SN/T 4171-2015.Detection and identification of Xiphinema brevicollum Lordello & Da Costa.
1范围
SN/T 4171规定了出人境植物检疫中短颈剑线虫的检疫鉴定方法。
SN/T 4171适用于出入境植物、花卉、苗木、盆景及其繁殖材料、土壤及栽培介质中短颈剑线虫的检疫鉴定。
2规范性引用文件
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GB/T 28091-2011剑线虫 属(传毒种类)检疫鉴定方法
SN/T1157进出境植物苗木检疫规程
SN/T1158进出境植物盆景检疫规程
SN/T 2757植物线 虫检测规范
3符号和缩略语
下列符号和缩略语适用于本文件。
n:测计的标本数;
a:体长/最大体宽;
b:体长/体前端至食道与肠连接处的距离;
c:体长/尾长;
c' :尾长/肛门处体宽;
h:尾后部的透明区长;
L:体长;
Lip w:头部宽度;
Odontophone:齿尖针延伸部长度;
Odontostyle:齿尖针长度;
Tail:尾长;
V:体前端至阴门的距离X100/体长;
VBW:阴门处的体宽;
BWGR:导环处体宽;

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4171—2015
短颈剑线虫检疫鉴定方法
Detection and identification of Xiphinema brevicollum Lordello & DaCosta2015-02-09发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2015-09-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局，SN/T4171—2015
本标准主要起草人：迟远丽、廖力、王岚、徐森锋、权永兵、黄永辉、张卫东、陈其文I
1范围
短颈剑线虫检疫鉴定方法
本标准规定了出人境植物检疫中短颈剑线虫的检疫鉴定方法。SN/T4171—2015
本标准适用于出人境植物、花卉、苗木、盆景及其繁殖材料、土壤及栽培介质中短颈剑线虫的检疫鉴定。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T28091一2011剑线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法SN/T1157进出境植物苗木检疫规程SN/T1158进出境植物盆景检疫规程SN/T2757
3符号和缩略语
植物线虫检测规范
下列符号和缩略语适用于本文件。n：测计的标本数；
a：体长/最大体宽；
b：体长/体前端至食道与肠连接处的距离；c：体长/尾长；
c：尾长/肛门处体宽；
h：尾后部的透明区长；
L：体长；
Lipw：头部宽度；
Odontophone：齿尖针延伸部长度；Odontostyle：齿尖针长度；
Tail：尾长；
V：体前端至阴门的距离×100/体长；VBW：阴门处的体宽；
BWGR：导环处体宽；
BWOB：食道基部体宽；
GR：导环至体前端的距离；
Spicules：交合刺的长度
基本信息
中文名称：短颈剑线虫。
SN/T4171—2015
学名：XiphinemabrevicollumLordello&.DaCosta,196l。异名：X.saopaoloenseKhan&.Ahmad,1975,X.americanumApudCarvalho,1955,1962,X.diffusumLamberti&Bleve-Zacheo,1979(n.syn.),X.paruumLamberti,Ciancio,Agostinelli&.Coiro,1992(n.syn.),X.pseudoguirani Lamberti,Ciancio,Agostinelli&.Coiro,1992(n.syn.),Xguirani ApudLamberti&.Bleve-Zacheo,1979,X.SheriLamberti &.Bleve-Zacheo,1979(n.syn.),X.tayloriLamberti,Ciancio,Agostinelli&.Coiro,1992(n.syn.)。分类地位：线虫门（Nematoda），无侧尾腺纲（Adenophorea），矛线目Dorylaimida），矛线亚目（Dorylaimina），矛线总科（Dorylaimoidea），长针科（Longidoridae），剑亚科（Xiphinematinae），剑属（Xiphinema），美洲剑线虫组（Xiphinemaamericanum-group）。短颈剑线虫是一种非常重要的植物寄生线虫，主要危害寄主植物的根部，引起根部组织变黑，皮层增厚，侧根增生，长势变弱，造成根系肿大或坏死。短颈剑线虫主要通过带根苗木、土壤及栽培介质传播扩散，雌、雄虫形态学特征是该虫检验鉴定的主要依据，寄主范围、地理分布等信息可供参考（参见附录A）。5方法原理
