SN/T 4655-2016.Determination of glyphosate and its metablize residues in foodstuffs for export-HPLC-MS/MS method.
1范围
SN/T 4655规定了出口食品中草甘膦及其代谢物(氨甲基磷酸)残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
SN/T 4655适用于茶叶、小麦、玉米、稻谷、甘蔗、大豆、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、西瓜、大麦茶、棉籽油中草甘膦及其代谢物残(氨甲基磷酸)残留量的检测和确证。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
试样用水提取,经透析袋.RP柱及石墨化碳黑吸附剂净化,用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。
4试剂材料
除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
4.1 甲醇，色谱纯。
4.2乙腈,色谱纯。
4.3 乙酸铵，色谱纯。
4.4乙酸 铵溶液(5 mmol/L,pH:10~11):准确称取3.855 g(精确至0.000 1 g)乙酸铵,用水定容至50 mL,配制成1 mol/L乙酸铵溶液:再取其中5 mL,用水定容至1 000 mL,氨水调节pH至10~11。
4.5标准物质 :草甘膦( glyphosate,GLY ,CAS: 1071-83-6) ,纯度≥98.0% ;氨甲基磷酸(aminomethyl phosphonic acid, AMPA ,CAS: 1066-51-9) ,纯度≥98.0%。
4.6 透析袋:直径22 mm,压平宽度(半周长)34 mm,截留分子量3 500 Da。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T4655—2016
出口食品中草甘膦及其代谢物残留量测定方法
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of glyphosate and its metablize residuesinfoodstuffsforexport-HPLC-MS/MSmethod2016-08-23发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2017-03-01实施
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。SN/T4655-2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心、宁波出入境检验检疫局、福建出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：徐敦明、陈树兵、吴敏、杜凤君、余宇成、刘正才、张缙、张志刚。I
1范围
出口食品中草甘麟及其代谢物残留量测定方法液相色谱-质谱/质谱法SN/T4655—2016
本标准规定了出口食品中草甘麟及其代谢物（氨甲基磷酸）残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本标准适用于茶叶、小麦、玉米、稻谷、甘蔗、大豆、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、西瓜、大麦茶、棉籽油中草甘膦及其代谢物残（氨甲基磷酸)残留量的检测和确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要
试样用水提取，经透析袋、RP柱及石墨化碳黑吸附剂净化，用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。
4试剂材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇，色谱纯。
4.2乙腈，色谱纯。
4.3乙酸铵，色谱纯
4.4乙酸铵溶液（5mmol/L，pH：10~11）：准确称取3.855g（精确至0.0001g）乙酸铵，用水定容至50mL，配制成1mol/L乙酸铵溶液：再取其中5mL，用水定容至1000mL，氨水调节pH至10~11。4.5标准物质：草甘麟（glyphosate，GLY，CAS：1071-83-6），纯度≥98.0%；氨甲基磷酸（aminomethyphosphonicacid,AMPA,CAS:1066-51-9)，纯度≥98.0%。4.6透析袋：直径22mm，压平宽度（半周长）34mm，截留分子量3500Da。4.7标准品溶液的配制：准确称取GLY和AMPA标准品各10mg，用水定容至10mL，配置成浓度为1mg/mL的标准储备溶液。
4.8·标准储备的配制：吸取标准品溶液，用水稀释，分别配制成浓度为10ug/mL的标准储备液。4.9标准工作溶液的配制：根据需要，临用时吸取一定量的标准储备液，用水溶液稀释成适当浓度的混合标准工作溶液。
4.10透析袋处理：用剪刀剪至10cm~20cm小段，用水煮沸10min，二次水洗净，保存至乙醇中；使用前后均用二次水清洗净。
