SN/T 1105-2014.Detection and identification of Co ptotermes curvignathus Holmgren.
1范围
SN/T 1105规定了大家白蚁Coptotermes curvignathus Holmgren 的形态学和分子生物学检疫鉴定方法。
SN/T 1105适用于大家白蚁的检疫和鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1囟fontane
白蚁在头盖缝的汇合之处凹下或突起部分,是额线的开口处。
3.2囟孔fontanelle hole
前额中间的圆形开口。
4大家白蚁基本信息
学名:Coptotermes curvignathus Holmgren.
异名:Coptotermes gestroi Oshima。
Coptotermes robustus Holmegren.
英文名:Rubber tree termites.
分类地位:等翅目Isoptera,鼻 白蚁科Rhinotermitidae, 乳白蚁属Coptotermes Wasman.
大家白蚁常随原木、锯木和木包装传播,其寄主、分布及生物学参见附录A乳白蚁属在全世界已知共40余种,属内形态与大家白蚁近似种有台湾乳白蚁C. formosanus Shiraki,锡纳邦乳白蚁C. sinabangensi Oshima, 南亚乳白蚁C. travians (Haviland)、卡肖乳白蚁C.kalshoveni Kermner、塞庞乳白蚁C.se pangensis Kirshna 、印缅乳白蚁C. gestroi ( Wasmann)、菲岛乳白蚁C.vastator Light 和婆罗乳白蚁C.borneensis Oshima, 大家白蚁与近似种的区别参见附录B。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1105—2014
代替SN/T1105-—2002
大家自蚁检疫鉴定方法
Detection and identification of Coptotermes curvignathus Holmgren2014-11-19发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2015-05-01实施
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
大家白蚁检疫鉴定方法
SN/T1105-—2014
中国标准出版社出版
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010）68533533
网址spc.net.cn
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16印张1字数26千字2016年1月第一版2016年1月第一次印刷印数1-1100
书号：155066·2-29348
定价18.00元
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1105—2002《大家白蚁检疫鉴定方法》。本标准与SN/T1105—2002相比，主要技术变化如下：增加大家白蚁分子生物学鉴定方法；增加大家白蚁寄主、分布、为害、与近似种的检索表（兵蚁)及特征图。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T1105—2014
本标准起草单位：中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：庞金、方元炜、许彩芸、林振基、黄蓬英、张卫东、廖力、董文广、乐海洋、曾琪、国伟、周昱。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T1105—2002
1范围
大家自蚁检疫鉴定方法
SN/T1105—2014
本标准规定了大家白蚁CoptotermescuruignathusHolmgren的形态学和分子生物学检疫鉴定方法。
本标准适用于大家白蚁的检疫和鉴定。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法GB6682
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