根据形态特征描述和形态特征测计值采用Hunt(1993)的长针科分类系统进行线虫的分类鉴定。6
仪器、用具和试剂
6.1仪器
生物显微镜、体视显微镜（具透射光源）、恒温培养箱、冰箱、离心机6.2用具
钟面皿或培养血、盖玻片、载玻片、挑针、酒精灯、线虫滤纸或纱布、500uL塑料管、漏斗、漏斗架、乳胶管、止水夹、加热板、水桶、分样筛（60目～300目）、移液器、干燥器、记号笔。6.3试剂
4%甲醛、甘油、指甲油、石蜡、溶液I（96%乙醇：甘油：蒸馏水=20：1：79）、溶液Ⅱ（甘油：96%乙醇=1：19)。
7现场检疫
对植物种苗的根、茎根、根状茎等地下部分材料进行检查，观察苗木的生长状况，根部为害状，以及是否带介质、土壤等。重点选取根部组织变黑，皮层增厚，侧根增生，长势变弱，根系肿大或坏死等症状的苗木及根际介质或土壤，如无可疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋，标记后及时送实验室检验，
具体抽样比例按SN/T1157和SN/T1158执行。8实验室检验
线虫分离
8.1.1土壤或介质中线虫的分离
线虫的分离采用改进的过筛法：将约500g土样置于水桶中，捏碎土块并加水搅拌均匀，形成土壤2
SN/T4171—2015
悬浮液，静置约30s后将上清液通过60目的分离筛，将悬浮液注人新的水桶中，再静置约30s，再将土壤悬浮液经过300目的分样筛，收集筛上的残留物，然后结合漏斗法或浅盘法进行分离（具体操作按照SN/T2757)。
8.1.2植物组织中线虫的分离
将植物材料（茎干、根、叶柄等)切成小段，大小约2cm，用漏斗法或浅盘法进行分离（具体操作按照SN/T2757)。
8.2体视显微镜镜检
分离获得的水样在体视显微镜
8.3生物显微镜观察、摄影和测量验查，初步观察线虫的形态结构，挑取或吸取疑似短颈剑线虫。将线虫置于载玻片上制成临时玻片或永久玻片，在生物显微镜下仔细观察其形态特征并对整体形态、齿尖针、尾部形态、雌虫生殖系统及雄虫交合刺等进行摄影，并测量相应的测计值。9形态鉴定特征
9.1美洲剑线虫组的主要鉴别特征雌虫虫体热杀死后呈“C”形或螺旋形：唇区圆，与身体连接处平展或有不同程度缢缩；矛线型食道，齿尖针强壮，60μm～200μm；双生殖管，子宫中无z\分化现象，卵巢反折；V值为42%~65%；尾短，雄虫少见，有5枚或超过5枚中腹交配乳突，最后一c<2.5，宽圆或圆锥形，有的种略显有有一指状突。
枚一般位于交合刺所在区域，其他特征与雌虫相似。美洲剑线虫组线虫的分类检索表参见附录B。9.2短颈剑线虫形态特征（参见附录C)9.2.1
成熟雌虫形态特征
短颈剑线虫成熟雌虫主要形态特征如下，1800μm~2200μm；
热杀死后虫体呈“C”形或者螺旋形，体长为12.25μm~14.75μm；
唇区与虫体连接处略缩，唇区基部宽约为齿针和导环结构典型，齿尖针全长为136μm~168um，齿尖针长84.7μm~108.2μm，齿针延伸部分长为48μm~60μm；
食道基部膨大，与肠分界明显，食道球呈圆柱状；阴门横裂，位于虫体体长的50%左右。阴道长占所在位置体宽的1/3；双生殖腺，对生，均发育完全，卵巢转折覆盖输卵管；尾短锥形，透明区呈轻微指状凸起，尾长为肛门处体宽的0.661.11倍。9.2.2成熟雄虫形态特征
短颈剑线虫成熟雄虫主要形态特征如下：热杀死后虫体呈螺旋形，体长为1965uμm～2191um，体前部与雌虫相似；齿尖针和导环结构典型，后导环距体前端距离为102.25μm；泄殖腔前一共有5个腹中交配乳突；交合刺矛线型，长约为41μm~55uμm；尾呈短锥形，比雌虫的长，约是肛门处体宽的1.12倍，尾部透明区也呈轻微指状凸起。3
SN/T4171—2015
幼虫形态特征
短颈剑线虫幼虫主要形态特征如下：除生殖系统均未发育完全，其他特征与成虫相似；虫体热杀死后呈“C”型，随龄期增长身体弯曲程度加大；唇区微缩；
尾锥形，随着龄期增长尾长基本不变，尾宽增加；尾尖圆，有轻微指状凸起。
短颈剑线虫测计值
短颈剑线虫测计值见表1。
形态指标
Odontostyle/μm
Odontophone/μm
GR/μm
Tail/μm
LipW/μm
BWGR/μm
BWOB/μm
VBW/μm
Spicules
短颈剑线虫测计值
测量值
17早 Lamberti et al.(1991)
2100±100(1800~2200)
44.5±23(40.7~50.1)
6.4±0.6(5.4~7.7)
77.8±0.6(60.394.0)