4.11OnGuardRP柱（1.0cc柱）：使用前5mL甲醇、5mL水活化，静置半小时；使用后甲醇清洗1
SN/T4655—2016
保存。
4.12石墨化碳黑吸附剂（GCB)：40μm～60um，ProElut填料，或相当者。4.13
微孔滤膜：0.22μm，有机系，聚四氟乙烯（PTFE)膜。仪器与设备
液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI)。电子天平：感量分别为0.01g，0.0001g。组织捣碎机。
粉碎机。
均质器：15000r/min。
离心机：5000r/min以上。
高速离心机：15000r/min以上
超声仪。
离心管：50mL。
试管：50mL
注射器。
涡漩混勾器。
氮吹仪。
试样制备与保存
试样制备
液体样品
液体样品混匀备用。
果蔬类
取代表性样品约500g，将其切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混勾，装人洁净容器，密封，标明标记。
6.1.3粮谷类和茶叶类
取代表性样品约500g，用粉碎机粉碎，过20目筛，混匀，装人洁净容器，密封，标明标记。6.2试样保存
将试样于一5℃以下避光保存。
注：在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7
分析步骤
液体样品、粮谷类、及果蔬样品称取试样4g（精确到0.01g），于50mL离心管（5.9）中，加人6mL2
SN/T4655—2016
水，于高速（15000r/min）均质器（5.5）上均质3min，以15000r/min离心（5.7）5min，收集水相，用水定容至10mL。
茶叶类样品称取试样2g（精确到0.01g），于50mL离心管（5.9）中，加人10mL水，于高速（15000r/min）均质器（5.5）上均质3min，将离心管以15000r/min离心（5.7)5min，收集上层液，用水定容至10mL。
7.2净化
取样品提取液10mL加人经活化了的透析袋（4.10）中，并将透析袋置于已加人10mL水的50mL试管（5.10)中，超声（5.8)1h。取出透析袋，从玻璃管中取出5mL残液，用5mL注射器（5.11)注人已活化的RP柱（4.11），弃去RP柱前2mL流出液，用5mL离心管收集后3mL流出液；加入20mgGCB(4.12），旋窝震荡2min后于15000r/min离心5min，取2ml上清液至洁净的玻璃管中60℃下氮吹（5.13）至干，残渣用0.5mL的水溶液溶解：过聚四氟乙烯（PTFE）膜，供液相色谱-质谱/质谱仪(LC-MS/MS)分析。
液相色谱-质谱/质谱条件
液相色谱-质谱/质谱条件如下
色谱柱：NH2P-502D柱，长150mm，内径2.0mm，粒径5μm或相当者；流动相：A：5mmol/L乙酸铵水溶液（氨水调pH10~11），B：乙睛溶液；流速：0.25mL/min，梯度洗脱程序见表1；
柱温：35℃；
进样量：10μL；
离子源：电喷雾（ESI)；
扫描方式：负离子；
监测方式：多反应监测MRM
质谱条件参见附录A。
表1流动相梯度洗脱程序
时间/min
色谱测定
定性测定
流动相A/%
流动相B/%
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，样品的质量色谱峰保留时间与标准品中3
SN/T4655—2016
对应的保留时间一致；且样品中各组分定性离子的相对丰度与接近浓度的标准工作溶液中相应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
7.3.2.2定量测定
>20%~50%
>10%~20%
≤10%
在仪器最佳工作条件下，对标准工作溶液进样。用标准工作曲线按外标法定量，样品溶液中被测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。根据试样中被测样液的含量情况，选取响应值相近的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内，如果待测物含量超过线性范围，则重新取样分析，用水稀释到线性范围内后分析。在上述色谱条件下GLY和AMPA的参考保留时间约为4.68min和4.20min，标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图参见附录B。7.4空白试验
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。8
结果计算和表达
结果用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中草甘麟和氨甲基磷酸的残留量：X=c×V×10×1000
mx×1000
式中：
X一一试样中草甘麟或氨甲基磷酸残留含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；标准工作溶液中草甘麟或氨甲基磷酸的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V
样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；-试样称取质量，单位为克（g）。m
注：计算结果应扣除空白值。
9测定低限和回收率
9.1测定低限
本方法对草甘麟和氨甲基磷酸残留量的测定低限均为50ug/kg。9.2