卤fontane
白蚁在头盖缝的汇合之处凹下或突起部分，是额线的开口处。3.2
卤孔fontanellehole
前额中间的圆形开口。
4大家白蚁基本信息
学名：CoptotermescurvignathusHolmgren异名：CoptotermesgestroiOshiimaCoptotermes robu.stus Holmegrene英文名：Rubbertreetermites。分类地位：等翅目Isoptera鼻白蚁科Rhinotermitidae，乳白蚁属CoptotermesWasman。大家白蚁常随原木、锯木和木包装传播，其寄主、分布及生物学参见附录A。乳白蚁属在全世界已知共40余种，属内形态与大家白蚁近似种有台湾乳白蚁C.formosanusShiraki、锡纳邦乳白蚁C.sinabangensiOshima、南亚乳白蚁C.travians（Haviland）、卡肖乳白蚁C.kalshoueniKemner、塞庞乳白蚁C.sepangensisKirshna，印缅乳白蚁C.gestroi（Wasmann），菲岛乳白蚁C.uastatorLight和婆罗乳白蚁C.borneensisOshima，大家白蚁与近似种的区别参见附录B。方法原理
根据大家白蚁的为害状，在检疫现场或发生疑似大家白蚁的地方，取得卵、兵蚁、工蚁或成虫等。现1
SN/T1105—2014
场检疫如发现有白蚁的兵蚁，依据形态学特征进行鉴定。如未发现白蚁兵蚁，而有卵，工蚁或有翅成虫等时，利用大家白蚊ITS特异性扩增引物的常规PCR检测方法和实时荧光PCR检测方法，可准确，快速将大家白蚁与印缅乳白蚁、塞庞乳白蚁，台湾乳白蚁和婆罗乳白蚁4种乳白蚁区分开来。6器材和试剂
6.1器材
6.1.1形态学部分
显微镜、解剖镜、树皮铲、手锯、油锯、铁锥、螺丝刀、小斧头、解剖刀、解剖针、镊镀子、培养皿、毛笔、养虫管、指形管。Www.bzxZ.net
6.1.2分子生物学部分
PCR扩增仪、实时荧光PCR仪、电泳仪、凝胶像系统、商
箱、高压灭菌锅、电子天平、研钵、摇床、水浴钢、旋震荡器20uL.100L.200μL.1000μL）PCR度应管(026.2试剂
6.2.1形态学部分
75%乙醇。
6.2.2分子生物学部分
实验用水、液氮、蛋白酶K(2
烷、异戊醇、异丙醇、75%乙醇、95DL2000Marker、琼脂糖、溴化乙提取液：1%SDS，50mmol/
7现场检疫
7.1检查空洞
儿、台式高心机、核酸蛋白分析仪、烘标箱微量加样器（0.5μL，2pL，10pL，1.0.5mL)
、RNA消化酶Tris饱和配
份，PremixExTaq（2X），三氯甲OXFOR线
液、脱氧核糖
核甘三磷酸（dNTPs）、Taq酶、引物接针昆
虫基因组
mmol/l
是取试剂盒。
25mmol/LEDTA(pH8.0)
用铁锥敲打木材，探明是否有空洞。若是发出异常声响，应撬开空洞，仔细检查是否有白蚁行踪。7.2检查白蚊外露的活动踪迹
检查木材是否有白蚁泥（即白蚁排泄物及泥土堆积的蚁路）、分飞孔（此孔是有翅成虫移植出飞的孔口，孔口常有泥土封住）和通气孔（即蚁单外面直径约1mm的针尖状小孔，通常有十几至几十个，孔口有时有细泥土，并常有兵蚊守卫）。7.3查寻巢穴
在现场对有白蚁外露的活动踪迹的可疑木材仔细查寻巢穴，如发现有白蚁活动，应及时收集标本，以备进行实验室鉴定。
8实验室鉴定
8.1形态学鉴定
乳白蚁属鉴定
兵蚁鉴定特征
SN/T1105—2014
头卵形，前段明显变狭，卤位于头前部，呈短管延出，卤孔大，朝向前方，上题细而弯曲除基部的锯齿形缺刻外内缘光滑无齿，触角13～17节，上唇尖吞形。前胸背板平坦，狭于头部。8.1.1.2有翅成虫鉴定特征
头部宽卵形，后唇基极短面平，触角1825节，肉位于头中部。前胸背板扁平，狭于头部，前翅解大于后翅鳞且覆盖后翅鳞之上，翅趣脉有极浅淡的网状纹，翅面具毛，前翅中脉由肩缝处独立伸出，后翅中脉由胫分脉基部分出，中脉距肘脉极近。8.1.2大家白蚁鉴定
8.1.2.1工蚊蚁鉴定特征
体长4.10mm~5.05mm。头近园
头长0.85mm~1.05mm触
形淡褐色头宽10mm15mm
角14~15节。前胸背板宽0.60mm+0.85mm.前缘略翘起，中央有缺刻，前胸背板及腹部乳白色，疏生淡黄色短毛。
兵蚁鉴定特征
头壳深黄色，上颚深褐色，胸部膜部与足流1枚刚毛，卤孔与触角间也有1枚粗网毛
半部，上题瘦长，军刀状，颚端强烈弯曲
