SN/T 3422-2012 北美松疱锈病菌检疫鉴定方法 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：杨翠云、于翠、闻伟刚、郑建中、易建平、崔学慧、阀春月、王颖、程颖慧。 1 范围 本标准规定了进境植物检疫中北美松疱锈病菌（Cronartium comandrae Peck）的检疫鉴定方法。本标准适用于对来自北美松疱锈病发生国家和地区所有松属植物（Pinus spp.）苗木中携带的北美松疱锈病菌的检疫鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫采样原理 3 鉴定原理 3.1 分类地位 学名：Cronartium comandrae Peck 无性态：Peridermium pyriforme Peck 英文名称：Comandra blister rust; Comandra pine rust 北美松疱锈病菌（Cronartium comandrae Peck）属真菌界（Fungi），担子菌亚门（Basidiomycotina），冬孢菌纲（Teliomycetes），锈菌目（Pucciniales），柱锈菌科（Cronartiaceae），柱锈菌属（Cronartium）。 3.2 鉴定原理 北美松疱锈病菌的分布（参见附录A）、寄主范围（参见附录B）、症状特点和病原菌的形态特征，是北美松疱锈病菌检疫鉴定方法的主要依据。 4 仪器设备和用具 4.1 仪器设备 立体显微镜、生物显微镜（具油镜和测微尺）、电子分析天平（感量0.001g）、普通天平（感量0.1g）、超净工作台、高压灭菌器、冰箱。 4.2 试验用具 斧子、锯子、手持放大镜、手术刀、手术剪、白色磁盘、镊子、载玻片、盖玻片、吸管、酒精灯。 5 检疫与鉴定 5.1 现场检疫 5.1.1 症状观察 主要检查松属植物的主茎和树枝是否有肿大、环带、树皮破裂以及癌肿等症状；检查茎部的树皮上是否有液态松脂状的溃疡伤口和红橙色的性孢子块；检查树干是否有啮齿类动物环绕整个树干啃食溃疡病斑组织的现象；如果苗木较大，重点检查整个树木的上部树冠部位是否有叶片稀薄和树枝死亡的症状。 5.1.2 抽样 如果有病菌为害的症状，采样送实验室检测。如果症状不明显也要取样送检，取样方法按照 SN/T 2122 的规定执行。 5.2 室内检疫与鉴定 5.2.1 制样 将送检的样品，通过挑片、切片等方法制成检测样品，在显微镜下直接观察病菌孢子的形态特征。 5.2.2 病菌的形态特征 5.2.2.1 病菌的孢子类型 北美松疱锈病菌一生可产生5种类型的孢子，侵染松属植物产生性孢子和锈孢子，侵染转主寄主植物产生夏孢子、冬孢子和担孢子（转主寄主相关资料，参见附录C）。 5.2.2.2 病菌的形态 性孢子器在周皮下产生，约40μm~50μm厚，直径0.5mm~3mm。初为微黄色，产生直径1μm~2μm的性孢子，颜色变深，随着逐渐增大的锈孢子器而破裂。锈孢子器有包被，直径约3mm～6mm，切向伸长，引起周裂或不规则开裂。锈孢子是柄生的分散个体，菌丝缺失或很少。锈孢子上部尖，似梨形或泪珠形，橘红色。壁无色，两端较厚，孢壁有细疣状突起，无光滑区域，疣的高度小于1μm。孢子大小为（32μm～87μm）×（15μm～26μm）。泪珠状的锈孢子是该病菌形态鉴定的主要依据（参见附录D)。夏孢子堆通常着生在叶背部，偶尔着生在叶面和茎部，分散或者密布着生，疱状，直径0.1mm~0.3mm，经中间孔口裂开。夏孢子呈球形或椭圆形，大小为（20μm~31μm）×（16μm～23μm）。孢壁基本无色，1.5μm～2.5μm厚，多有稀疏的小刺。冬孢子堆通常着生在叶背部，圆柱形，高1mm～2mm，直径0.1mm~0.2mm，橙褐色。冬孢子产生在橙褐色的冬孢子柱上，椭圆形或圆柱形，浅黄色至金色，大小为（28μm～65μm）×（8μm～18μm）。孢壁光滑，厚2μm~3μm。在柱形冬孢子堆的偏上方通常会出现白色粉末状物，是病菌的担子和担孢子。