1.0±0.06(0.9~1.1)
53.0±0.9(51.0~54.0)
101.9±7.2(84.7~108.2)
57.0±2.9(48.8~60.0)
86.3±5.6(72.3~92.3)
26.8±2.0(24.1~31.2)
8.0±0.9(5.9~9.4)
11.5±0.5(10.612.3)
29.8±1.5(27.1~31.8)
39.4±2.9(35.3~45.3)
46.6±3.4(39.4~50.0)
4 Shesh Kumari (2010)
2059±97(1965~2191)
45.7±3.81(41.3~49.1)
6.1±0.53(5.7~6.7)
80.2±6.29(72.8~82.0)
1.03±0.10(0.93~1.14)
93±4.86(88~99)
55±3.10(51~58)
30±2.22(27~32)
8±2.22（5~10)
13±0.50(12~13)
31±0.82(30~32)
48±6.22(41~55)
注：以上早早引自Lamberti etal.(1991)，引自SheshKumari(2010)，—表示空白
短颈剑线虫与近似种的区别
在剑属线虫中，短颈剑线虫（X.brevicollum）与X.incognitum、X.paramonoui形态上极为相似，其主要区别见表2。
形态特征
头部特征
尾部特征
短颈剑线虫与近似种的主要形态区别X.brevicollum
唇区与身体连接处微缢缩
短锥形，尾尖透明区呈轻微指状突起1800μm~2200μm
24μm~31μm
结果判断
X.incognitum
唇区半圆形，微缢缩
锥形，尾端角质层厚，背凸起，无指状突1700μm~2100μm
27μm~31μm
SN/T4171—2015
X.paramonovi
唇区与体壁不连续，缢缩
尾末端圆
2000μm~2300μm
>32μm
主要依据雌、雄虫的形态特征作为该虫的鉴定依据，符合第9章形态鉴定特征及测计值的线虫可判定为短颈剑线虫，其寄主和地理分布（参见附录A)等信息可供参考11
样品保存bZxz.net
若鉴定为短颈剑线虫，则将剩余的线虫杀死、固定制成永久玻片保存；也可以用4%甲醛固定后长期保存。标签上应注明样品编号、种名、寄主、产地、制作人和制作时间等。对已鉴定出带有短颈剑线虫的植物材料，要保存在5℃10℃及防鼠防虫处，并标明样品编号、截获日期、截获人、寄主名称、运输工具名称、输出国名等，样品需至少保存6个月，以备复验、谈判和仲裁。SN/T4171—2015
短颈剑线虫的寄主
附录A
（资料性附录）
短颈剑线虫的寄主和分布
大叶相思（Acaciaauriculaeformis）、羊蹄甲（Bauhiniablakeana）、秋枫（Bischofiajavanica）、柑橘（Citrusreticulata）、咖啡（Coffeaarabica）、龙眼（Dimorcarrpuslongan）、红背桂（Ercoecariacochinchinensis）、草莓（Fragariaananassa）番茄（Lycopersiconesculentum）、灰木莲（Magnoliaceaeglanca）、悬钩子（Rubusspp.）、鸡蛋花（Plumeriarubra）、石楠（Photiniaserrulata）、樱桃（Prunuspseudocerasus）、梨（Pyrusspp.）葡萄(Vitisspp.）等A.2
短颈剑线虫的分布
欧洲：俄罗斯、西班牙、保加利亚、意大利、匈牙利、波兰、斯洛伐克、罗马尼亚；非洲：毛里求斯、南非、肯尼亚、马拉维：美洲：美国、巴西、委内瑞拉、秘鲁、洪都拉斯：亚洲：乌兹别克斯坦、以色列。S
（资料性附录）
美洲剑线虫组多歧检索表
美洲剑线虫组多歧检索表见表B.1。表B.1
Xiphinema
X.bacaniboia
X.himalayense
X.inaequale
X.laevistriatum
X.neoamericanumsp.ing.
X.silvaticum
X.americanum sensustricto
X.brevicollum
X.brevisicum
X.bricolense
X.californicum
X.citricolum
X.diffusum
X.duriense
X.floridae
X.fortuitum
X.georgianum
X.incertum
X.incognitum
X.intermedium
X.kosaigudense
X.lambertii
X.longistillum
X.madeirense
X.mesostilum
美洲剑线虫组多歧检索表（引GB/T28091—2011）A
SN/T4171—2015
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