宽，端部稍尖，唇端半透明，卤孔大，第3、4节短小，儿乎相等，第2节稍头壳烯布小毛，上唇
端有1对端毛，卤孔两侧客具
胸背板中区具短毛约20枚
实壳卵圆形最宽处在头的后
上颚基部有探凹处，其前具小
齿刻，上唇为舌形，长稍大于
面观口倾料
世盛相等
，上部稍
向后。
触角15~16节，一般为16节
前胸背板元宝形
，宽大于长，前后缘中央具浅
凹.前侧角圆，两侧缘斜向后缘（参见附录C、附录D和附录E)3有翅成虫鉴定特征
全长16mm~17mm，翅长13mm~14mm，体长（不含翅）7.5mm，头近圆形，深褐色，头长1.15mm。触角黄褐色，21节，第2、3、4节短于其他各节，其中第3节最短。复眼大，近圆形，单眼卵圆形。触角与复眼间距小于触角与单眼间距，单眼与复眼间距小于单眼的宽度。前胸背板前缘中央向后凹人，后缘中央向前凹人。前胸背板褐色，密生黄褐色长毛。前翅鳞大于后翅鳞，翅面密生细短的淡褐色毛，前翅中脉从肩缝处独立伸出，肘脉有4～10条分支。后翅中脉从径分脉基部分出肘脉有8~10条分支，在不同个体间翅脉变化较大。
8.2分子生物学鉴定
8.2.1大家白蚁基因组DNA提取
一般方法
取白蚁1头于双蒸水中漂洗，吸水纸吸干，解剖镜下剔除其体表的附着物及腹部内容物.以免原生3
SN/T1105—2014
动物污染。置于1.5mL离心管中，加人40μL提取液A.放置于一70℃冰箱中，4min后取出.用牙签捣碎，匀浆，加人等体积的3mmo1/L醋酸钾（pH7.2)，冰上放置1h，酚/三氯甲烷提取基因组DNA，溶解在TE中，用微量分光光度仪测定DNA浓度和纯度后，将样品于一20℃保存备用。8.2.1.2
试剂盒法
将大家白蚁样本移人1.5mL离心管或碾钵中，捣碎或加人液氮碾磨，实验步骤根据试剂盒的操作说明书操作。大家白蚁基因组DNA溶液置一20℃冷冻保存。8.2.2
DNA质量检查
用核酸蛋白分析仪测定DNA的纯度与浓度，分别取得260nm和280nm处的吸收值，计算核酸的纯度和浓度，计算公式见式（1）和式（2）DNA纯度=OD260/OD280
DNA纯度=50×ODzaμg/mL
PCR级DNA溶液的ODzm/OD2sp比值应为1.71.9。8.2.3
常规PCR检测
大家白蚁常规PCR扩增引物序列见表1。表1
正向引物
反向引物
反应体系
引物名称
常规PCR反应体系见表2。
试剂名称
10XPCR缓冲液（含Mg+）
dNTP混合物（10mmol/L）
正向引物和反向引物（10μmol/L）Taq酶(5U/μL)
模板DNA
反应条件
引物序列
引物序列
5′-AGCACGGACCTGTCCGATGCC-3
5*-CCATCTTCGGGCCCGCGGCCT-3
表2反应体系
加样量/μL
各1pL
补充至总体积为25μL
.（1)
（2）
扩增片段
预变性94℃5min；变性94℃1min，退火延伸72℃1min+30个循环，最后72℃延伸5min。4
阴性对照、阳性对照和空白对照的设置SN/T1105—2014
以乳白蚁属其他种类DNA模板为阴性对照，以大家白蚁的DNA作为阳性对照，以灭菌去离子水作空白对照，各做2个重复。
琼脂凝胶电泳检测
常规PCR产物用琼脂糖凝胶电泳检查扩增目标片段的大小。取PCR产物5μL,加人10×PCR缓冲液1μL.并用DL2000Marker作分子量标记，在含DNA染色剂的1.5%琼脂糖凝胶上电泳30min（90V)，凝胶图像分析仪上检查是否扩增出预期大小的目标片段，拍摄并记录结果。8.2.4
实时荧光PCR检测
引物及探针
大家白蚁实时荧光PCR引物及探针序列见表3。表3引物、探针序列
正向引物
反向引物
引物名称
反应体系
引物序列
5'-AGGCCGCGGGCCCGAAGATGG-3*
5-CCGAGATCTCTCTCGTATTTTC-3
5\-FAM-ACGACAGCACTGTCTTAATCTTCG-TAMRA-3*大家白蚁实时荧光反应体系见表4。表4反应体系
试剂名称
PremixExTaq(2x)
正向引物和反向引物（10μmol/L）探针（10μmol/L）
模板DNA
反应条件
补充至总体积为25
加样量/μL
预变性94℃1min；变性94℃15s，60℃退火延伸1min，40个循环。阴性对照、阳性对照和空白对照的设置8.2.4.4
同8.2.3.4起
扩增片段
SN/T1105—2014
结果判定
9.1形态学方法
以兵蚁的形态特征为依据，有翅成虫的鉴定特征可作参考，符合8.1.2可判定为大家白蚁。分子生物学方法
9.2.1常规PCR检测
