡旋混勾器。
6.4pH计，精度士0.02。
6.5恒温水浴锅温度控制精度土0.1℃。6.6容量瓶：25mL（A级）。
6.7移液管1mL.5mL，
6.8定时器：精确度58
6.9试管：10mL。
7试样的制备与保存
样品为均匀无杂质的液体或结晶蜂密。对于有结晶的蜂蜜，于40C以下融化，混合均匀后待测，8测定步骤
8.1样品的制备：称取4g（精确至0.01g）蜂密于25mL容量瓶中，加入15mL磷酸盐缓冲液（5.5），充分摇勾溶解，用撬酸缓冲液（55）定容至刻度涡旋混合均勾，冷藏保存备用，有效期为1d。8.2用移液管分别移取5mL底物溶液（5.6）于两支试管中，将两支试管同时置于40℃水浴锅中预热5min后，一支试管准确加人0.5mL样品溶液（8.1），另一支空白对照试管不加样品溶液，计时，迅速祸旋10s后将两支试管再置于40℃水浴锅中，20min后从水浴锅中取出试管，分别准确加人0.5mL的终止溶液（5.7），迅速涡旋混勾，冷却至温。在空白对照试管中准确加人0.5mL样品溶液（8.1），再次混合均句，于波长400nm处分别测样品溶液以及空白对照溶液的吸光度。9结果计算
试样中的熊糖转化酵值按式（1）进行计算：X=(A—A)X198.68
式中：
x样品的蔗糖转化酶值，单位为标准单位每千克(U/kg)；A，样品溶液在波长400nm下的吸光度；A。空白对照溶液在波长400nm下的吸光度。结果保留至小数点后一位。
10精密度
蔗糖转化酶值>10U/kg时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术2
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平均值的15%
GB/T40152-2021
点糖转化酶值≤10U/kg时，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的25%。
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GB/T40152-2021
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中华人民共和国
国家标准
蜂密中蔗糖转化酶的测定
分光光度法
GB/T40152—2021
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