中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4853.3—2017 转基因大米定量检测 数字PCR法 第3部分：科丰6号品系 (Quantitative detection of genetically modified rice Digital PCR—Part 3: Event KF6) 2017-07-21发布 2018-03-01实施 SN/T4853《转基因大米定量检测数字PCR法》系列标准共分为7部分： 第1部分：TT51-1品系； 第2部分：克稻品系； 第3部分：科丰6号品系； 第4部分：M12品系； 第5部分：LL62品系； 第6部分：T2A-1品系； 第7部分：T1C-19品系。 前言 本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。 本部分主要起草人：黄文胜、陈颖、邓婷婷、吴亚君、付伟、聂丹丹、朱水芳、韩建勋、李想。 1 范围 本部分规定了稻谷和大米中科丰6号品系的数字PCR定量检测方法。本部分适用于稻谷和大米中科丰6号品系特异性的数字PCR定量检测。本方法的定量检测低限（LOQ）为0.1%（质量分数）。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 19495.1 转基因产品检测通用要求和定义 GB/T 19495.2 转基因产品检测实验室技术要求 GB/T 19495.3 转基因产品检测核酸提取纯化方法 GB/T 19495.5 转基因产品检测核酸定量PCR检测方法 GB/T 19495.7 转基因产品检测抽样和制样方法 SN/T 1194 植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法 3 术语和定义、缩略语 3.1 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 SPS基因 (The gene of sucrose phosphate synthase)：蔗糖磷酸合成酶基因，大米单拷贝内参照基因。 3.1.2 科丰6号转化体特异性序列 (event-specific sequence of KF6)：外源DNA插入受体大米基因组后经重组产生的邻接区序列。具体序列参见附录A。 3.1.3 Taq酶 (Taq DNA polymerase)：源于水生栖热菌的耐热DNA聚合酶。 3.1.4 模板 (template)：数字PCR引物/探针扩增检测的特定DNA片段。 3.1.5 定量检测低限 (limit of quantification; LoQ)：在相对标准差不超过25%的条件下，检测方法所能定量的最低转基因成分百分含量。 3.1.6 质控样品 (quality control sample)：具有确定的SPS基因和转化体特异性序列拷贝数的基因组DNA。 3.1.7 微反应体系 (tiny reaction system)：将含有模板、引物/荧光探针、耐热DNA复制酶及其缓冲液充分混匀之后分配至体积相同且相互物理隔离的油包水液滴或其他微孔、微室中所形成的小体积荧光PCR反应体系。 3.1.8 转换系数 (Conversion factor)：将转化体特异性序列和内参照基因拷贝数之比转换为转基因成分含量（质量分数）时所用系数。 3.1.9 荧光标记探针 (Fluorescently tagged probe)：在5'末端和3'末端分别连接荧光报告基团和淬灭基团的寡核苷酸。PCR扩增时，Taq酶的5'-3外切酶活性将探针水解，使报告基团和淬灭基团分离，从而释放出荧光信号。 3.2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 数字PCR：数字聚合酶链式反应 (digital polymerase chain reaction) DNA：脱氧核糖核酸 (deoxyribonucleic acid) dNTP：脱氧核苷酸三磷酸 (deoxyribonucleoside triphosphate) bp：碱基对 (base pair) NC：阴性对照 (negative control) NTC：空白对照 (no template control) PC：阳性对照 (positive control) 4 防污染措施