电泳成像结果，如果阳性对照样品和待测样品均出现大约254bp的特异性DNA产物条带，而阴性对照样品无DNA产物带。上述实
个或2个以上重复，结果
白蚁。
9.2.2实时荧光PCR检测
在阳性对照、阴性对照和空白对照结果均正检测Ct值小于或等于36.检测结
的情况
星阳性翔
检测Ct值大于或等于40.检
浦结果皇阴店
检测Ct值在36~40之间
10标本保存
应重做实时炭
用于形态学鉴定所采集的标本应保有套内盛75月至1
主，采集时间、地点及采集者，保存期泡，保存于一70℃冰箱中备用。6
致则可判定样品的种类为大家
品种类为大家白蚁；
期定样品种类不是大家白蚁
艺静商厂
瓶中，同时应注明货物来源，白蚁寄个月日用于分子
物学鉴定的标本用100%乙醇浸
A.1寄主
附录A
（资料性附录）
大家白蚁寄主、分布与为害
SN/T1105—2014
合欢属、黄豆树、腰果属、南洋杉、菠萝蜜属、木棉、橄榄属、吉贝、咖啡楼属、三叶橡胶、李叶豆、芒果木蝴蝶、松属、加勒比松、苏门答腊松、柳属、红柳按属、安息香属、桃花心木、柚木等、分布
亚洲：新加坡、马来西亚、泰国、缅甸、越南、印度尼欧洲：德国。
A.3为害
亚、康票
文莱、印度、韩国。
蚁王、蚁后、工蚁、兵蚁和繁殖大家白蚁属于社会性多形态昆虫同一个巢群有不同品级的分化有蚁之分，并各有职责分工。其中兵蚁变化寄特全分类学上有明显的鉴别
价值。该虫属土木栖白蚁，可
筑巢于木材内，也可以筑巢于土壤中，营隐蔽生活方式，各个品级的发生和整个巢群的发展都在巢穴内，木材外表看时可见小化通气孔或工蚁出人的洞口，并常见在木材内筑巢者多在木材中央空洞处。有排泄物或泥路泥被。
大家白蚁从地下根部侵人，蛙食地电缆、森林中的仪器装置，人屋为售及各
天蚁能对多种经济林术造成
严重为害，能为害活树，蛙蚀埋类木包
SN/T1105—2014
附录B
（资料性附录）
大家白蚁及其近似种检索表（兵蚁）1.头形感觉宽圆，头长头宽指数大于0.85头形感觉长圆或椭圆形，头长头宽指数小于0.806
2.卤孔与触角窝之间有2根毛，前胸背板中区毛较短，成横列状锡纳邦乳白蚁C.sinabangensi卤孔与触角窝之间毛不到2根，前胸背板中区毛不如上述.3
3.前胸背板中区具一横列刚毛
前胸背板中区毛散乱
4.前胸背板中区毛粗、长硬，为2040根，非常明显前胸背板中区毛较少，不易看清5.头极扁圆，上题内缘较直
头稍长，上颚从中部起向内弯
6.前胸背板中区光亮，几乎无毛，且较短前胸背板中区毛不如上述
7。头后缘中央凸出，两侧圆缩，头从上题关节延伸处开始往前狭缩头后缘平直，头从后部往前整体狭缩8.头最似梨形，最宽处在后中部·头不太似梨形，最宽处在基部
南亚乳白蚁C.travians
大家白蚁C.curuignathus
卡肖乳白蚁C.kalshoveni
塞庞乳白蚁C.sepangensis
印缅乳白蚁C.gestroi
*菲岛乳白蚁C.vastator
婆罗乳白蚁C.borneensis
台湾乳白蚁C.formosanus
头至上额
头宽（颚基）
头最宽
左上额长
窗孔长径
肉孔短径
后额长
后额宽
后额狭
前胸背板长
前胸背板宽
（资料性附录）
大家白蚁兵蚁量度表
Holgren(1913)
原记载
1.48~1.56
0.78~0.83
1.35~1.43
0.93~0.98
0.93~1.01
注：括号内各项目的数值为该项目的平均值。大家白蚁兵蚁量度
Ahanad(1965)
根据泰国标本
1.65~1.76(1.69)
0.86~0.90(0.87)
1.40~1.63(1.53)
0.971.11(1.06)
1.08~1.22(1.14)
0.15~0.21(0.18)
0.15-0.18(0.16)
0.97~1.11(1.08)
0.43~0.46(0.44)
0.23~0.30(0.26)
0.540.63(0.57)
1.04~1.18(1.12)
SN/T11052014
单位为毫米
平正明（1992）
根据马来西亚标本
1.45~1.65(1.55)
0.72~0.83(0.78)
1.25~1.37(1.33)
0.85~0.93(0.99)
0.90~1.10(0.99)
0.21~0.25
0.90~1.00(0.94)
0.370.45(0.41)
0.22~0.25(0.24)
0.47~0.52(0.51)
0.870.98(0.93)
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