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SN/T 4171-2015

基本信息

标准号: SN/T 4171-2015

中文名称:短颈剑线虫检疫鉴定方法

标准类别:商检行业标准(SN)

标准状态:现行

出版语种:简体中文

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相关标签: 线虫 检疫 鉴定 方法

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标准简介

SN/T 4171-2015.Detection and identification of Xiphinema brevicollum Lordello & Da Costa.
1范围
SN/T 4171规定了出人境植物检疫中短颈剑线虫的检疫鉴定方法。
SN/T 4171适用于出入境植物、花卉、苗木、盆景及其繁殖材料、土壤及栽培介质中短颈剑线虫的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 28091-2011剑线虫 属(传毒种类)检疫鉴定方法
SN/T1157进出境植物苗木检疫规程
SN/T1158进出境植物盆景检疫规程
SN/T 2757植物线 虫检测规范
3符号和缩略语
下列符号和缩略语适用于本文件。
n:测计的标本数;
a:体长/最大体宽;
b:体长/体前端至食道与肠连接处的距离;
c:体长/尾长;
c' :尾长/肛门处体宽;
h:尾后部的透明区长;
L:体长;
Lip w:头部宽度;
Odontophone:齿尖针延伸部长度;
Odontostyle:齿尖针长度;
Tail:尾长;
V:体前端至阴门的距离X100/体长;
VBW:阴门处的体宽;
BWGR:导环处体宽;

