SN/T 4848.2—2017 出口蜂蜜中常见蜜源植物成分的检测方法 实时荧光PCR法 第2部分：油菜 Identification of common honey plant species in export honey-Real-time PCR method-Part 2: Canola 发布日期：2017-07-21 实施日期：2018-03-01 前言 SN/T 4848《出口蜂蜜中常见蜜源植物成分的检测方法》共分为8个部分：第1部分：荆条；第2部分：油菜；第3部分：洋槐；第4部分：椴树；第5部分：槐树；第6部分：龙眼；第7部分：荔枝和龙眼；第8部分：紫云英。 本部分为SN/T 4848的第2部分。 本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。 本部分主要起草人：吴亚君、陈颖、刘鸣畅、杨艳歌、张九凯、韩建勋、王斌、李想、黄文胜。 1 范围 SN/T 4848.2—2017规定了出口蜂蜜中油菜成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于出口蜂蜜中油菜（质量百分比）的检测。方法的最低检出限(LOD)为0.1%。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB 14963—2011 食品安全国家标准 蜂蜜 GB/T 27403—2018 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 蜂蜜 honey：蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质。 3.2 油菜 canola：油菜（Brassica campestris L.）又名油白菜、苦菜，十字花科芸薹属植物，属十字花科白菜变种。 3.3 实时荧光PCR real-time PCR：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程，实现对起始模板的定量及定性分析。 3.4 Ct值 cycle threshold：每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid） PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction） dNTP：脱氧核苷酸三磷酸（deoxynucleoside triphosphate） dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosine triphosphate） dCTP：脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidine triphosphate） dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosine triphosphate） dTTP：脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidine triphosphate） UNG：尿嘧啶N-糖基化酶（uracil N-glycosylase） CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammonium bromide） Tris：三羟甲基氨基甲烷 [Tris(hydroxymethyl)aminomethane] EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylenediaminetetraacetic acid） Taq：水生栖热菌（Thermusa aquaticus） OD：光度密度（optical density） FAM：羧基荧光素（Carboxyfluorescein） TAMRA：羧基四甲基罗丹明（Carboxy-tetramethyl-rhodamine） BHQ1：黑洞猝灭基团1（Black hole quencher 1） 5 方法提要 提取样品DNA，以油菜来源DNA为阳性对照，以其它蜜源植物DNA为阴性对照，无菌水作为空白对照，采用油菜的特异性引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象判定是否存在油菜成分。 6 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T 6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。 6.1 检测用引物和探针：油菜成分扩增引物和探针、内参照（显花植物NADH基因）引物和