2回收率
不同添加浓度范围内回收率的实验数据，见表3。..(1)
草甘麟
本方法添加浓度及回收率范围（n=6）回收率范围
氨甲基膦酸
76.4%~88.3%
83.2%~90.6%
82.9%~97.0%
78.9%~89.2%
86.2%~93.5%
82.6%~89.5%
94.9%~104.1%
80.8%~96.2%
89.3%~94.2%
95.4%~101.4%
76.3%~89.3%
83.9%~95.1%
90.6%~99.3%
78.3%~89.4%
86.9%~97.3%
97.3%~105.4%
79.5%~89.9%
80.8%~94.0%
89.4%~93.7%
85.9%~96.3%
77.2%~89.8%
89.0%~97.9%
90.7%~98.2%
79.2%~88.5%
85.7%~96.8%
84.5%~96.3%
79.9%~90.1%
89.9%~99.1%
86.1%~95.7%
90.6%~98.2%
83.1%~95.2%
89.4%~97.2%
89.3%~94.5%
80.2%~92.8%
87.4%~94.9%
97.2%~102.3%
77.8%~90.3%
86.9%~94.2%
89.4%~99.2%
82.7%~92.7%
87.4%~93.0%
86.3%~90.4%
85.1%~91.4%
80.9%~93.8%
87.3%~94.6%
89.9%~97.2%
草甘麟
SN/T4655-2016
回收率范围
氨甲基膦酸
77.3%~84.9%
89.4%~99.2%
90.4%~97.3%
83.6%~93.2%
90.3%~97.2%
91.8%~97.6%
93.8%~99.7%Www.bzxZ.net
78.8%~86.3%
88.3%~95.8%
86.9%~99.0%
80.2%~93.2%
89.5%101.7%
85.3%~97.8%
78.3%~89.2%
87.0%~93.5%
84.9%~97.6%
82.5%~92.8%
81.3%~90.1%
84.7%~94.7%
84.2%~97.8%
77.2%~92.9%
79.8%~90.4%
88.2%~96.0%
82.4%~90.2%
85.9%~94.7%
91.3%~96.3%
84.8%~94.2%
91.2%~97.4%
89.8%~96.6%
91.0%~98.7%
79.3%~90.2%
89.9%~97.0%
90.3%~103.4%
76.6%~83.2%
85.3%~92.7%
90.2%~96.7%
80.5%~92.7%
84.6%~92.6%
81.0%~89.5%
83.2%~92.8%
84.9%~90.4%
86.3%~92.9%
86.3%~97.8%
79.2%~93.1%
78.4%~87.4%
85.2%~89.9%
SN/T4655—2016
参考条件1
电离源方式：电喷雾电离；
扫描方式：负离子模式
监测方式：多反应监测干燥气温度（DGT)：200℃；
干燥气流速（DGF）：14L/mm；
雾化器压力（GS1）：20PSI（氮气）鞘流气温度（SGT）：250℃（氮气）鞘流气流速：11L/min；
离子源喷雾电压IS：一
喷嘴电压：-2000V；
2500V:
附录A
（资料性附录）
参考质谱条件
定性离子对（m/α）、定量离子对（m/2），碎裂电压（V），碰撞食能量（eV），保留时间见表A.1。表A.1
多反应监测参数表1
组分名称
草甘麟
氨甲基膦酸
定性离子对
167.8/63.0
167.8/81.0
167.8/124.0
110.0/63.0
110.0/79.0
110.0/81.0
参考条件2
定量离子对
167.8/63.0
110.0/63.0
电离源方式：电喷雾电离；
扫描方式：负离子模式；
监测方式：多反应监测(MRM)；
碰撞气流速比(CAD)：4；
气帘气压力（CUR）：35；
雾化器压力（GS1）：60Psi（氮气）；驻留时间
碎裂电压
(Frag)/V
碰撞能量
(CE)/ev
保留时间
非商业性声明：表A.1所列参考质谱条件是在Agilent6490QQQMS/MS型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。g)
加热辅助气（GS2)：60Psi(氮气)；雾化温度：550℃；
离子源喷雾电压IS：-4500.0；
SN/T4655—2016
定性离子对（m/）、定量离子对（m/），去簇电压（V），人口电压（V），碰撞能量（eV），碰撞池出口电压（V），保留时间见表A.2。表A.2
组分名称
草甘麟
氨甲基
定性离子对
167.8/63.0
167.8/124.0
167.8/150.0
167.8/81.0
110.0/63.0
110.0/79.0
110.0/81.0
定量离子对
110.0/63.0
多反应监测参数表2
驻留时间
去簇电压
(DP)/V
人口电压
(EP)/V
碰撞能量
(CE)/eV
碰撞池
出口电压
(CXP)/V
非商业性声明：表A.2所列参考质谱条件是在API4000+LC/MS/MS型液质联用仪上完成的，此处列出试验考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器用仪器型号仅为提供参考
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