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标准内容

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4171—2015
短颈剑线虫检疫鉴定方法
Detection and identification of Xiphinema brevicollum Lordello & DaCosta2015-02-09发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2015-09-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国珠海出人境检验检疫局,SN/T4171—2015
本标准主要起草人:迟远丽、廖力、王岚、徐森锋、权永兵、黄永辉、张卫东、陈其文I
1范围
短颈剑线虫检疫鉴定方法
本标准规定了出人境植物检疫中短颈剑线虫的检疫鉴定方法。SN/T4171—2015
本标准适用于出人境植物、花卉、苗木、盆景及其繁殖材料、土壤及栽培介质中短颈剑线虫的检疫鉴定。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T28091一2011剑线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法SN/T1157进出境植物苗木检疫规程SN/T1158进出境植物盆景检疫规程SN/T2757
3符号和缩略语
植物线虫检测规范
下列符号和缩略语适用于本文件。n:测计的标本数;
a:体长/最大体宽;
b:体长/体前端至食道与肠连接处的距离;c:体长/尾长;
c:尾长/肛门处体宽;
h:尾后部的透明区长;
L:体长;
Lipw:头部宽度;
Odontophone:齿尖针延伸部长度;Odontostyle:齿尖针长度;
Tail:尾长;
V:体前端至阴门的距离×100/体长;VBW:阴门处的体宽;
BWGR:导环处体宽;
BWOB:食道基部体宽;
GR:导环至体前端的距离;
Spicules:交合刺的长度
基本信息
中文名称:短颈剑线虫。
SN/T4171—2015
学名:XiphinemabrevicollumLordello&.DaCosta,196l。异名:X.saopaoloenseKhan&.Ahmad,1975,X.americanumApudCarvalho,1955,1962,X.diffusumLamberti&Bleve-Zacheo,1979(n.syn.),X.paruumLamberti,Ciancio,Agostinelli&.Coiro,1992(n.syn.),X.pseudoguirani Lamberti,Ciancio,Agostinelli&.Coiro,1992(n.syn.),Xguirani ApudLamberti&.Bleve-Zacheo,1979,X.SheriLamberti &.Bleve-Zacheo,1979(n.syn.),X.tayloriLamberti,Ciancio,Agostinelli&.Coiro,1992(n.syn.)。分类地位:线虫门(Nematoda),无侧尾腺纲(Adenophorea),矛线目Dorylaimida),矛线亚目(Dorylaimina),矛线总科(Dorylaimoidea),长针科(Longidoridae),剑亚科(Xiphinematinae),剑属(Xiphinema),美洲剑线虫组(Xiphinemaamericanum-group)。短颈剑线虫是一种非常重要的植物寄生线虫,主要危害寄主植物的根部,引起根部组织变黑,皮层增厚,侧根增生,长势变弱,造成根系肿大或坏死。短颈剑线虫主要通过带根苗木、土壤及栽培介质传播扩散,雌、雄虫形态学特征是该虫检验鉴定的主要依据,寄主范围、地理分布等信息可供参考(参见附录A)。5方法原理
根据形态特征描述和形态特征测计值采用Hunt(1993)的长针科分类系统进行线虫的分类鉴定。6
仪器、用具和试剂
6.1仪器
生物显微镜、体视显微镜(具透射光源)、恒温培养箱、冰箱、离心机6.2用具
钟面皿或培养血、盖玻片、载玻片、挑针、酒精灯、线虫滤纸或纱布、500uL塑料管、漏斗、漏斗架、乳胶管、止水夹、加热板、水桶、分样筛(60目~300目)、移液器、干燥器、记号笔。6.3试剂
4%甲醛、甘油、指甲油、石蜡、溶液I(96%乙醇:甘油:蒸馏水=20:1:79)、溶液Ⅱ(甘油:96%乙醇=1:19)。
7现场检疫
对植物种苗的根、茎根、根状茎等地下部分材料进行检查,观察苗木的生长状况,根部为害状,以及是否带介质、土壤等。重点选取根部组织变黑,皮层增厚,侧根增生,长势变弱,根系肿大或坏死等症状的苗木及根际介质或土壤,如无可疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋,标记后及时送实验室检验,
具体抽样比例按SN/T1157和SN/T1158执行。8实验室检验
线虫分离
8.1.1土壤或介质中线虫的分离
线虫的分离采用改进的过筛法:将约500g土样置于水桶中,捏碎土块并加水搅拌均匀,形成土壤2
SN/T4171—2015
悬浮液,静置约30s后将上清液通过60目的分离筛,将悬浮液注人新的水桶中,再静置约30s,再将土壤悬浮液经过300目的分样筛,收集筛上的残留物,然后结合漏斗法或浅盘法进行分离(具体操作按照SN/T2757)。
8.1.2植物组织中线虫的分离
将植物材料(茎干、根、叶柄等)切成小段,大小约2cm,用漏斗法或浅盘法进行分离(具体操作按照SN/T2757)。
8.2体视显微镜镜检
分离获得的水样在体视显微镜
8.3生物显微镜观察、摄影和测量验查,初步观察线虫的形态结构,挑取或吸取疑似短颈剑线虫。将线虫置于载玻片上制成临时玻片或永久玻片,在生物显微镜下仔细观察其形态特征并对整体形态、齿尖针、尾部形态、雌虫生殖系统及雄虫交合刺等进行摄影,并测量相应的测计值。9形态鉴定特征
9.1美洲剑线虫组的主要鉴别特征雌虫虫体热杀死后呈“C”形或螺旋形:唇区圆,与身体连接处平展或有不同程度缢缩;矛线型食道,齿尖针强壮,60μm~200μm;双生殖管,子宫中无z\分化现象,卵巢反折;V值为42%~65%;尾短,雄虫少见,有5枚或超过5枚中腹交配乳突,最后一c<2.5,宽圆或圆锥形,有的种略显有有一指状突。
枚一般位于交合刺所在区域,其他特征与雌虫相似。美洲剑线虫组线虫的分类检索表参见附录B。9.2短颈剑线虫形态特征(参见附录C)9.2.1
成熟雌虫形态特征
短颈剑线虫成熟雌虫主要形态特征如下,1800μm~2200μm;
热杀死后虫体呈“C”形或者螺旋形,体长为12.25μm~14.75μm;
唇区与虫体连接处略缩,唇区基部宽约为齿针和导环结构典型,齿尖针全长为136μm~168um,齿尖针长84.7μm~108.2μm,齿针延伸部分长为48μm~60μm;
食道基部膨大,与肠分界明显,食道球呈圆柱状;阴门横裂,位于虫体体长的50%左右。阴道长占所在位置体宽的1/3;双生殖腺,对生,均发育完全,卵巢转折覆盖输卵管;尾短锥形,透明区呈轻微指状凸起,尾长为肛门处体宽的0.661.11倍。9.2.2成熟雄虫形态特征
短颈剑线虫成熟雄虫主要形态特征如下:热杀死后虫体呈螺旋形,体长为1965uμm~2191um,体前部与雌虫相似;齿尖针和导环结构典型,后导环距体前端距离为102.25μm;泄殖腔前一共有5个腹中交配乳突;交合刺矛线型,长约为41μm~55uμm;尾呈短锥形,比雌虫的长,约是肛门处体宽的1.12倍,尾部透明区也呈轻微指状凸起。3
SN/T4171—2015
幼虫形态特征
短颈剑线虫幼虫主要形态特征如下:除生殖系统均未发育完全,其他特征与成虫相似;虫体热杀死后呈“C”型,随龄期增长身体弯曲程度加大;唇区微缩;
尾锥形,随着龄期增长尾长基本不变,尾宽增加;尾尖圆,有轻微指状凸起。
短颈剑线虫测计值
短颈剑线虫测计值见表1。
形态指标
Odontostyle/μm
Odontophone/μm
GR/μm
Tail/μm
LipW/μm
BWGR/μm
BWOB/μm
VBW/μm
Spicules
短颈剑线虫测计值
测量值
17早 Lamberti et al.(1991)
2100±100(1800~2200)
44.5±23(40.7~50.1)
6.4±0.6(5.4~7.7)
77.8±0.6(60.394.0)
1.0±0.06(0.9~1.1)
53.0±0.9(51.0~54.0)
101.9±7.2(84.7~108.2)
57.0±2.9(48.8~60.0)
86.3±5.6(72.3~92.3)
26.8±2.0(24.1~31.2)
8.0±0.9(5.9~9.4)
11.5±0.5(10.612.3)
29.8±1.5(27.1~31.8)
39.4±2.9(35.3~45.3)
46.6±3.4(39.4~50.0)
4 Shesh Kumari (2010)
2059±97(1965~2191)
45.7±3.81(41.3~49.1)
6.1±0.53(5.7~6.7)
80.2±6.29(72.8~82.0)
1.03±0.10(0.93~1.14)
93±4.86(88~99)
55±3.10(51~58)
30±2.22(27~32)
8±2.22(5~10)
13±0.50(12~13)
31±0.82(30~32)
48±6.22(41~55)
注:以上早早引自Lamberti etal.(1991),引自SheshKumari(2010),—表示空白
短颈剑线虫与近似种的区别
在剑属线虫中,短颈剑线虫(X.brevicollum)与X.incognitum、X.paramonoui形态上极为相似,其主要区别见表2。
形态特征
头部特征
尾部特征
短颈剑线虫与近似种的主要形态区别X.brevicollum
唇区与身体连接处微缢缩
短锥形,尾尖透明区呈轻微指状突起1800μm~2200μm
24μm~31μm
结果判断
X.incognitum
唇区半圆形,微缢缩
锥形,尾端角质层厚,背凸起,无指状突1700μm~2100μm
27μm~31μm
SN/T4171—2015
X.paramonovi
唇区与体壁不连续,缢缩
尾末端圆
2000μm~2300μm
>32μm
主要依据雌、雄虫的形态特征作为该虫的鉴定依据,符合第9章形态鉴定特征及测计值的线虫可判定为短颈剑线虫,其寄主和地理分布(参见附录A)等信息可供参考11
样品保存
若鉴定为短颈剑线虫,则将剩余的线虫杀死、固定制成永久玻片保存;也可以用4%甲醛固定后长期保存。标签上应注明样品编号、种名、寄主、产地、制作人和制作时间等。对已鉴定出带有短颈剑线虫的植物材料,要保存在5℃10℃及防鼠防虫处,并标明样品编号、截获日期、截获人、寄主名称、运输工具名称、输出国名等,样品需至少保存6个月,以备复验、谈判和仲裁。SN/T4171—2015
短颈剑线虫的寄主
附录A
(资料性附录)
短颈剑线虫的寄主和分布
大叶相思(Acaciaauriculaeformis)、羊蹄甲(Bauhiniablakeana)、秋枫(Bischofiajavanica)、柑橘(Citrusreticulata)、咖啡(Coffeaarabica)、龙眼(Dimorcarrpuslongan)、红背桂(Ercoecariacochinchinensis)、草莓(Fragariaananassa)番茄(Lycopersiconesculentum)、灰木莲(Magnoliaceaeglanca)、悬钩子(Rubusspp.)、鸡蛋花(Plumeriarubra)、石楠(Photiniaserrulata)、樱桃(Prunuspseudocerasus)、梨(Pyrusspp.)葡萄(Vitisspp.)等A.2
短颈剑线虫的分布
欧洲:俄罗斯、西班牙、保加利亚、意大利、匈牙利、波兰、斯洛伐克、罗马尼亚;非洲:毛里求斯、南非、肯尼亚、马拉维:美洲:美国、巴西、委内瑞拉、秘鲁、洪都拉斯:亚洲:乌兹别克斯坦、以色列。S
(资料性附录)
美洲剑线虫组多歧检索表
美洲剑线虫组多歧检索表见表B.1。表B.1bzxz.net
Xiphinema
X.bacaniboia
X.himalayense
X.inaequale
X.laevistriatum
X.neoamericanumsp.ing.
X.silvaticum
X.americanum sensustricto
X.brevicollum
X.brevisicum
X.bricolense
X.californicum
X.citricolum
X.diffusum
X.duriense
X.floridae
X.fortuitum
X.georgianum
X.incertum
X.incognitum
X.intermedium
X.kosaigudense
X.lambertii
X.longistillum
X.madeirense
X.mesostilum
美洲剑线虫组多歧检索表(引GB/T28091—2011)A
SN/T4171—2015
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